大鼠脑室出血后脑干蓝斑内去甲肾上腺素能神经元表达变化的研究

目的观察大鼠脑室出血后脑干蓝斑(LC)内去甲肾上腺素能神经元的表达变化,探讨其在脑室出血中的损伤作用,对诊断疾病、预测病情及预后有实际的临床意义。方法将60只大鼠随机分为正常组、假手术组、脑室出血组(IVH组)。IVH组取自体动脉血方法制备PIVH模型,假手术组大鼠只切开头皮和颅骨钻孔,不做自体动脉血注射。分别在术后5个时间点取脑干蓝斑染色,并计数DBH阳性细胞数。结果 IVH组蓝斑内出现大量深染的DBH阳性神经元细胞,形态与正常组、假手术组相似,染色加深,阳性细胞数较正常组、假手术组在6h、1d、3d、5d、7d显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论蓝斑是神经系统去甲肾上腺素(NE)的最重要来源,同时50%的去甲肾上腺素能神经元分布在蓝斑,IVH后,蓝斑内DBH阳性神经元表达增加,脑干组织去甲肾上腺素含量增加,去甲肾上腺素在脑室出血后脑组织损伤中可能起重要作用,并对外周组织产生继发性损害,导致病情加重。     

去铁敏对大鼠脑室出血后慢性脑积水与脑组织Wnt1、Wnt3a表达的影响

目的 观察去铁敏对大鼠脑室出血(IVH)后脑积水的干预效果及脑组织Wnt1、Wnt3a的表达影响.方法 雄性SD大鼠130只随机分为正常组、假性IVH组、IVH组及IVH加去铁敏组.采用脑室出血后慢性脑积水大鼠模型,于术后1 d、7 d及28 d处死大鼠,观察脑积水的发生率和脑组织中Wnt基因及蛋白表达情况.结果 正常组、假性IVH组未见脑积水发生,IVH组28 d脑积水发生率80%(12/15),显著高于IVH加去铁敏组28 d脑积水发生率20%(3/15).IVH后Wnt1、Wnt3amRNA及蛋白表达在7 d及28 d均显著高于假性IVH组,而去铁敏治疗组Wnt1、Wnt3a mRNA及蛋白表达在28 d较IVH组均显著降低.结论 去铁敏治疗可降低大鼠IVH后慢性脑积水发生率,Wnt信号通路参与了IVH后脑积水发生及去铁敏干预机制.     

去铁敏对大鼠脑室出血后慢性脑积水与脑组织Wnt1、Wnt3a表达的影响

目的 观察去铁敏对大鼠脑室出血(IVH)后脑积水的干预效果及脑组织Wnt1、Wnt3a的表达影响.方法 雄性SD大鼠130只随机分为正常组、假性IVH组、IVH组及IVH加去铁敏组.采用脑室出血后慢性脑积水大鼠模型,于术后1 d、7 d及28 d处死大鼠,观察脑积水的发生率和脑组织中Wnt基因及蛋白表达情况.结果 正常组、假性IVH组未见脑积水发生,IVH组28 d脑积水发生率80%(12/15),显著高于IVH加去铁敏组28 d脑积水发生率20%(3/15).IVH后Wnt1、Wnt3amRNA及蛋白表达在7 d及28 d均显著高于假性IVH组,而去铁敏治疗组Wnt1、Wnt3a mRNA及蛋白表达在28 d较IVH组均显著降低.结论 去铁敏治疗可降低大鼠IVH后慢性脑积水发生率,Wnt信号通路参与了IVH后脑积水发生及去铁敏干预机制.     

精氨酸加压素对大鼠脑水肿形成及水孔蛋白-4表达的影响

目的 探讨精氨酸加压素(AVP)对大鼠脑水肿形成和水孔蛋白-4(AQP4)表达的影响.方法 90只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术6 h、1 d、3 d、5 d组及AVP6 h、1 d、3 d、5 d组.于大鼠侧脑室注射AVP后,分别于相应时间点对脑室周围组织进行脑含水量测定,免疫组化技术检测脑室周围组织AQP4的表达.结果 假手术组与正常对照组脑组织含水量及AQP4表达未见增加.AVP组大鼠侧脑室注射AVP 6 h脑室周围脑组织含水量开始增加,1 d即达高峰,与正常对照组比较差异有统计学意义(均P＜0.01),5 d降到基础水平;脑室周围AQP4表达亦在注射AVP 6 h开始增加,1 d即达高峰,与正常对照组比较差异有统计学意义(均P＜0.01),第5 d恢复到基础水平,与脑水肿的变化相一致.结论 AVP可上调AQP4表达,引起大鼠脑含水量增加,导致脑水肿的发生.     

大鼠脑室出血后脑铁代谢与脑积水发生关系的研究

目的 观察脑室出血后铁离子和铁蛋白的动态变化,及去铁敏治疗前后慢性脑积水的发生率.方法 SD雄性大鼠170只,随机分为5组:正常对照组、假性脑室出血组、脑室出血组、侧脑室注铁离子组及脑室出血加去铁敏组.以前肉后0.4 mm冠状面的侧脑室宽度评价脑积水的发生率,以亚铁嗪法测量大鼠脑脊液铁离子含量,以ELISA试剂盒测量脑组织铁蛋白含量.结果 正常对照组、假性脑室出血组无脑积水发生,脑室出血组、侧脑室注铁离子组、脑室出血加去铁敏组28 d时脑积水发生率分别为80％、73％、20％,脑室出血加去铁敏组脑积水发生率显著低于脑室出血组和侧脑室注铁离子组(P＜0.01).脑脊液中铁离子含量和脑组织中铁蛋白在脑室出血组和侧脑室注铁离子组中各个时相点均显著高于假性脑室出血组(P＜0.01);脑室出血加去铁敏组铁离子含量在各个时相点,及铁蛋白在7、28d时均显著低于脑室出血组(P＜0.01).结论 大鼠脑室出血后脑脊液和脑组织铁含量明显升高,去铁敏可降低脑脊液中铁离子和脑组织中铁蛋白含量,降低脑积水的发生率.     

大鼠脑干出血后血清S100B表达与血肿周围组织的超微结构改变

目的 研究大鼠脑干出血后血清S100B的表达及其与行为学改变、脑水肿的关系.观察血肿周围组织超微结构在脑干水肿形成中的变化.方法 利用立体定向技术制作大鼠脑干出血模型,采用双抗体夹心ELISA法检测脑干出血后血清S100B蛋白含量,干湿重法检测脑组织含水量,电镜观察脑干出血后血肿周围组织超微结构的变化.结果 与假手术组比较,出血组在脑干出血后6h血清S100B含量、行为学改变、脑组织含水量增高,48 h达高峰,之后开始下降;脑干出血后血清S100B蛋白含量、脑组织含水量、行为学改变三者之间相互存在关联(P＜0.05).脑干出血后血肿周围组织电镜观察:脑干出血后6h星形胶质细胞胞体和周边足突轻度肿胀,48 h可见星形胶质细胞肿胀明显且部分胞浆呈空泡样改变;髓鞘部分有剥离现象,并有线粒体嵴断裂及空泡样变.结论 脑干出血后血清S100B含量、行为学改变、脑组织含水量三者之间相互呈正相关,提示脑干出血后高水平的S100B蛋白参与脑干出血后脑水肿的形成.     

高温对重型颅脑损伤后乳酸、Na+-K+-ATP酶和脑水肿的影响

目的 探讨大鼠重型颅脑损伤后高温对伤灶区脑组织乳酸、Na+-K+-ATP酶和脑水肿的影响.方法 90只SD大鼠随机分为假手术组、颅脑损伤组、伤后高温组,每组又按处死时间点(伤后4 h、1 d、3 d、5 d和7 d)分为五个亚组,每亚组6只.取伤灶区脑组织测含水量、乳酸含量和Na+-K+-ATP酶活性并行电镜检查.结果 高温组脑组织含水量和乳酸含量在伤后各时间点均显著高于颅脑损伤组和假手术组(P＜0.05),而Na+-K+-ATP酶含量显著低于颅脑损伤组和假手术组(P＜0.05),电镜检查发现高温组神经细胞肿胀、血脑屏障破坏程度较颅脑损伤组明显加重.结论 颅脑损伤后高温增加脑组织乳酸生成,同时Na+-K+-ATP酶活性下降,脑水肿加重,故在颅脑损伤后应保持体温在正常范围内,避免体温升高.     

大鼠脑室出血后急性期脑损伤病理特点的初步探讨

目的 初步探讨大鼠脑室出血后急性期脑损伤的病理特点. 方法 健康成年雄性SD大鼠38只按随机数字表法分为对照组和脑室出血组,分别采用立体定向技术向右侧脑室内注入生理盐水200 μL或自体股动脉血200 μL手术建模.术后24 h观察大鼠体质量减轻情况,采用小动物Micro-CT扫描及大体标本脑室切面观察脑室铸型;采用干湿重法测定术后24 h大鼠脑组织含水量;采用伊文思蓝染色法(24 h时)和IgG免疫荧光染色法(48 h时)观察大鼠血脑屏障损伤情况.结果 术后24 h时脑室出血组体质量减轻(5.29％±0.59％)明显高于对照组(3.36％±1.10％),差异有统计学意义(P＜0.05).脑室出血组Micro-CT扫描及脑室切面可见脑室积血铸型并明显扩张.脑室出血组双侧大脑半球脑组织含水量(左侧:78.25％±0.29％;右侧:78.46％±0.21％)均明显高于对照组(左侧:77.64％±0.25％;右侧:77.91％±0.10％),差异有统计学意义(P＜0.05).术后24 h时脑室出血组伊文思蓝脑组织渗出量明显高于对照组,48h时脑室出血组侧脑室脉络丛免疫球蛋白IgG表达明显高于对照组. 结论 脑室出血后脑损伤除脑积水外还存在急性脑水肿、血脑屏障损伤等病理损害,其可能是脑室出血后除继发脑积水外急性脑损伤的重要环节.     

高温对重型颅脑损伤后乳酸、Na^＋－K^＋－ATP酶和脑水肿的影响

目的探讨大鼠重型颅脑损伤后高温对伤灶区脑组织乳酸、Na^＋－K^＋－ATP酶和脑水肿的影响。方法90只SD大鼠随机分为假手术组、颅脑损伤组、伤后高温组，每组又按处死时间点（伤后4h、1d、3d、5d和7d）分为五个亚组，每亚组6只。取伤灶区脑组织测含水量、乳酸含量和Na^＋－K^＋－ATP酶活性并行电镜检查。结果高温组脑组织含水量和乳酸含量在伤后各时间点均显著高于颅脑损伤组和假手术组（P〈0.05），而Na^＋－K^＋－ATP酶含量显著低于颅脑损伤组和假手术组（P〈0.05），电镜检查发现高温组神经细胞肿胀、血脑屏障破坏程度较颅脑损伤组明显加重。结论颅脑损伤后高温增加脑组织乳酸生成，同时Na^＋－K^＋－ATP酶活性下降，脑水肿加重，故在颅脑损伤后应保持体温在正常范围内，避免体温升高。     

白果内酯对高血糖大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察白果内酯对高血糖大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 采用50%的葡萄糖溶液腹腔注射(6 ml/kg)建立急性高血糖模型.采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,按随机数字表方法将40只大鼠分为高血糖假手术组(假手术组),高血糖+缺血再灌注损伤组(模型组),高血糖+缺血再灌注损伤+白果内酯组(白果内酯组),白果内酯分三个剂量组(2.5,5,10 mg/kg),每组各8只.白果内酯组于术前3 d连续给予白果内酯腹腔注射,术前1 h再给予腹腔注射1次.脑缺血2 h,再灌注24 h后行神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑含水量测定,同时测定脑组织中水通道蛋白-4(AQP4)mRNA的表达,超氧化物歧化酶(SOD)的活力,计算脑组织中丙二醛(MDA)的含量及去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)的表达.结果 白果内酯(5,10 mg/kg)组大鼠与模型组相比,神经功能缺损评分下降,脑梗死体积缩小,脑含水量降低,缺血侧脑组织中AQP4 mRNA的表达下调,SOD活力提高,MDA含量减低,NE、DA及5-HT的含量增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 白果内酯对高血糖条件下的局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

Immune activation after intraventricular hemorrhage

ObjectivesIntraventricular hemorrhage (IVH) is a subtype of stroke which has high mortality and morbidity, while comprehensive mechanism investigations and effective therapies are still in great need. Plenty of studies have shown that inflammation after stroke plays a critical role in disease outcomes. However, the inflammation after IVH remains unclear. This study aims to observe the immune response after IVH, thus providing therapeutic targets for IVH treatments.Materials and methodsIVH was induced by autologous blood infusion model in SD rats. Totally 588 rats were assigned either in the sham or IVH group. T2* lesion and hemoglobin quantities, ventricular volume, brain edema, ventricular wall damage, blood-brain-barrier (BBB) continuity and immune response were observed by magnetic resonance image (MRI), hematoxylin-eosin staining (HE), Evans Blue, flow cytometry (FACS), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) at baseline, 6 h, 1 d, 3 d, 7 d, 14 d after surgery.ResultsWe found that ventricular volume enlargement occurred hours after IVH and peaked at 3 d after IVH, then mildly reduced till 14 d. Similar changes happened in brain edema, ventricular wall damage and BBB leakage. Immune cells and cytokines in the central nervous system and peripheral blood also increased after IVH and experienced similar trends as ventricular enlargement. T2* lesion and hemoglobin degradation occurred 6 h after IVH and kept decreasing till 14 d after IVH.ConclusionsOur investigation illustrates that immune response exists after IVH, which may have a close relationship with disease outcomes. These results may provide promising immune related clues for mechanism and intervention studies in IVH.     

Periventricular/intraventricular hemorrhage in neonatal mouse cerebrum

Periventricular/intraventricular hemorrhage (PVH/IVH) into brain can occur in premature infants and is associated with poor developmental outcome. The purpose of this study was to develop and characterize a model of PVH/IVH in newborn mouse. We hypothesized that periventricular germinal matrix would exhibit reduced cell proliferation. PVH/IVH was induced in 1-day-old mice by injection of autologous blood into the periventricular tissue. Magnetic resonance images (MRI) were obtained from 15 minutes to 14 days later. Mice were killed 4 hours to 28 days later. Cell proliferation, dying cells, astrocyte and microglial reactions, neutrophils, and lymphocytes were quantified. Histological studies showed that MRI accurately localizes the hematoma but overestimates its size. The hematoma, located in the striatum and germinal tissue, always extended into the lateral ventricles. Cell proliferation, measured by Ki67 immunoreactivity, was suppressed bilaterally in germinal matrix and beyond from 8 hours to 7 days. Increased cell death was observed in the ipsilateral striatum and germinal matrix 1 and 2 days after PVH/IVH. Astrocyte and microglia reaction peaked at 2 days and persisted up to 28 days. Inflammatory response was minimal. Extravasated blood might play an important role in brain damage following PVH/IVH through suppression of cell proliferation.     

Cerebral blood flow velocity in preterm neonates

The postnatal changes of cerebral blood flow velocity in 35 preterm neonates with or without complications were measured with a bidirectional Doppler flow meter. In the cases without complications, the pulsatility index for the anterior cerebral artery (ACA-PI) was high shortly after birth, and gradually decreased after 6 hrs as that in normal term neonates. However ACA-PI showed large variations in the cases with respiratory distress. On the other hand, ACA-PI in the cases with subependymal hemorrhage (SEH) was low during the first 6 hrs after birth, and thereafter showed no significant changes. ACA-PI in the cases with intraventricular hemorrhage (IVH) was high during the first 6 hrs after birth and then decreased when IVH was found on ultrasound scanning. ACA-PI increased gradually with progression of post-hemorrhagic ventricular dilatation. The difference of high PI in IVH and low PI in SEH during the first few hrs after birth suggests that the pathogenesis of SEH may be different from the mechanism of intraventricular rupture from SEH. Low PI values in the infants with SEH may be related to intrapartum events, while the changing patterns of high to low PI in the infants with IVH suggest postnatal hemodynamic changes.     

脑室出血大鼠不同部位脑组织热休克蛋白70表达的差异

目的 观察实验性大鼠脑室出血后,不同部位脑组织热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）表达的差异。方法 18只成熟雄性SD大鼠随机均分为正常组、对照组和模型组,采用侧脑室注血法制备大鼠脑室出血动物模型,然后用酶联免疫吸附方法制作热休克蛋白70组织切片,在显微镜下直接计数阳性细胞;采用干湿重法计算脑含水量。结果 模型组大鼠脑组织HSP70阳性细胞数和含水量明显高于正常组和对照组（P分别为0.015和0.013）,而且HSP70阳性细胞主要分布于皮层和皮层下,室周也有表达。结论 大鼠脑室内出血可引起远隔部位的皮层和皮层下组织HSP70的高度表达。     

Tissue plasminogen activator for the treatment of intraventricular hematoma: the dose-effect relationship

In this study, we investigated the dose-effect relationship and safety of tissue plasminogen activator (tPA) for the treatment of intraventricular hemorrhage/hematoma (IVH) in rats. Adult male Sprague-Dawley rats were injected with autologous blood into the left lateral ventricle to establish IVH. Two hours later, Ringer's saline or 0.25-2 microg of tPA were administered directly to the IVH over 3 h. The regional cerebral blood flow (rCBF) on the surface of the left parietal cortex was measured with laser Doppler flowmetry. Twenty-four hours after the build-up of IVH, the brains were removed for morphometrical and histological studies. A dose of 0.5-2 microg tPA significantly diminished the IVH in a dose-dependent manner (p < 0.001). However, only the dose of 0.5 microg tPA significantly ameliorated the reduction of rCBF 24 h after IVH (p < 0.01). TPA did not improve the ventricular dilatation on the side with IVH. Instead, 1-2 microg of tPA caused additional injuries, including intraventricular leukocytosis and edema of periventricular tissues and choroid plexus on both hemispheres. These results indicate that higher doses of tPA may have detrimental effects on the brain. The dosage rate of 0.5 microg seems beneficial to treat 5 microl of IVH (equals to a dose of 0.1 mg/ml blood) in our model in terms of the satisfactory fibrinolysis and less damage to the brain.     

大鼠脑室系统出血模型的建立

目的 探讨建立稳定、制作过程简单、创伤小的大鼠脑室系统出血模型的方法 . 方法 取大鼠自体动脉血立体定向下注入右侧侧脑室建立大鼠腩室系统出血模型,对模型组和对照组大鼠在不同时间点进行神经行为学评分,并观察脑室及室周脑组织病理变化. 结果本方法 模型成功率为88.9%(16/18),注血后6h大鼠出现行为异常,7d后行为异常好转;光镜下观察发现注血后24h模型组大鼠室管膜连续性遭到破坏,细胞间隙增宽,室周脑组织轻度水肿及出现红色坏死神经元. 结论 本研究采用的造模方法 模型稳定,制作创伤小,病理变化接近临床.     

大鼠脑室系统出血模型的建立

目的 探讨建立稳定、制作过程简单、创伤小的大鼠脑室系统出血模型的方法 . 方法 取大鼠自体动脉血立体定向下注入右侧侧脑室建立大鼠腩室系统出血模型,对模型组和对照组大鼠在不同时间点进行神经行为学评分,并观察脑室及室周脑组织病理变化. 结果本方法 模型成功率为88.9%(16/18),注血后6h大鼠出现行为异常,7d后行为异常好转;光镜下观察发现注血后24h模型组大鼠室管膜连续性遭到破坏,细胞间隙增宽,室周脑组织轻度水肿及出现红色坏死神经元. 结论 本研究采用的造模方法 模型稳定,制作创伤小,病理变化接近临床.     

大鼠脑室系统出血模型的建立

目的 探讨建立稳定、制作过程简单、创伤小的大鼠脑室系统出血模型的方法 . 方法 取大鼠自体动脉血立体定向下注入右侧侧脑室建立大鼠腩室系统出血模型,对模型组和对照组大鼠在不同时间点进行神经行为学评分,并观察脑室及室周脑组织病理变化. 结果本方法 模型成功率为88.9%(16/18),注血后6h大鼠出现行为异常,7d后行为异常好转;光镜下观察发现注血后24h模型组大鼠室管膜连续性遭到破坏,细胞间隙增宽,室周脑组织轻度水肿及出现红色坏死神经元. 结论 本研究采用的造模方法 模型稳定,制作创伤小,病理变化接近临床.     

大鼠脑室系统出血模型的建立

目的 探讨建立稳定、制作过程简单、创伤小的大鼠脑室系统出血模型的方法 . 方法 取大鼠自体动脉血立体定向下注入右侧侧脑室建立大鼠腩室系统出血模型,对模型组和对照组大鼠在不同时间点进行神经行为学评分,并观察脑室及室周脑组织病理变化. 结果本方法 模型成功率为88.9%(16/18),注血后6h大鼠出现行为异常,7d后行为异常好转;光镜下观察发现注血后24h模型组大鼠室管膜连续性遭到破坏,细胞间隙增宽,室周脑组织轻度水肿及出现红色坏死神经元. 结论 本研究采用的造模方法 模型稳定,制作创伤小,病理变化接近临床.     

大鼠脑室系统出血模型的建立

目的 探讨建立稳定、制作过程简单、创伤小的大鼠脑室系统出血模型的方法 . 方法 取大鼠自体动脉血立体定向下注入右侧侧脑室建立大鼠腩室系统出血模型,对模型组和对照组大鼠在不同时间点进行神经行为学评分,并观察脑室及室周脑组织病理变化. 结果本方法 模型成功率为88.9%(16/18),注血后6h大鼠出现行为异常,7d后行为异常好转;光镜下观察发现注血后24h模型组大鼠室管膜连续性遭到破坏,细胞间隙增宽,室周脑组织轻度水肿及出现红色坏死神经元. 结论 本研究采用的造模方法 模型稳定,制作创伤小,病理变化接近临床.