结核生物蛋白芯片技术在结核病临床诊断中的价值探讨

目的利用结核生物芯片技术,探讨国产重组结核分枝杆菌蛋白38kD(γTPA38)、16kD(γTPA16)和脂阿拉伯甘露糖(LAM)用于肺结核与肺外结核的早期诊断价值。方法采用CCD原理结合视频采集方法,应用结核生物芯片检测系统,对门诊及住院患者血清标本3448例进行了检测。结果 LAM、16kD、38kD结核生物蛋白芯片联合检测门诊患者782例,阳性219例,阳性率为28.0%(219/782)。住院患者2666例,结核生物蛋白芯片联合检测阳性1368例,阳性率为52.0%(1386/2666)。实验室检查了结核生物蛋白芯片联合检测阳性的1386例住院患者的细菌涂片,其中菌阳患者213例,菌阴患者1155例。还对69例健康人群及肺部其他疾病患者血清标本进行了16kD、38kD、LAM抗体的检测,结果阴性66例,特异性为95.7%(66/69),3448例患者3种抗原联合检测,结果阳性1587例,敏感度为46.0%(1587/3448)。结论结核生物芯片检测系统联合运用16kD、38kD、LAM3种抗原检测其对应的抗体有较好的灵敏度和很高的特异性。对结核病血清学诊断有较高的参考价值。     

结核蛋白芯片检测诊断结核病的价值

目的探讨结核蛋白芯片检测诊断结核病的价值。方法使用结核蛋白芯片系统检测4 093例患者的血清结核抗体,其中结核病441例,非结核病3 652例。采用结核蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌中ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD 5种成分,分析其结果。结果 441例结核患者中297例结核抗体阳性,3 652例非结核患者中,647例阳性,结核蛋白芯片检测的灵敏度为67.35%,特异度为82.28%。结论结核蛋白芯片是诊断结核病的较有效方法,具有特异性好、快速方便等优点,对快速诊断结核病起辅助作用。     

结核病感染状况与抗体特征研究

目的调查活动性结核病和稳定期结核病抗体特征。方法采用ELISA或免疫层析技术,检测活动性肺结核、稳定期肺结核和健康人组血清中抗BCG-PPD、抗结核菌胞内蛋白(IP)、胞壁蛋白(CWP)、分泌蛋白(SP)3、8 kD蛋白和LAM抗原的抗体。结果抗38 kD蛋白抗体、抗LAM抗体与结核活动性密切相关。抗CWP抗体阳性患者化疗效果好。结论抗LAM和抗38 kD蛋白抗体为活动性结核病特征性抗体,CWP组分中含有保护性抗原。     

HSP65在结核病血清学诊断中的应用前景初探

及时准确的诊断对结核病的防控至关重要。虽然简易快速的血清学检测技术在病毒等感染性疾病的诊断中得到广泛应用,但目前临床上结核病的血清学诊断技术尚不理想。我们通过间接ELISA方法比较筛查多个结核分枝杆菌抗原在正常人和活动期结核病患者中的血清学应答水平,发现结核分枝杆菌抗原HSP65（Rv0440）的特异性IgG水平在活动期结核病患者外周血浆中明显高于健康对照组（P〈0.0001）,其检测的灵敏度达90%,特异性达90%,ROC曲线的AUC值达0.978,上述指标均与目前临床上使用的抗38kD（Rv0934）蛋白的IgG水平相当;同时结合结核病患者临床资料分析结果显示抗HSP65的IgG在空洞病变结核病患者中的平均水平显著高于无空洞患者;部分抗38kD IgG抗体阴性的结核病患者中抗HSP65IgG抗体水平呈现阳性,提示抗HSP65IgG可以成为目前商业化抗38kD IgG检测的补充,从而进一步提高结核病诊断的灵敏度。上述研究结果表明抗HSP65IgG抗体有望成为诊断活动期结核病的候选补充血清标志物。     

血清抗结核分枝杆菌抗体检测及其临床意义

为了研究ELISA法测定血清中抗结核杆菌抗体在结核病诊断中的临床意义，本文应用重组结核杆菌38KD蛋白为抗原检测患者血清中抗结核杆菌抗体，发现该方法对结核病的临床诊断有一定的参考价值。现将本室应用ELISA法对70例结核病患者和62例非结核病患者的血清标本的检测结果报告如下。     

三种结核蛋白抗体联合检测在老年早期结核病诊断中的价值研究

选取2012年3月~2014年6月我中心确诊治疗的老年早期结核病患者64例作为结核组,同期选取中心体检健康人员20例作为健康组,所有受试者应用蛋白芯片法检测结核分枝杆菌LAM、16KDa和38Kda抗体,统计分析所有受试者三种结核蛋白抗体表达情况,并分析三种结核蛋白抗体及其联合检测对老年早期结核病的诊断价值。结核组患者LAM、16KDa和38KDa抗体表达阳性率明显高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05);在诊断敏感度、特异度、准确度方面,三种抗体联合检测>单独LAM>单独38KDa检测>单独16KDa检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结核分枝杆菌LAM、16KDa和38KDa抗体均可作为诊断老年早期结核病的重要参考指标,且三种抗体联合检测诊断具有更高的敏感度、特异度、准确度,值得临床作进一步推广。     

结核蛋白芯片对肺结核及肺外结核的诊断价值

目的探讨结核蛋白芯片检测对诊断肺结核及肺外结核的价值。方法使用蛋白芯片系统检测血清结核抗体的病例共4765例,其中肺结核334例,肺外结核83例,肺结核并肺外结核69例,非结核病4279例。我们采用的蛋白芯片包含了结核分枝杆菌（MTB）中5种成分,即ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD。结果 334例肺结核中227例结核抗体阳性,83例肺外结核中50例阳性,69例肺结核并肺外结核中51例阳性,4279例非结核病797例阳性,结核蛋白芯片检测肺结核的阳性率为67.96%,肺外结核的阳性率为60.24%,肺结核并肺外结核的阳性率为73.91%,非结核病的阳性率为18.62%。结论结核蛋白芯片是对肺结核及肺外结核的辅助诊断有重要价值。但在淋巴结结核、结核性胸膜炎中阳性率偏低,敏感性稍差。     

Rv0222/ESAT-6融合蛋白对结核病的诊断价值

目的:探讨Rv0222/ESAT-6融合蛋白对结核病的血清学诊断价值。方法:表达、纯化重组Rv0222/ESAT-6融合蛋白,以其为抗原包板、以酶标抗体为二抗、采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结核患者、人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染合并结核患者、非结核患者以及正常人血清,评价该融合蛋白对结核病的诊断价值。结果:以结核分枝杆菌感染T淋巴细胞斑点试验(T-SPOT,简称T-SPOT)为金标准,将Rv0222/ESAT-6融合蛋白作为抗原的ELISA诊断结核病的敏感性为86%,特异性为100%;T-SPOT与ELISA对结核病的阳性检出率差异无统计学意义。结论:以Rv0222/ESAT-6融合蛋白作为抗原的ELISA对结核病(包括HIV合并结核病)的血清学诊断有一定价值。     

检测结核抗体IgM在结核病早期诊断中的应用

[目的]基于多表位结核分枝杆菌嵌合抗原,建立抗结核抗体IgM检测试剂,并探讨在结核病早期诊断中意义。[方法]克隆表达多表位结核分枝杆菌嵌合抗原包被酶联板,抗人IgM单抗标记HRP,建立间接免疫酶联法检测结核抗体IgM,结核抗体IgG同时检测51例结核病人血清样品,两者检测结果进行比较。[结果]51例结核病人血清抗IgG、IgM抗体分别检测率为70．58％（36／51）,43．13％（22／51）,其中10例结核抗体IgG阴性,IgM抗体为阳性。46例健康人血清样品IgM抗体检测2例阳性,特异性95．7％（2／46）。[结论]结核抗体IgM检测在结核病早期诊断中具有一定意义,可作为结核抗体IgG的补充实验,抗IgG、IgM抗体同时检测可提高检测的灵敏度。     

结核分枝杆菌rdESAT-6抗原在耻垢分枝杆菌中的制备及其血清学诊断研究

目的构建结核分枝杆菌(MTB)融合基因2×esat-6原核表达载体,利用耻垢分枝杆菌诱导表达、纯化早期分泌抗原ESAT-6重组二聚体(rdESAT-6),Western blot分析其抗原性,并评估其在结核病患者中的血清学诊断价值。方法以DNA疫苗HG856A2为模板扩增2×esat-6基因,构建pMF41-2×esat-6原核表达载体,电转化耻垢分枝杆菌,诱导表达rdESAT-6蛋白,Western blot分析其抗原性。收集126例确诊的结核病患者和42名健康体检者的血清,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和结核斑点金免疫渗滤试验(TB-DOT)检测血清结核抗体,评估rdESAT-6在结核血清学诊断中的价值。结果成功构建了pMF41-2×esat-6重组质粒,以包涵体形式表达了rdESAT-6蛋白,纯化的蛋白纯度在95%以上,可与小鼠抗ESAT-6血清发生特异性反应。126例结核病患者血清检测结果表明,rdESAT-6蛋白在MTB阳性组和阴性组患者血清学诊断的敏感性分别为79.75%(63/79)、61.70%(29/47),好于TB-DOT的62.03%(49/79)、44.68%(21/47)(P0.05)。2种方法对42名健康体检者血清诊断特异性均为95.24%(40/42)。结论 MTB的融合蛋白rdESAT-6用于结核病血清学检测具有较好的敏感性和特异性,可作为结核病血清学诊断的优选抗原。     

Clinical utility of a combination of lipoarabinomannan, 38-kDa, and 16-kDa antigens as a diagnosis tool for tuberculosis

The aim of this study was to evaluate the diagnostic value of tests detecting antibodies against lipoarabinomannan (LAM), 38-kDa, and 16-kDa antigens for Mycobacterium tuberculosis (MTB). Sera from 160 tuberculosis (TB) patients and 150 non-TB healthy controls were subjected to simultaneous detection of antibodies against LAM, 38-kDa, and 16-kDa antigens using protein chips. The diagnostic value of the 3 TB antigens, alone or combined, was evaluated. Results showed that LAM and 38-kDa antigens had the highest positive rates in the TB patients. Tests showing any single positive antibody, 2 positive antibodies, and 3 positive antibodies had a sensitivity of 93.1%, 51.3%, and 15.6%, and a specificity of 81.3%, 96.6%, and 99.3%, respectively. The positive predictive value of tests showing any 2 positive antibodies and 3 positive antibodies was 94.2% and 96.1%, respectively. Combined detection of a selected panel of TB antibodies can improve the positive rates for TB diagnosis and can serve as an important aid to the diagnosis of TB especially extrapulmonary TB.     

Comparative study of three different mycobacterial antigens with a novel lipopolysaccharide antigen for the serodiagnosis of tuberculosis

Demonstration of Mycobacterium tuberculosis in a smear or culture is the most reliable method for diagnosing tuberculosis (TB). In the last 10 years, several enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) based on mycobacterial antigens (such as antigen 60, 38 kDa antigen, and antigen Kp90) have been used for the rapid diagnosis of TB. In this study, we report the isolation of an immunodominant lipopolysaccharide (LPS) antigen from M. tuberculosis H(37)Rv, which can be used for the serodiagnosis of TB. The LPS antigen was compared with three commercially available mycobacterium-specific antigens for the detection of TB. The antigens were evaluated using serum samples obtained from 59 Indian patients (19 patients with active pulmonary TB, 20 with extrapulmonary TB, and 20 with nontuberculous pulmonary disease) and 20 healthy adults. Antigen 60 IgG (sensitivity 89%, specificity 97%) and LPS (sensitivity 84%, specificity 97%) were more sensitive and specific than 38 kDa antigen IgG (sensitivity 79%, specificity 97%) and Kp90 IgA (sensitivity 82%, specificity 40%). These results indicate that the LPS antigen can be used as a sensitive tool for the serodiagnosis of TB and could be utilized to develop an ELISA for the screening of patients for TB.     

结核抗体蛋白芯片法对老年肺结核的诊断价值研究

目的探讨结核抗体蛋白芯片法对老年肺结核的诊断价值。方法选择93例肺结核及77例肺部非特异性感染老年患者,均行痰涂片抗酸染色试验,均采用结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒(蛋白芯片)检测抗结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露醇(LAM)、基因工程重组的16 kD和38 kD的IgG抗体,计算两种方法诊断结核分枝杆菌感染的敏感性及特异性;并分别构建受试者工作特征曲线,通过比较曲线下面积(area under the curve,AUC)评价其诊断效能。结果蛋白芯片法和痰涂片抗酸染色试验诊断结核分枝杆菌感染的敏感性分别为68.82%和33.33%,特异性分别为100.00%和97.40%;AUC分别为0.84和0.65,提示蛋白芯片法的诊断效能显著高于痰涂片抗酸染色法,差异有统计学意义(P0.01)。结论蛋白芯片法检测抗结核分枝杆菌LAM、16 kD和38 kD抗体快捷简便,对诊断老年肺结核有较高的实用价值。     

三种结核分枝杆菌重组蛋白抗原血清学诊断价值的研究

目的 研究重组ESTA6(rESTA6)、CFPl0(rCFP10)、CFP1O-ESTA6(rCFP10-ESTA6)三种结核分枝杆菌重组抗原在结核病血清学诊断中的应用价值.方法 检测230例肺结核、70例非结核疾病及200例健康血清标本中抗结核抗体,应用SPSS 18.0对检测结果进行方差分析.结果 方差分析表明,rCFP10、rESAT6、rCFP10-ESAT6三种抗原对肺结核、非结核疾病及健康人血清标本的检测结果有统计学意义(P<0.05),三种抗原检测肺结核病患者血清标本的敏感性分别为31.3%、25.2%、34.8%,特异性分别为94.8%、97.8%、95.6%.rCFP10和rESAT6联合检测敏感性及特异性分别为40.O%和93.O%;rCFPl0和rESAT6联合检测的92例阳性标本中,有23例rCFP10-ESAT6检测呈阴性;rCFP10-ESAT6检测的80例阳性标本中,有26例rCFP10和rESAT6联合检测呈阴性.结论 rCFP10-ESTA6的结构与rCFP10和rESTA6的单体的结构可能不完全相同,rCFP10-ESTA6抗原不能完全代替rESTA6、rCFP10两种抗原进行结核病的血清学实验室诊断.     

结核感染T细胞斑点试验在骨与关节结核诊断中的应用研究

目的探讨结核感染T细胞斑点试验（T—SPOT．TB）在骨与关节结核诊断中的临床应用价值。方法选取2012年3月至2013年8月骨科病区收治的疑似骨与关节结核患者317例,分别采用结核感染T细胞斑点试验（T—SPOT．TB）和结核抗体（LAM—IgG）进行诊断,比较两者对骨与关节结核诊断的临床意义（包括灵敏度、特异度、假阳性率和假阴性率指标的差别）。结果结核感染T细胞斑点试验的灵敏度和特异度明显高于结核抗体试验（P〈0．05）;同时,结核感染T细胞斑点试验的假阳性率和假阴性率明显低于结核抗体试验试验（P〈0．05）。结论结核感染T细胞斑点试验在诊断骨与关节结核中具有良好的敏感度和特异度,具有重要t临床应用价值。     

Detection of mycobacterial lipoarabinomannan in serum for diagnosis of active tuberculosis

Urinary detection of Mycobacterium tuberculosis lipoarabinomannan (LAM) for tuberculosis (TB) diagnosis is well characterized, but the utility of serum LAM detection remains unclear. We developed an assay for serum LAM detection using single-molecule array (Simoa), purified M. tuberculosis LAM, and anti-LAM monoclonal antibodies and evaluated performance on diluted/heat-treated serum samples from patients with and without active TB and/or HIV. The Simoa assay had a limit of detection of 0.35 pg/mL and lower limit of quantification of 0.942 pg/mL. Corrected serum LAM concentrations ranged from 0 to 132.0 pg/mL [median 1.71, interquartile range (IQR) 0.94–6.80] in 90 TB+ patients and from 0 to 2.29 pg/mL (median 1.03, IQR 0.47–1.69) in 55 TB− patients. Using a cutoff of 2.3 pg/mL for 100% specificity, assay sensitivity was 37% in all TB+ subjects (33/90; 95% CI 0.27–0.48), 47% in TB+/HIV+ subjects (26/55; 0.34–0.61), and 60% in TB+/HIV+/smear+ subjects (21/35; 0.42–0.76). Mycobacterial LAM is detectable in serum with high specificity and reasonable sensitivity using Simoa.     

T细胞斑点试验AB抗原检测结果对结核感染患者诊断意义探讨

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)中AB两种抗原检测结果在临床结核感染患者诊断中的意义。方法选取2013年6~11月住院治疗并最终确诊活动性结核的96例患者为研究对象,采集其外周血进行T-SPOT.TB检测,将检测结果与结核菌素试验(PPD)及最终诊断结果进行对比,并对AB两种抗原检出结果的一致性及其阳性斑点分布特点进行分析。结果 T-SPOT.TB灵敏度为97.9%,特异度为87.8%,准确度为94.5%,阳性预测值(PPV)为94.0%,阴性预测值(NPV)为95.6%,均显著高于PPD检测结果(P0.01)。T-SPOT.TB两种抗原A和B对检测结果阳性率无统计差异,阳性斑点分布特征分析显示抗原A阳性斑点数与结核活动性呈正相关趋势,有较高的特异度;而抗原B则分别在高、低阳性斑点区呈现活动性结核检出的高峰,具有更好的敏感度。结论 T-SPOT.TB试验对活动性结核诊断有高度的敏感度和特异度,且AB两种抗原表现出不同的阳性检出规律和意义。T-SPOT.TB试验可为临床结核病的筛查和大规模流行病学调查提供新的技术分析手段。     

结核感染T细胞斑点试验在结核性腹膜炎诊断中的临床应用

目的 探讨结核感染T细胞斑点试验(enzyme-linked immunospot assay in detection of mycobacterium tuberculosis infection,T-SPOT.TB)在临床诊断结核性腹膜炎中的应用价值.方法 对临床明确诊断结核性腹膜炎及可疑结核性腹膜炎患者(n=37)同时实施T-SPOT.TB、结核菌素试验(PPD)、结核抗体、血清腺苷脱胺酶(ADA)等检测,同时设非结核性腹膜炎患者为对照组(n=25).结果 利用T-SPOT.TB试验诊断结核性腹膜炎的阳性率为97.3％ (36/37),明显高于PPD的45.5％(15/33)、结核抗体检查的15.2％(5/33)、血清ADA的33.3％ (7/21),差异有统计学意义(P＜0.01).T-SPOT.TB试验诊断结核性腹膜炎的敏感性和特异性分别为97.3％和92.0％,显著高于PPD的45.5％和61.9％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 T-SPOT.TB酶联免疫斑点法是一种具有较高敏感性和特异性的检测结核感染的技术,对快速而准确地诊断结核性腹膜炎具有重要的临床应用价值.