LncRNA HOTAIR通过Wnt/β-Catenin信号通路调控NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭

目的探究长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的影响及其分子作用机制。方法采用qRT-PCR法检测NSCLC细胞系A549、H460、H1650中HOTAIR的相对表达。转染干扰序列siRNNA敲降HOTAIR基因表达,验证干扰效率。采用CCk-8法、Transwell实验分别检测敲降HOTAIR表达对A549、H460、H1650细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。通过Western blot检测敲降HOTAIR表达后Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达情况。结果与正常HBE细胞对比,NSCLC细胞系A549、H1650、H460中HOTAIR高表达(P<0.01);敲降HOTAIR表达后,三组细胞系中HOTAIR相对表达水平均较阴性对照组显著降低(P<0.05)。与阴性对照组相比,敲降HOTAIR表达后A549、H1650、H460细胞在各转染时间点的增殖能力受到不同程度抑制(P<0.05),细胞侵袭率、迁移率显著降低(P<0.01);三组细胞系中Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白β-catenin、c-Myc表达水平较阴性对照组和空白对照组显著下调(P<0.05)。结论LncRNA HOTAIR在NSCLC细胞系中高表达,敲降细胞内HOTAIR表达可抑制NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭,其机制可能与Wnt/β-Catenin信号通路活性受抑制有关。     

二甲双胍通过巨噬细胞抑制食管癌TE-1细胞的侵袭和迁移

目的:探究二甲双胍是否通过巨噬细胞抑制食管癌TE-1细胞的侵袭迁移及其可能的分子机制。方法:100 ng/mL PMA诱导THP-1巨噬细胞。取对数生长期TE-1细胞和巨噬细胞,分别用最终浓度为0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L二甲双胍处理,Western blot检测MMP9、VEGF蛋白表达水平,ELISA检测细胞TNF-α和IL-8浓度,筛选二甲双胍最佳作用浓度（2 mmol/L）。分别用100 ng/mL LPS、2 mmol/L二甲双胍、100 ng/mL LPS+2 mmol/L二甲双胍处理巨噬细胞制备条件培养基。将TE-1细胞分为4组:对照组、LPS-条件培养基组（LPS组）、二甲双胍-条件培养基组（Met组）和LPS+二甲双胍-条件培养基组（LPS+Met组）。划痕实验观察各组细胞迁移能力。Transwell小室检测细胞侵袭能力。Western blot检测各组细胞VEGF、E-cad、Vimentin和NEDD9的表达。ELISA检测各组细胞TNF-α和IL-8浓度。结果:与对照组相比,二甲双胍可显著降低TE-1细胞和巨噬细胞中MMP9、VEGF、TNF-α和IL-8水平（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。二甲双胍可显著抑制TE-1细胞迁移和侵袭（P＜0.05）,显著抑制VEGF、Vimentin和NEDD9蛋白表达（P＜0.05）,促进E-cad蛋白表达（P＜0.05）;显著降低TE-1细胞中TNF-α和IL-8水平（P＜0.05）。结论:二甲双胍可通过巨噬细胞降低食管癌TE-1细胞NEDD9的表达,抑制食管癌细胞侵袭迁移。     

石斛酚通过NF-κB/PRL-3 通路抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭

[摘要] 目的: 探讨石斛酚对人成骨肉瘤U20S 细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用及其分子机制。方法：用不同质量浓度（10、25、50、75、100、150 μmol/L）的石斛酚处理U20S 细胞24、48 h 后,用CCK-8 法检测石斛酚对U20S 细胞增殖能力的影响。Transwell 实验检测25、50 μmol/L的石斛酚对U20S 细胞迁移、侵袭能力的影响,在脂多糖（LPS）诱导U20S 细胞炎症反应的基础上,再以石斛酚处理,qPCR、WB法分别检测U20S细胞中NF-κB（p65）、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果：不同质量浓度的石斛酚作用不同时间对肉瘤细胞U20S 增殖均具有抑制作用（P<0.05 或P<0.01）;25、50 μmol/L的石斛酚能够明显抑制骨肉瘤U20S细胞的迁移及侵袭能力（均P<0.01）,同时能够抑制细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 等蛋白的表达（P<0.05 或P<0.01）;LPS诱导后,U20S 细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）,25、50 μmol/L的石斛酚处理后均能够降低U20S细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白的表达水平（P<0.05 或P<0.01）。结论：石斛酚对骨肉瘤U20S细胞增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,其作用机制可能与调控NF-κB/PRL-3 信号通路有关。     

特女贞苷对脂多糖诱导的巨噬细胞促炎反应的抑制作用及机制

目的：探讨特女贞苷(NED)抑制细菌脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞促炎反应的机制。方法：用50μmol/L NED处理RAW264.7巨噬细胞12 h后，采用CCK-8法测定细胞活力，Annexin V-FITC/PI法测定细胞凋亡率，转录组测序分析异常基因表达，免疫荧光检测Nrf2蛋白表达定位。进一步使用100 ng/mL LPS(模型组)与不同浓度(0、12.5、25和50μmol/L)NED联合处理RAW264.7细胞干预12 h后，采用ELISA测定细胞上清液中TNF-α和IL-6含量；实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞TNF-α和IL-6 mRNA的表达；分别采用DCFH-DA、MitoTracker-Green和JC-1染色测定细胞中活性氧、线粒体含量和膜电位；试剂盒测定细胞内抗氧化酶活力、线粒体复合物I和III活性以及ATP合成的变化。结果：与空白对照组相比，50μmol/L NED对巨噬细胞存活和凋亡无明显影响(P>0.05)，但可抑制模型组LPS诱导促炎因子TNF-α、IL-6的表达和分泌(P<0.05)，并增强抗炎因子转录表达(P<0.05)，呈...     

原花青素抑制脂多糖激活神经小胶质细胞的机制

目的：研究原花青素抑制脂多糖（LPS）激活神经小胶质细胞的机制。方法：采用1.0 μg/mL LPS刺激神经小胶质细胞建立体外炎症模型,再用不同浓度（0.1、0.5、2.5、10.0 μg/mL）原花青素进行干预,四甲基噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度原花青素对神经小胶质细胞的毒性,ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,Western blot法检测TLR4、p38、p-p38蛋白的表达。结果：与对照组比较,1.0 μg/mL LPS组TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著升高（P < 0.05）,TLR4和p-p38蛋白表达亦显著增加（P < 0.05）;给予不同浓度原花青素干预后,与1.0 μg/mL LPS组比较,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平均下降（P均 < 0.05）,TLR4和p-p38蛋白表达水平均显著下调（P均 < 0.05）。结论：原花青素可能通过TLR4/p38 MAPK信号通路抑制脂多糖激活神经小胶质细胞。     

正丁酸钠对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-M侵袭、迁移的影响及机制研究

背景与目的：有研究证实,正丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对肿瘤细胞具有抑制增殖、诱导分化和促凋亡的作用,但对涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)的作用机制尚不明确。该研究主要探讨不同浓度NaB对SACC细胞株ACC-M侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法：MTT法探索NaB作用ACC-M细胞的最佳浓度并观察细胞的生长情况,Transwell小室实验检测NaB对ACC-M细胞侵袭、迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测5组浓度药物作用后ACC-M细胞中高迁移率蛋白-1(high mobility group box-1,HMGB1)、toll样受体-4(toll like receptor-4,TLR4)mRNA和蛋白的表达。结果：与对照组相比,加入NaB 0.625、1.25、2.5、5及10 mmol/L的5组均能抑制ACC-M细胞增殖且呈明显浓度依赖性(P<0.05)。5组浓度NaB均可抑制ACC-M细胞体外侵袭和迁移能力(P<0.05),同时能降低ACC-M细胞HMGB1、TLR4 mRNA及蛋白的表达(P<0.05);相关性分析显示TLR4蛋白表达的降低与HMGB1的抑制呈正相关(r=0.810,P<0.05)。结论：NaB可抑制ACC-M细胞增殖,显著降低ACC-M细胞的侵袭和迁移能力,同时降低HMGB1、TLR4 mRNA和蛋白的表达,且2者表达量呈明显正相关,提示NaB可能是通过下调HMGB1、TLR4 mRNA和蛋白的表达来实现对ACC-M细胞侵袭、迁移能力的抑制。     

S180骨肉瘤细胞TLRs表达及其与肿瘤耐受的相关性

目的探讨TLRs在诱导S180骨内瘤细胞免疫耐受中的作用,为肿瘤临床的免疫治疗提供新的思路。方法建立S180腹水癌早晚期模型,采用RT-PCR方法检测体外S180骨肉瘤细胞和荷瘤鼠体内早晚期S180骨肉瘤细胞TLR1-9 mRNA的表达水平,以及LPS体外刺激S180骨肉瘤细胞前后TGF-β和IL-10 mRNA表达变化,ELISA方法检测LPS体外刺激S180骨肉瘤细胞前后肿瘤上清液中TGF-β蛋白分泌的含量。结果体外S180骨肉瘤细胞表达TLR1-7和TLR9,TLR8不表达。荷瘤鼠体内早晚期S180骨肉瘤细胞TLRs的表达不同,TLR4、9表达早期高于晚期,其中TLR4的高表达有统计学意义（P<0.05);TLR1、2、3、5、6和7表达晚期高于早期,但差异无统计学意义(P>0.05)。10μg/ml 的LPS在不同时间点体外刺激S180骨肉瘤细胞后IL-10 mRNA表达水平均上调,且有时间依赖关系,TGF-β在mRNA和蛋白水平也均有增加。结论体外S180骨肉瘤细胞表达多种TLRs,荷瘤鼠体内早晚期S180骨肉瘤细胞TLRs表达的不同在肿瘤发展的不同时期可能发挥不同的作用,S180骨肉瘤细胞TLR4信号通路活化后可能通过促进TGF-β和IL-10的分泌从而参与肿瘤的免疫耐受。     

微小RNA-106a靶向PTEN通路对胃癌细胞的增殖与凋亡的调控作用

目的探讨微小RNA-106a(miR-106a)靶向磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)通路对胃癌细胞的增殖与凋亡的调控作用。方法对数生长期的胃癌BGC-823细胞为三组:miR-106a组、对照组与空白组,分别转染miR-106a mimic、miR-NC与等体系的磷酸盐缓冲液。采用CCK法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭,Western blot检测PTEN蛋白表达,qRT-PCR检测miR-106a表达。结果细胞转染后24 h与48 h,miR-106a组的miR-106a相对表达量显著高于空白组和对照组(P<0.05);与空白组和对照组相比,miR-106a组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、侵袭指数PTEN蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡指数显著增加(P<0.05),而前两组相比差异无统计学意义(P>0.05);与24 h时相比,48 h时三组细胞凋亡、侵袭、迁移指数以及PTEN蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),其余指标仅miR-106a组两个时间点相比差异具有统计学意义(P<0.05),而空白组和对照组相比均不具有统计学意义(P>0.05)。结论miR-106a过表达可通过靶向调控PTEN信号通路,抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,并促进细胞凋亡。     

TLR4促进HIF-1α的高活性在宫颈癌中的作用机制

摘 要：［目的］ 研究Toll 样受体 4( toll-like receptor 4,TLR4)促进低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）的高活性在宫颈癌中的作用及机制。［方法］ 体外培养Siha细胞,分为空白对照组（control组）、脂多糖组（LPS组）、NF-κB信号通路干预组［吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）+LPS组］和TLR4信号干预组（siTLR4+LPS组）共4组,用 MTT法、软琼脂形成实验观察各组细胞的活性增殖、克隆情况;用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测细胞内HIF-1α含量变化;DCFH-DA 法检测活性氧（ROS）含量变化;光泽精化学发光法检测NADPH氧化酶含量变化。 ［结果］ MTT和软琼脂形成实验结果显示：与control组相比,LPS组细胞活性和增殖能力增强,PDTC+LPS组无明显变化,siTLR4+LPS组降低（P<0.05）;与LPS组相比,PDTC+LPS组和siTLR4+LPS组细胞活性和增殖能力均降低（P<0.05）。与PDTC组+LPS组相比,siTLR4+LPS组细胞活性显著减弱（P<0.01）。免疫细胞化学染色和Western blot法结果显示：与control组相比,LPS组HIF-1α活性增强（P<0.05）,siTLR4+LPS组活性降低（P<0.05）;与LPS组相比,PDTC+LPS组HIF-1α表达降低（P<0.05）,siTLR4+LPS组HIF-1α表达明显降低（P<0.01）;与PDTC+LPS组相比,siTLR4+LPS组细胞HIF-1α活性减弱（P<0.05）。NADPH氧化酶和ROS活性检测结果显示：与control组相比,LPS组NADPH氧化酶和ROS活性增强（P<0.05）,siTLR4+LPS组降低（P<0.05）,LPS组与PDTC+LPS组无明显差异。与PDTC+LPS组相比,siTLR4+LPS组NADPH氧化酶和ROS活性均降低（P<0.05）。［结论］ TLR4可通过核因子-κB(NF-κB)信号途径促进宫颈癌的发生和发展,NADPH氧化酶参与TLR4维持细胞内HIF-1α高活性,而此过程与NF-κB信号无关,这为研究宫颈癌的发生发展机制提供新的思路。     

MPPa-PDT抑制骨肉瘤 MG-63细胞侵袭和迁移

目的:探讨焦脱镁叶绿酸-a甲酯介导的光动力疗法(methyl ester pyropheophorbide-a mediated photodynamic thera-PY,MPPa-PDT)对人骨肉瘤MG-63细胞迁移及侵袭的影响及其可能机制.方法:采用CCK-8检测经MPPa-PDT处理后不同时间点的人骨肉瘤MG-63细胞增殖活性;划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blotting检测E-钙黏蛋白(E-cad)和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、-9蛋白的表达水平.结果:MPPa-PDT处理MG-63细胞12、24及48 h后MPPa-PDT组细胞增殖能力明显较对照组、MPPa组和LED组细胞降低(均P＜0.05),且MPPa-PDT组细胞的划痕愈合能力、迁移活力及侵袭能力也较这3组细胞显著下降(均P ＜0.05);MPPa-PDT组细胞E-cad的表达显著高于其他3组,MMP-2、MMP-9的表达则明显低于其他3组(均P＜0.05).结论:MPPa-PDT抑制人骨肉瘤MG-63细胞的侵袭和迁移能力;上调E-cad的表达,下调MMP-2、-9的表达可能是其作用机制之一.     

长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨长链非编码RNA HOTAIR在非小细胞肺癌（NSCLC）组织及4株细胞系（A549、SPC-A1、SK-MES-1和16HBE）中的表达,并分析其对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法通过定量反转录PCR（qRT-PCR）检测HOTAIR在38例NSCLC组织及4株细胞系中的表达水平,并进一步利用过表达和RNA干扰技术探讨HOTAIR的生物学功能。通过分别转染pcDNA-HOTAIR或si-HOTAIR来上调或下调HOTAIR的表达,以空载体（pcDNA3.1-NC）和阴性对照（si-NC）作为对照组,用qRT-PCR检测转染效率。用MTT法和Transwell法评估异常表达的HOTAIR对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 38例NSCLC组织中HOTAIR相对表达水平为24.48±59.55。与正常支气管上皮细胞系16HBE相比,HOTAIR在SPC-A1和SK-MES-1细胞中相对高表达,而在A549细胞中相对低表达。转染HOTAIR siRNA 48h后,A549和SPC-A1细胞中HOTAIR表达下调;转染pcDNA3.1 HOTAIR 48h后,A549细胞中HOTAIR表达上调。MTT实验显示,通过RNAi技术来抑制HOTAIR的表达,对NSCLC细胞的增殖能力无明显影响。Transwell实验显示,通过转染si-HOTAIR来下调HOTAIR表达可抑制癌细胞的迁移和侵袭（P＜0.05）;相反,过表达HOTAIR可以显著促进癌细胞的迁移和侵袭（P＜0.05）。结论 HOTAIR在NSCLC中异常高表达,能显著增强NSCLC细胞的迁移和侵袭能力,提示可能与不良预后相关。     

lncRNA RHPN1-AS1靶向miR-485-5p调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及其分子机制

目的:探讨lncRNA RHPN1反义RNA1（RHPN1-AS1）靶向miR-485-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响和机制。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测20例骨肉瘤组织与其对应的癌旁组织、人正常成骨细胞hFOB1.19以及3种骨肉瘤细胞（U-2OS、SAOS-2、HOS）中RHPN1-AS1和miR-485-5p的表达水平。利用脂质体转染法将RHPN1-AS1小干扰RNA（si-RHPN1-AS1）、小干扰RNA阴性对照（si-NC）、miR-485-5p模拟物（miR-485-5p mimics）、miRNA阴性对照（miR-NC）分别转染U-2OS细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶14（MMP-14）蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RHPN1-AS1和miR-485-5p的靶向调控关系。结果:与癌旁组织比较,骨肉瘤组织中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与hFOB1.19细胞比较,3种骨肉瘤细胞中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-RHPN1-AS1组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表达水平显著降低,p21、p27和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）;与miR-NC组比较,miR-485-5p组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平显著降低,p21和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）。RHPN1-AS1靶向负性调控miR-485-5p表达。干扰miR-485-5p表达逆转了抑制lncRNA RHPN1-AS1表达对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:抑制RHPN1-AS1通过上调miR-485-5p抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。     

lncRNA HOTAIR通过miR-519d-3p/CCND1 分子轴促进乳腺癌SKBR3细胞的恶性生物学行为

目的：探究lncRNA HOTAIR/miR-519d-3p/CCND1 分子轴对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。方法：收集2017 年3 月至2019 年2 月南昌市第三医院乳腺外科手术切除的乳腺癌患者的乳腺癌组织及配对癌旁组织各50 例，qPCR检测癌及癌旁组织中HOTAIR 的表达水平，乳腺正常上皮细胞及乳腺癌细胞系中HOTAIR 和miR-519d-3p 的表达水平。将乳腺癌SKBR3 细胞分为NC 组、si-HOTAIR 组、miR-519d-3p mimics 组，miR-519d-3p mimics+pcHOTAIR 组、miR-519d-3p mimics+pcCCND1 组和si-HOTAIR+pcCCND1 组，CCK-8 法检测各组SKBR3 细胞增殖能力、Transwell 检测细胞侵袭和迁移能力、Western blotting 检测SKBR3 细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 以及CCND1 表达水平。双荧光素酶报告基因检测HOTAIR 和miR-519d-3p 以及miR-519d-3p 和CCND1 的靶向关系。结果：HOTAIR在癌组织以及乳腺癌细胞系中呈高表达，且在SKBR3 细胞系中表达最高。敲降HOTAIR可显著抑制SKBR3 细胞增殖、侵袭和迁移，并显著增加E-cadherin 的表达水平、降低N-cadherin 和Vimentin的表达水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因检测显示，HOTAIR 靶向下调miR-519d-3p 的表达，miR-519d-3p 靶向下调CCND1 的表达。敲降HOTAIR可增强miR-519d-3p 对CCND1 的下调作用，抑制SKBR3 细胞EMT、增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。结论：敲降HOTAIR可抑制SKBR3 细胞增殖和转移，其机制是通过调控miR-519d-3p/CCND1 分子轴实现的。     

FBW7通过Notch信号通路影响骨肉瘤SOSP-9607细胞迁移与侵袭

目的:观察FBW7在骨肉瘤细胞SOSP-9607中的表达,探讨FBW7对骨肉瘤细胞迁移与侵袭的作用以及与Notch信号通路的关系。方法:培养人骨肉瘤SOSP-9607细胞,用慢病毒介导的siRNA转染SOSP-9607细胞,并分为sh-FBW7组（下调FBW7）、up-FBW7组（上调FBW7）和空白对照组。利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印记法（Western blot）验证分析骨肉瘤细胞系SOSP-9607和正常成骨细胞系hFOB中FBW7 mRNA表达和蛋白表达水平。Transwell实验验证FBW7对骨肉瘤细胞迁移与侵袭作用的影响。 Western blot验证FBW7与Notch信号通路的关系。结果:qRT-PCR和Western blot检测结果显示:骨肉瘤细胞系SOSP-9607中FBW7 mRNA表达和蛋白表达明显低于正常成骨细胞系hFOB（P＜0.05）。Transwell结果显示:sh-FBW7组的迁移与侵袭细胞数明显高于空白对照组（P＜0.05）;up-FBW7组的迁移与侵袭细胞数明显低于空白对照组（P＜0.05）。上调骨肉瘤细胞中的FBW7可以抑制Notch1及其靶基因Hes1的表达;下调骨肉瘤细胞中的FBW7可以增加Notch1及其靶基因Hes1的表达。结论:FBW7在骨肉瘤SOSP-9607细胞中低表达,FBW7通过Notch信号通路影响骨肉瘤SOSP-9607细胞迁移与侵袭。     

ROCK2调控骨肉瘤细胞的侵袭及迁移

目的 探讨骨肉瘤组织中ROCK2的表达对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的影响及其作用机制。方法 采用实时荧光定量PCR、Western blot及免疫组织化学染色法检测骨肉瘤组织中ROCK2的表达;沉默骨肉瘤细胞中ROCK2的表达后,采用划痕愈合及Transwell实验分析骨肉瘤细胞的侵袭及迁移能力,并通过尾静脉转移实验检测降低ROCK2表达对体内转移的影响。检测骨肉瘤细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达,并在下调ROCK2的骨肉瘤细胞中加入EMT诱导剂TGF-β,检测其对细胞侵袭及迁移的影响。结果 ROCK2在骨肉瘤组织中的表达显著高于其相应的癌旁组织（P<0.05）,下调骨肉瘤细胞中ROCK2的表达后,其体内外侵袭及迁移能力明显被抑制（P<0.05）;EMT相关蛋白E-cadherin表达下降,而N-cadherin及Vimentin蛋白明显增加;诱导骨肉瘤细胞中EMT发生后能够减弱下调ROCK2对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的抑制作用。结论 ROCK2在骨肉瘤组织中表达升高,通过诱导EMT的发生进而促进骨肉瘤细胞的侵袭及迁移。ROCK2可能是骨肉瘤靶向治疗的潜在生物标志物。     

宫颈癌HeLa细胞外泌体对细胞迁移和侵袭的影响及Wnt或β-catenin信号通路机制研究

目的探讨宫颈癌He La细胞外泌体对细胞迁移和侵袭的影响及Wnt/β-catenin信号通路机制。方法采用胎牛血清派样He La细胞,使用胰蛋白酶消化后培养上清液,离心后磷酸盐缓冲液沉淀,得到He La细胞外泌体。电镜观察外泌体形态表现,Western blottig检测外泌体内蛋白表达情况。检测细胞侵袭能力和迁移能力,检测Wnt/β-catenin信号通路中蛋白表达水平。结果使用透射电镜观察可发现,细胞上清液中有直径为40~100nm、圆形及椭圆形的囊泡状小体,检测后可在其内部发现大量CD63和CD81蛋白,说明He La细胞内物质为外泌体。使用荧光标记He La细胞外泌体,培养24h后,使用聚焦荧光显微镜观察,对照组无标记外分泌附着,研究组有标记外分泌附着。研究组He La细胞侵袭数多于对照组,He La细胞迁移距离长于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。研究组蛋白Wnt1、β-catenin和TCF4表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论宫颈癌He La细胞外泌体能增强肿瘤细胞迁移和侵袭,调控增强Wnt/β-catenin信号通路中蛋白表达。     

UHRF1高表达对膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用分析

目的探讨与分析泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)高表达对膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路的调控作用。方法分别用针对UHRF1的mimic及对照mimic转染膀胱癌细胞系UMUC3,标记为A组、B组,同时以PBS代替转染试剂的为C组。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,qRT-PCR检测mRNA表达,Western blot检测Keap-1/Nrf2通路蛋白表达。结果转染后48 h与72 h,与B组与C组相比,A组UHRF1 mRNA表达量显著增加(P<0.05)。转染后48 h与72 h,与B组与C组相比,A组的细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低,细胞侵袭数目显著增加(P<0.05)。转染后48 h,与B组与C组相比,A组的Keap-1、Nrf2相对表达量显著增加(P<0.05)。结论UHRF1高表达能激活膀胱癌细胞Keap-1/Nrf2通路,从而促进细胞增殖与侵袭,抑制细胞凋亡。