miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖-凋亡的影响

目的探讨miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。方法RT-qPCR检测21例卵巢癌组织及对应癌旁正常卵巢组织中miR-146a表达;将miR-146a模拟物和miR-146a阴性对照转染到卵巢癌SKOV3细胞中,RT-qPCR检测转染后SKOV3细胞中miR-146a的表达;CCK8检测转染后miR-146a对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染后miR-146a对细胞凋亡的影响;Western blot检测SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的表达。结果 miR-146a在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织;转染miR-146a模拟物能显著提高SKOV3细胞miR-146a的表达量,显著降低SKOV3细胞的增殖能力,提高SKOV3细胞的凋亡率,抑制SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的蛋白表达(P0.01)。结论 miR-146a在卵巢癌癌组织低表达,转染miR-146a模拟物能抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。     

miR-19a介导JAK/STAT信号通路促进卵巢癌细胞增殖的研究

目的 探讨miR-19a对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 选取人卵巢癌细胞株SKOV3、正常人卵巢表面上皮细胞HOSEpiC以及30例上皮卵巢癌组织和20例癌旁组织为研究对象.对SKOV3细胞株进行转染,分为NC组(未进行任何处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-19a组(转染miR-19a mimic).MTT检测细胞增殖能力;克隆形成实验检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期;采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌中miR-19a、JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3基因mRNA水平;Western blot检测细胞JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平.结果 卵巢癌组织miR-19a水平高于正常卵巢组织,SKOV3细胞株中miR-19a表达水平高于HOSEpiC细胞(P<0.01).转染后48 h和72 h,与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞增殖能力明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞克隆数目、S期细胞百分比明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞p-JAK2、p-STAT3基因mRNA表达水平,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值明显升高(P<0.05).结论 卵巢癌组织miR-19a高表达,miR-19a过表达可能通过Akt/mTOR通路促进卵巢癌细胞的增殖.     

miR-198在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞增殖作用的机制研究

目的 研究微小RNA-198 (microRNA-198,miR-198)在卵巢癌中的表达水平及对卵巢癌细胞增殖的影响,并探讨其发挥作用的分子机制.方法 采用qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌和正常卵巢组织中的表达水平;t检验分析卵巢癌中miR-198的表达水平与患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-198的表达对癌患者预后的影响;qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌细胞SKOV3、CAOV4、CoC1和正常卵巢上皮细胞IOSE80中的表达;选择低表达miR-198的卵巢癌细胞系,转染miR-198模拟物(mimic),分为对照组NC和实验组miR-198 mimic,qRT-PCR检测各组细胞中miR-198的表达水平;MTS实验检测各组细胞的增殖活性;平板克隆检测各组细胞的克隆形成能力;流式细胞仪检测各组细胞的周期比率;Western blotting检测miR-198对增殖周期相关蛋白CDK4、CDK6、cyclinD1和p21表达的影响.结果 qRT-PCR结果显示miR-198在卵巢癌中的表达低于正常卵巢组织(t=6.55,P＜0.001),且miR-198的表达与患者淋巴结转移和FIGO分期相关(P ＜0.05);miR-198低表达的卵巢癌患者预后较差(x2=4.14,P=0.035).与正常卵巢上皮细胞IOSE80相比,miR-198在卵巢癌细胞SKOV3、CAOV4、CoC1中的表达降低,在SKOV3细胞系中的表达最低(F=59.07,P＜0.001).与对照组NC相比,实验组miR-198 mimic细胞中miR-198的表达增加(t=16.50,P＜0.001),miR-198 mimic组细胞增殖活性和克隆形成能力降低及诱导细胞周期阻滞在G0/G1期(P＜0.05);与对照组NC相比,miR-198 mimic组细胞中CDK4、CDK6和cyclinD1蛋白表达降低,p21蛋白表达增加(P＜0.05).结论 miR-198可能通过调控细胞周期抑制卵巢癌细胞的增殖.miR-198可能是治疗卵巢癌的潜在靶点.     

靶向上皮性卵巢癌SKOV3细胞ZEB1-shRNA重组体构建及功能研究

目的:利用RNA干扰技术,降低人上皮性卵巢癌SKOV3细胞中锌指增强子结合蛋白1(ZEB1)基因的表达,观察ZEB1低表达对SKOV3细胞的生长影响。方法:用pSUPER-EGFP1载体构建针对人ZEB1基因的干扰质粒shZEB1,脂质体转染SKOV3细胞,G418筛选稳定转染细胞株,通过RT-PCR和Western blot检测ZEB1在SKOV3细胞中表达。用克隆形成、划痕试验、RT-PCR和致瘤试验分别检测转染细胞克隆能力、迁移力、miR-200c表达水平和在裸鼠的致瘤性。结果:成功构建shZEB1,稳定转染细胞株shZEB1-SKOV3内ZEB1表达下降,导致shZEB1-SKOV3细胞miR-200c表达增高,克隆能力、迁移力及致瘤性下降。结论:用RNA干扰技术可靶向降低卵巢癌细胞株SKOV3内ZEB1的表达,使其致瘤性降低,提示ZEB1可作为分子靶点用于上皮性卵巢癌靶向治疗。     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

HOXA5通过调控Egr-1抑制体外培养卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的探讨HOXA5对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响及相关机制。方法利用pcDNA.3.1质粒构建重组质粒pcDNA.3.1-HOXA5,转染卵巢癌细胞SKOV3和UACC-1598,过表达HOXA5;Egr-1 siRNA转染过表达HOXA5的卵巢癌细胞,干扰Egr-1表达;qRT-PCR法检测卵巢癌细胞中HOXA5和Egr-1 mRNA的表达量;Western blot法检测卵巢癌细胞中HOXA5和Egr-1的蛋白表达量;BrdU法检测卵巢癌细胞的增殖能力;Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力。结果 HOXA5 mRNA(P0.01)和蛋白表达量(P_(SKOV3)0.01,P_(UACC-1598)0.05)在卵巢癌细胞中的表达量降低;pcDNA.3.1-HOXA5转染卵巢癌细胞,HOXA5 mRNA和蛋白表达量显著升高(P0.01);过表达HOXA5显著抑制卵巢癌细胞的增殖(P0.01)和侵袭能力(P0.01);过表达HOXA5且干扰Egr-1,细胞增殖(P0.01)和侵袭能力(P_(SKOV3)0.01,P_(UACC-1598)0.05)显著提升,抑制了HOXA5过表达时对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响。结论过表达HOXA5可通过调控Egr-1的表达量有效抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力,为卵巢癌的治疗提供一定的理论基础。     

过表达miR-5195-3p对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-5195-3p对Runx相关转录因子3(RUNX3)的靶向调节作用及对结直肠癌细胞凋亡的影响。方法 RT-qPCR和Western blot分别检测结直肠癌组织与癌旁组织中miR-5195-3p和RUNX3蛋白的表达。将人结肠癌细胞系SW480随机分为5组:对照组(control)、miR-5195-3p mimic组、mimic control组、miR-5195-3p inhibitor组、inhibitor control组。Wetsern blot检测RUNX3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。在SW480细胞中转染RUNX3过表达质粒后检测细胞凋亡。结果与癌旁组织中相比,miR-5195-3p在结直肠癌组织中的表达显著升高,RUNX3的蛋白表达明显降低(P0.05)。过表达miR-5195-3p显著下调了SW480细胞中RUNX3的表达,并降低细胞凋亡水平(P0.05);抑制miR-5195-3p明显上调RUNX3的表达,并上调细胞凋亡水平(P0.05)。此外与miR-5195-3p mimic组相比,RUNX3过表达质粒的共转染组显著降低细胞凋亡水平(P0.05)。结论 miR-5195-3p可能作为促癌基因在结直肠癌中发挥作用,其作用与靶向调节RUNX3相关。     

miR-152-3p 靶向TCF4 对人胃癌SGC-7901 细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探究miR-152-3p 对人胃癌SGC鄄7901 细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法:用miR鄄152 类似物(miR-152 mimic) 转染细胞,RT鄄PCR 检测miR-152 及转录因子4(TCF4) 的表达;荧光素酶报告实验证明miR1523p 与TCF4 的靶 向关系;miR-152 mimic 和TCF pcDNA 重组质粒(pc鄄TCF4) 分别或同时转染细胞,Western blot 检测TCF4 的表达,CCK8 检测细 胞增殖情况;流式检测细胞凋亡情况。结果:miR152 mimic 能显著升高SGC鄄7901 细胞miR-1523p 的表达水平,降低TCF4 的 mRNA 水平;同时,miR152 mimic 还能显著降低TCF4 野生型荧光素酶活性;此外,miR-152 mimic 能显著降低SGC-7901 细胞 的增殖倍数,升高细胞凋亡率;pc-TCF4 能显著减弱miR-152 mimic 抑制SGC7901 细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。结论: miR-1523p 能抑制人胃癌SGC7901 细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制与靶向调控TCF4 表达有关。     

卵巢癌组织中miR-574-5p的表达及其下调后对SKOV-3细胞增殖与侵袭的影响

目的观察miR-574-5p在卵巢组织中的表达及下调miR-574-5p表达对卵巢癌细胞株SKOV-3增殖与侵袭的影响。方法实时PCR检测41例卵巢癌组织及对应癌旁正常卵巢组织miR-574-5p的表达;随机将SKOV-3细胞分为空白对照组、阴性对照组和miR-574-5p抑制物组,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。结果卵巢癌组织中miR-574-5p相对表达量为1.29±0.18,显著高于癌旁正常卵巢组织的0.51±0.07(P0.01);转染miR-574-5p抑制物后,SKOV3细胞的增殖能力明显下降,穿膜能力亦明显减弱(P0.01)。结论卵巢癌组织中miR-574-5p的表达水平异常增高,抑制miR-574-5p的表达能够降低SKOV3细胞的增殖与侵袭。     

内皮抑素对人卵巢癌细胞系生长的抑制作用

目的探讨人内皮抑素对人卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法MTT法检测细胞生长;透射电镜观察细胞凋亡;免疫细胞化学、RT-PCR及Western blot法检测细胞中BCL-2和BAX蛋白及mRNA的表达。结果内皮抑素抑制SKOV3细胞增殖(P<0.01);能诱导SKOV3细胞凋亡;而对细胞中BCL-2和BAX蛋白及mRNA的表达无明显影响。结论人内皮抑素具有抑制卵巢癌细胞SKOV3生长的作用,其作用机制可能与诱发细胞凋亡相关。     

miR-141-3p对卵巢癌的作用及其机制

目的:探究miR-141-3p在卵巢癌中的作用及其相关的分子机制.方法:实时荧光定量PCR检测30例卵巢囊肿和30例卵巢癌组织中miR-141-3p和表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平.将SKOV3细胞分为NC组(无转染的SKOV3细胞),miR-141-3p组(SKOV3细胞转染miR-141-3p),LV-EG...     

miR-346 在鼻咽癌中的表达及生物学功能

目的:探讨miR-346 在鼻咽癌中的表达及在鼻咽癌中的生物学功能。方法:收集63 例鼻咽癌组织以及34 例 鼻咽部非癌组织标本,Real-time PCR 检测组织和6 株人鼻咽癌细胞系及1 株人正常鼻咽部永生化上皮细胞株NP69 中miR- 346 表达量,选取人鼻咽癌细胞系中表达量居中的两种细胞系,并转染miR-346 inhibitor,设置对照组(NC 组)并转染阴性对照 质粒,Real-time PCR 检测两种细胞系转染miR鄄346 inhibitor 和对照组miR鄄346 表达量,细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA 和 流式细胞术检测,Transwell 小室实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与鼻咽非癌组织比较,鼻咽癌组织中miR-346 表达量显著升 高(P =0.000);以正常人鼻咽部上皮细胞NP69 比较,各鼻咽癌细胞株中miR-346 相对表达量均显著升高,差异有统计学意义 (P<0.05)。选择6 种鼻咽癌细胞株中miR-346 表达量居中的两种,分别为CNE-1 和CNE-2,转染miR-346 inhibitor 后,两种鼻 咽癌细胞株miR-346 相对表达量均显著降低,与NC 组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两种鼻咽癌细胞转染miR-346 inhibitor 下调miR-346 表达后鼻咽癌细胞的增殖受到抑制,均在转染第3 天差异具有统计学意义(P<0.05)。下调miR-346 表 达后鼻咽癌细胞CNE-1 和CNE-2 的凋亡显著增加,迁移细胞数和侵袭细胞数显著降低,与NC 组比较差异均有统计学意义 (P<0.05)。结论:miR-346 在鼻咽癌中高表达,下调miR-346 表达会抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,miR-346 可 能作为一种癌基因在鼻咽癌的发生和发展中发挥重要的作用。     

miR-26-p 在甲状腺癌中的表达及其功能研究

目的:探讨微小分子核糖核酸(miR)-126-3p 在甲状腺癌中的表达,探讨其生物学功能。方法:RT-PCR 检测35 例甲状腺癌、癌旁组织以及三种甲状腺癌细胞系(TPC-1、FTC-133、8505C)中miR-126-3p 表达量;将甲状腺癌细胞分为类似物组(mimic)和对照组(NC),分别转染miR-126-3p mimic 及阴性对照质粒。两组细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA 法和流式细胞术检测, Transwell 小室法检测两组细胞迁移和侵袭。结果:35 例癌组织中miR-126-3p 相对表达量显著低于癌旁组织(0.384±0.28 vs 0.981±0.039,t =10.291,P<0.05);在三种甲状腺癌细胞中,TPC-1 细胞中miR-126-3p 相对表达量最低;与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 增殖受到显著的抑制,第3 天两组间开始表现出统计学差异(P<0.05);与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 凋亡显著增加[(15.32±3.20)% vs (8.12±1.17)%,t = 4.623,P<0.05],迁移受到抑制(26.68±4.48 vs 82.21±3.65,t=17.789,P<0.05),侵袭受到抑制(12.28±1.03 vs 34.43±2.10,t =8.103,P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中miR-126-3p 表达降低,上调miR-126-3p 表达可以显著抑制甲状腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制迁移和侵袭,miR- 126-3p 可能作为一种抑癌基因在甲状腺癌中发挥重要的生物学功能。     

miRNA-132通过Hedgehog信号通路对肝癌细胞凋亡的作用机制*

目的：探究miRNA-132（miR-132）通过Hedgehog 信号通路对肝细胞癌细胞凋亡的机制。方法：用miR- 132 类似物转染人肝癌HepG2 细胞,将样本分为空白组（ 无转染HepG2）、NC组（HepG2 转染miR-132-NC）、 YJ 组（HepG2 转染miR-132 mimic）。通过qRT-PCR 检测miR-132 在HepG2 细胞中的表达量,采用CCK-8 法、流 式细胞仪、Transwell 小室、免疫印迹检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力以及Shh 蛋白表达。结果：PCR检测结果显示, 3 组对比,YJ 组HepG2 细胞中miR-132 表达量最高,说明转染成功;CCK-8 检测结果显示,YJ 组HepG2 细胞增 殖数量最低,空白组HepG2 细胞的增殖与NC组相似,皆高于YJ 组;流式细胞检测结果显示,与NC组及空白组 比较,YJ 组HepG2 细胞凋亡数量最多 ;Transwell 小室检测结果显示, YJ 组细胞侵袭数量与空白组和NC组相比 明显降低,空白组细胞侵袭数量与NC组相比数据接近;免疫印迹检测结果显示,YJ 组Shh 蛋白相对表达量与空 白组和NC组比明显降低。结论：过表达miR-132 降低Hedgehog 信号通路,可促进人肝癌HepG2 细胞凋亡作用。     

miR-502-3p 通过靶向结合 CBL 抑制卵巢癌增殖并诱导凋亡

目的 探究微小 RNA 502-3p (micro RNA 502-3p, miR-502-3p) 通过靶向结合 Casitas B 细胞淋巴 瘤 (Casitas B-cell lymphoma, CBL) 参与卵巢癌增殖和凋亡的机制。 方法 下载 GSE66957、 GSE119056、 TCGA_ OV 卵巢癌相关数据矩阵, 分析 miR-502-3p、 CBL 与卵巢癌的关系; 构建过表达 miR-502-3p、 CBL 的 SKOV3 和 HO8910 细胞系, 分别采用细胞计数试剂盒 ( cell counting kit 8, CCK-8)、 克隆形成实验、 流 式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况; 通过荷瘤裸鼠实验, 观察过表达 CBL 对肿瘤生长的影响; 验证 miR502-3p 与 CBL 的靶向关系。 结果 生物信息学分析显示, 卵巢癌组织中 CBL 水平高于癌旁组织, miR-502- 3p 水平低于癌旁组织, CBL 水平与患者预后、 细胞增殖基因表达有关 (P< 0. 05)。 miR-502-3p 与 CBL 存在 靶向关系, 与 Vector 组比较, CBL 组肿瘤的体积及重量增加 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-502-3p 组 SKOV3、 HO8910 细胞中 CBL 蛋白表达、 细胞活力、 克隆数降低, 细胞凋亡率升高 (P< 0. 05), 但 CBL 可逆转上述细胞变化。 结论 miR-502-3p 可通过靶向下调 CBL 抑制卵巢癌细胞的增殖, 并诱导其凋亡。     

miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用

目的:研究miR-23a和上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的表达,以及对体外直肠癌细胞活力和凋亡的作用。方法:采用RT-q PCR分析miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁组织中的表达,免疫组化检测ESRP1在直肠癌组织中的表达,分析miR-23a和ESRPl在直肠癌组织中的相关性;利用RT-q PCR检测miR-23a在直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a inhibitor和inhibitor阴性对照(inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞活力的影响,流式细胞术检测转染后细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭;通过Western blot技术检测SW480细胞中ESRPl蛋白的表达;构建野生型pGL3-ESRP1-3’UTR(wt-pGL3-ESRP1-3’UTR)或突变型pGL3-ESRP1-3’UTR(mut-pGL3-ESRP1-3’UTR)质粒,并分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染至HEK293和SW480细胞中,利用双萤光素酶报告基因检测试剂盒说明检测双萤光素酶活性;将ESRP1 mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、caspase-3、Smac和XIAP蛋白表达的影响。结果:miR-23a和ESRP1在直肠癌组织的表达较癌旁正常组织分别上调和下调,两者呈明显负相关(P0.01);miR-23a的表达与直肠癌的淋巴结转移和肿瘤浸润深度相关;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调(P0.01);转染miR-23a inhibitor后,SW480细胞活力较inhibitor NC组显著下降(P0.01);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显升高,同时细胞体外侵袭能力受到抑制;萤光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高;ESRP1 mimic转染SW480细胞后可抑制细胞活力并诱导细胞凋亡,同时上调caspase-3和Smac的表达,下调XIAP的表达。结论:miR-23a可通过负向调控下游靶基因ESRP1从而影响直肠癌细胞生长和凋亡。     

miR-143-3p 靶向MAPK1对人结肠癌细胞增殖，凋亡和侵袭的调节作用#br#

目的　研究miR-143-3p靶向MAPK1与人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的关系。 方法　qRT-PCR检测miR-143-3p mimic转染效果和MAPK1的mRNA表达水平;双荧光素酶报告实验分析miR-143-3p与MAPK1的靶向关系;蛋白质印迹检测MAPK1的蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖倍数,Hoechst染色检测细胞增殖,体外侵袭实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测Ki67、VEGF、MMP-2和cleaved caspase-3的表达。 结果　miR-143-3p mimic抑制人结肠癌细胞SW620中MAPK1 mRNA和蛋白的表达水平;miR-143-3p mimic与MAPK1野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低;miR-143-3p mimic转染SW620细胞后,细胞增殖、侵袭能力显著降低,凋亡细胞数目显著增加,Ki67、VEGF和MMP-2的表达水平显著降低,cl-caspase-3的表达水平显著上升;miR-143-3p mimic能缓解MAPK1高表达对SW620细胞增殖、侵袭的诱导作用和对细胞凋亡的抑制作用。 结论　miR-143-3p抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向抑制MAPK1有关。     

B7-H4基因对SKOV3细胞生长功能的影响

目的： 初步探讨B7-H4基因对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长和致瘤性的影响。方法：RT-PCR法扩增编码基因, 构建真核表达载体PEGFP-N1/B7-H4,以脂质体为载体将重组质粒PEGFP-N1和PEGFP-N1/B7-H4分别导入SKOV3细胞中,筛选建立高表达的细胞株。MTT法绘制体外培养细胞生长曲线,将转染前后的肿瘤细胞分别接种于SCID小鼠的腹部皮下观察其致瘤性。结果：成功构建了人B7-H4真核表达载体,SKOV3/B7-H4细胞高表达B7-H4,转染后肿瘤细胞体外生长速度明显增快。SKOV3/B7-H4细胞在小鼠体内的致瘤性较SKOV3/neo细胞和野生型SKOV3细胞明显升高。结论： B7-H4基因导入细胞后在体外和体内具有明显加快肿瘤生长的作用,可作为肿瘤基因治疗的靶向基因。