抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能     

抗金黄色葡萄球菌C_1型肠毒素McAb的制备及初步应用

金葡菌Ｃ１型肠毒素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合选出了能分泌高滴度ＭｃＡｂ的１８个克隆株，对其中１０株进行了鉴定，６株属ＩｇＧ１，４株属ＩｇＧ３。用双抗体夹心法和特异性中和抑制试验比较了ＭｃＡｂ和ＰｃＡｂ的敏感性和特异性，并用制备的ＭｃＡｂ诊断试剂对ＳＥＣＩ污染食品进行了检测应用，可特异检出ｌｕｇＳＥＣ１／０．５ｇ食物／ｍｌ。     

抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素McAb的制备及初步应用

金葡菌Ｃ１型肠毒素免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓细胞融合选出了能分泌高滴度ＭｃＡｂ的１８个克隆株，对其中１０株进行了鉴定，６档属ＩｇＧ１，４株属ＩｇＧ３。用双抗体夹心法和特异性中和抑制试验比较了ＭｃＡｂ和ＰｃＡｂ的敏感性的特异检出１ｎｇ ＳＥＣ１／０．５ｇ食物／ｍｌ。     

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能从复杂的淋球菌菌体崩解物中特异地识别分子量为３５ＫＤａ的ＰＩＡ抗原，与淋球菌ＰＩＢ无交叉反应。     

抗口腔支原体,精氨酸支原体单克隆抗体的制备及其应用方法的初步研究

用口腔支原体，精氨酸支原体抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞（Ｓｐ２／０）融合，获得了７株稳定分泌抗口腔支原体单克隆抗体（ＭｃＡｂ），２株分泌抗精氨酸支原体ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。间接ＥＬＩＳＡ测定其抗体效价可达１：１０＾３～１：１０＾７，９株ＭｃＡｂ中１株为ＩｇＧ２ａ，其余均为ＩｇＧ１。初步建立了ＥＬＩＳＡ检测支原体的方法。     

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体的研制及鉴定

以人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）为抗原，采用脾内免疫法，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞与小鼠Ｓｐ２／０细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法筛选，三次克隆化后获得５株能稳定分泌抗ｃＴｎＴ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５和Ａ７。免疫球蛋白亚类鉴定其中１株为ＩｇＧ２ａ，４株为ＩｇＭ。染色体数目９２～１１０条。将Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５的单克隆抗体腹水做１：１００稀释与ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫＭＢ和ＧＯＴ等心肌酶均无交叉反应。５株ＭｃＡｂ的腹水效价为３．２×１０－６～１．６×１０－７。ＭｃＡｂ相加试验表明，Ａ５和Ｇ３可识别不同的抗原表位。     

抗牛小肠粘膜细胞牛轮状病毒受体单克隆抗体的研究

应用新生牛小肠粘膜细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合，建立１株杂交瘤细胞系５Ｇ１０－Ｂ１１，经连续传代和冻存一年仍能稳定地分泌抗体，ＭｃＡｂ亚类为ＩｇＧ１，杂交瘤细胞培养上清液、鼠免疫血清和腹水的抗体效价分别为１：４０、１：２，５６０和１：５，１２０。经阻断和免疫斑点试验证实为抗牛轮状病毒受体的ＭｃＡｂ。     

抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

采用杂交瘤技术，获得了４株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１κ链。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与人凝血酶、凝血酶原和ＨＣＶ多肽反应。４株杂交瘤细胞培养上清液效价为３．２×１０－２～１．２８×１０－３，腹水效价为１．６×１０－６～５．１２×１０－７。     

分泌抗rHuIL－6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１０（－６）～１０（－８）。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＬ－６，敏感性为１００ｐｇ／ｍｌ。初步应用表明可用于临床标本的检测。     

抗牛小肠粘膜细胞牛轮状病毒受体单克隆抗体的研究

应用新生牛小肠粘膜细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合，建立１株杂交瘤细胞系５Ｇ１０—Ｂ１１，经连续传代和冻存一年仍能稳定地分泌抗体，ＭＣＡｂ亚类为ＩｇＧ１，杂交瘤细胞培养上清液、以免疫血清和腹水的抗体效价分别为１：４０、１：２，５６０和１：５，１２０。经阻断和免疫斑点试验证实为抗斗轮状病毒受体的ＭｃＡｂ。     

抗口腔支原体、精氨酸支原体单克隆抗体的制备及其应用方法的初步研究

用口腔支原体、精氨酸支原体抗原免疫ＢＡＬＧ／ｃ小鼠，取其脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞（Ｓｐ２／０）融合，获得了７株稳定分泌抗口腔支原体单克隆抗体（ＭｃＡｂ），２株分泌抗精氨酸支原体ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。间接ＥＬＩＳＡ测定其抗体效价可达１：１０３～１：１０７；９株ＭｃＡｂ中１株为ＩｇＧ２ａ，其余均为ＩｇＧ１。初步建立了ＥＬＩＳＡ检测支原体的方法。     

抗重组人肿瘤坏死因子－α单克隆抗体的研制及其初步应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术获得１０株抗重组人肿瘤坏死因子－α（ｒＨｕＴＮＦ－α）ＭｃＡｂ。７株ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１，２株为ＩｇＧ２ａ，１株为ＩｇＧ２ａ。１０株ＭｃＡｂ与淋巴毒素（ＬＴ或ｒＨｕＴＮＦ－β）、ｒＨｕＩＬ－６和载体菌菌体蛋白均无交叉反应。其中７株ＭｃＡｂ具有中和活性，７株ＭｃＡｂ能识到天然的ＴＮＦ－α。Ｇ１１和Ｅ６ＭｃＡｂ应用ＡＢＣ法免疫组化染色肝病患者组织细胞片得到明确的阳性结果。用２株识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了一步夹心ＥＬＩＳＡ法，检测ＴＮＦ－α的敏感性可达到１００ｐｇ／ｍｌ左右。     

HIV核心抗原p24检测方法的建立及应用

ＨＩＶ感染的检测在预防ＡＩＤＳ传播方面有重要作用。本研究以重组抗原ｐＧ１免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了５株识别ＨＩＶ核心抗原ｐ２４的杂交瘤细胞株Ｄ３，１Ｈ１，２Ｇ１０，３Ｈ５和４Ｈ６。经鉴定这５株ＭｃＡｂ与其它病毒抗原无交叉反应，分别识别３个不同的抗原表位。应用两株识别不同表位的ＭｃＡｂ２Ｇ１０和３Ｈ５建立了检测ＨＩＶｐ２４抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法，并初步检测了２４份ＨＩＶ抗体阳性血清。     

抗人Ig轻链系列单抗的研制：Ⅲ抗人Ig游离λ型轻链共同抗原决定…

用多例提纯的ＢＪ－λ混合免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，获得３株稳定分泌抗人Ｉｇ游离λ链ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株（ＡＨλＤ８、ＡＨλ１Ｃ１和ＡＨλ２Ｃｌ）。它们分泌的ＭｃＡｂ均能与我室所有１７例ＢＪ－λ起强反应，但不与结合的λ型轻链及Ｋ型轻链反应，表明这３株ＭｃＡｂ可能是抗人Ｉｇ游离λ链共同抗原决定簇的。３株ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１亚类。添加ＥＬＩＳＡ表明它们识别相同的表位。     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

分泌抗登革病毒单抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

将纯化的登革３型病毒（ＤＥＮ－３）单克隆抗体３Ｄ３（ＡｂＩ）连结到载体分子ＫＬＨ上，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。用ＥＬＩＳＡ夹心法检测阳性克隆，融合率达１００％，阳性率为５％，经２－３次克隆化，获得了６株分泌抗登革病毒单抗的独特型抗体（ＭｃＡｂ２）的杂交瘤细胞系。在进行阳性筛选及特异鉴定时，选择了以３－５μｇ／ｍｌ的最适Ａｂ１包被浓度，并用正常小鼠Ｉｇ及ＫＬＨ分     

抗FMOC—苯丙氨酰氨基己酸的单克隆抗体的制备

为了建立新的非放射性基因标记和检测体系，用化学方法合成了Ｆｍｏｃ－苯丙氨酰氨基己酸。然后将其作为半抗原，与载体蛋白偶联（通过ＥＤＣ），用于免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出一株阳性克隆，分泌专一性抗Ｆｍｏｃ－苯丙氨酰氨基己酸的抗体。用双抗体夹心法测得其亚类为ＩｇＧ１。用间接ＥＬＩＳＡ法测得腹水效价为１．６×１０－５。用竞争性ＥＬＩＳＡ法测得亲和常数为３．６×１０６Ｍ－１。     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ，ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０＾－５～１０＾－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳ     

用一种新的免疫方法制备抗NPY单克隆抗体

本文报道了在８淋巴细胞杂交瘤技术中采用脾内微量免疫及腹腔植入联合免疫方法获得了两株分泌抗神经肽Ｙ（ＮＰＹ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系，用ＥＬＩＳＡ法测定腹水ＭｃＡｂ的效价为１０￣（－３）～１０￣（－５）。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与ＡＣＴＨ反应，两种ＭｃＡｂ的亲和常数（Ｋａ）各为１×１０￣９Ｍ￣（－１）和５×１０￣７ｍｏｌ／Ｌ￣（－１），抗原决定簇分析结果表明此两种ＭｃＡｂ针对不同抗原决定簇。     

分泌抗rHuIL—6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（Ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（Ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（Ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡ