半乳糖凝集素-3基因在口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭、凋亡中的作用及机制研究

目的 探讨抑制口腔鳞状细胞癌（OSCC）中半乳糖凝集素-3（Galectin-3）基因的表达对癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测OSCC中Galectin-3 mRNA和蛋白表达;人OSCC Tca8113分为空白组、阴性对照组和Galectin-3转染组,转染48 h后,Western blotting检测各组细胞中Galectin-3、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、细胞周期素D1（Cyclin D1）蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 OSCC中Galectin-3 mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织（P<0.01）;RNA干扰Galectin-3表达后Tca8113细胞中Galectin-3蛋白表达明显降低;Galectin-3转染组细胞存活率、细胞侵袭能力及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达均显著高于空白组（P<0.01）。结论 抑制OSCC中Galectin-3基因表达可显著降低癌细胞的增殖及侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

抑菌浓度米诺环素对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 研究抑菌浓度的米诺环素对成骨细胞增殖、分化和矿化及Runt相关转录因子2（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）mRNA表达的影响。方法 将米诺环素溶液（0、0.1、0.5、1、10 μg·mL^-1）与原代成骨细胞共培养,CCK-8检测增殖活性,通过ALP活性检测、茜素红染色、荧光定量聚合酶链反应检测探讨米诺环素对成骨细胞分化、矿化的影响。结果 0.1、0.5、1 μg·mL^-1的米诺环素可以促进细胞的增殖,上调ALP、Runx2 mRNA的表达水平,增加钙含量及钙化结节的形成,其中1 μg·mL^-1具有最大促进作用（P<0.05）;当浓度为10 μg·mL^-1时这种促进作用开始下降,并对ALP活性和OPN表达有显著抑制作用（P<0.01）。结论 适宜抑菌浓度的米诺环素能促进成骨细胞增殖,上调Runx2、ALP、OPN的表达水平,促进成骨细胞分化和矿化。     

偏侧咀嚼致大鼠咬肌肌纤维代谢特征改变及其腺苷酸活化蛋白激酶调节机制

目的 探讨偏侧咀嚼对大鼠咬肌肌纤维代谢特征的影响及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）对肌纤维代谢特征变化的调控作用。方法 拔除大鼠右上颌磨牙建立偏侧咀嚼大鼠模型,实验组分为2、4、6、8周组,设同期对照组。应用辅酶Ⅰ-四氮唑还原酶（NADH-TRase）染色法检测咬肌肌纤维有氧代谢类型以及各型肌纤维的分布密度和构成比;用Western blot技术检测p-AMPK（Thr172）/AMPKα1表达水平。结果 与同期对照组比较,建模2周实验组拔牙侧深染型肌纤维比例增多,非拔牙侧中染型纤维比例增加,浅染型肌纤维比例减少（P<0.05）;建模4、6、8周组双侧深染型肌纤维比例持续增加,拔牙侧显著高于非拔牙侧;第6、8周组双侧中染型肌纤维比例下降（P<0.05）;拔牙侧浅染肌纤维比例在8周组减少,非拔牙侧无明显改变（P>0.05）。p-AMPK（Thr172）/AMPKα1表达水平在2、4周拔牙侧较对照组和非拔牙侧增高（P<0.05）,在非拔牙侧各周组无显著改变（P>0.05）。结论 偏侧咀嚼可促进双侧咬肌肌纤维有氧代谢能力且伴随表型特征的改变,在非工作侧更明显;肌纤维有氧代谢能力增强与AMPK通路的激活有关。     

肿瘤坏死因子-α对牙周膜干细胞骨向分化及Notch信号通路的影响

目的 研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对牙周膜干细胞（PDLSCs）骨向分化及Notch信号通路的影响,初步探讨在TNF-α影响下Notch信号通路对PDLSCs成骨分化的调控作用。方法 采用酶消化结合组织块法获得PDLSCs,通过流式细胞仪检测间充质干细胞（MSCs）表面标记物CD105、CD90、CD146、CD45、CD31的表达,将PDLSCs分为实验组（10 ng·mL^-1 TNF-α）和对照组（不含TNF-α）,使用CCK-8法检测PDLSCs增殖能力;通过碱性磷酸酶（ALP）活性、茜素红染色、实时定量聚合酶链反应（PCR）检测TNF-α对PDLSCs成骨能力的影响;实时定量PCR 检测Notch信号通路受体Notch1、Notch2、Notch3,配体JAG1、JGA2、DLL1,细胞内效应分子Hes-1的表达。结果 流式细胞仪检测结果显示CD105、CD90及CD146表达阳性,CD45、CD31表达阴性;CCK-8法结果显示TNF-α能够促进PDLSCs增殖能力（P<0.05）;ALP活性检测结果显示,实验组与对照组相比,ALP活性降低（P<0.05）;茜素红染色结果显示,与对照组相比,实验组矿化结节减少;实时定量PCR结果显示,与对照组相比,成骨标志基因牙骨质附着蛋白（CAP）、骨桥蛋白（OPN）、Runt相关转录因子2（Runx2）表达量明显降低（P<0.05）;Notch信号通路相关分子中Notch1、Notch2、JAG1、JGA2、Hes-1的表达水平显著降低（P<0.05）,而Notch3、DLL1的表达水平增高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 TNF-α能够促进PDLSCs增殖而抑制其骨向分化,同时抑制Notch信号通路的表达,说明Notch信号通路对PDLSCs骨向分化具有一定的调控作用。     

舌鳞癌细胞Tca8113中蛋白激酶C和丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外调节蛋白激酶通路对诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 在舌鳞癌细胞Tca8113中,探索与细胞增殖密切相关的诱导型一氧化氮合酶（NOS-2）的表达调控机制。方法 采用RNAi技术沉默Tca8113细胞中NOS-2、蛋白激酶C（PKC）-α、PKC-β和PKC-δ的基因;Griess Reagent法检测NOS-2基因沉默后一氧化氮（NO）生成量;CCK8法测定细胞增殖活性;实时定量荧光聚合酶链反应（q-PCR）技术检测各种方法处理后NOS-2、PKC-α、PKC-β和PKC-δ的基因表达;Western blotting技术测定丙二醇甲醚醋酸酯（PMA）作用细胞后的细胞外调节蛋白激酶（ERK）1/2磷酸化程度。结果 利用NOS-2的siRNA处理后,Tca8113细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）;PKC的活性与NOS-2的基因表达成负相关（P<0.05）;PKC亚型PKC-α、PKC-β和PKC-δ共同参与NOS-2的基因调控（P<0.01）;丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/ERK通路负调控NOS-2的基因表达（P<0.05）;PKC通过MEK/ERK通路负调控NOS-2的基因表达（P<0.05）。结论 在Tca8113细胞中,PKC通过MEK/ERK通路负调控与细胞增殖相关的NOS-2的基因表达。     

口腔扁平苔藓外周血中辅助性T细胞/调节性T细胞平衡与临床特征相关性分析

目的 了解口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中辅助性T细胞17（Th17）与调节性T细胞（Treg）的平衡变化,探讨它们在OLP发病机制中的作用及意义。方法 选取17例正常组和33例OLP患者（网纹型15例,糜烂型18例）的外周血,应用流式细胞术（FCM）检测Th17、Treg细胞的表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测它们的转录因子维甲酸相关孤核受体γt（RORγt）和叉头状转录因子3（Foxp3）mRNA的表达。结果 OLP外周血中Th17、Treg细胞及RORγt、Foxp3 mRNA表达均升高（P<0.05）,但Treg细胞和Foxp3 mRNA表达在OLP两型间差异无统计学意义。Th17/Treg比值在OLP中升高（P<0.05）,其中糜烂型OLP显著高于正常组及网纹型OLP（P<0.01）,但网纹型OLP与正常组相比差异无统计学意义。Spearman相关分析显示Th17细胞和Th17/Treg比值与体征计分、RAE计分存在正相关关系（r=0.66,P=0.00;r=0.66,P=0.00;r=0.52,P=0.00;r=0.50,P=0.00）;同时Th17细胞与Treg细胞也存在正相关关系（r=0.39,P=0.03）。结论 OLP外周血中Th17和Treg细胞以及它们的比例均增高,Th17/Treg失衡在糜烂型OLP的发病过程中起了一定作用。     

激光多普勒血流仪检测年轻上颌切牙牙髓血流的探索

目的 采用多普勒血流仪检测年轻上颌切牙的牙髓组织血流量（PBF）,分析年龄对PBF的影响。方法 采用激光多普勒血流仪检测7~13岁儿童（儿童组）、18~25岁青年人（阳性对照组）的上颌中切牙和侧切牙的PBF,以已行根管治疗的上颌中切牙的PBF为阴性对照组。对各组PBF以及不同性别、牙位间的PBF进行比较,同时分析上颌中切牙与侧切牙PBF间的关系,以及儿童组上颌切牙PBF与年龄间的关系。结果 儿童组中切牙、侧切牙的PBF分别为（11.31±2.21）、（12.18±2.65）PU,阳性对照组中切牙、侧切牙的PBF分别为（8.49±1.88）、（7.52±1.82）PU,阴性对照组中切牙PBF为（2.08±0.73）PU。各组间同名牙及组内中切牙与侧切牙间均存在统计学差异（P<0.01）,而左右侧同名牙之间、不同性别间均无统计学差异（P>0.05）。中切牙、侧切牙PBF与年龄呈线性负相关关系,Pearson相关系数分别为-0.310和-0.510（P<0.01）。结论 7~13岁儿童正常上颌切牙PBF值随着年龄的增加而减小。     

氢气对脂多糖致人牙周膜细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 研究培养基中加入氢气能否对人牙周膜细胞（hPDLCs）在脂多糖（LPS）刺激下起到保护作用,降低氧化应激损伤,减少细胞凋亡。方法 用1 μg·mL^-1 LPS刺激hPDLCs,分别用普通和富氢培养基培养,检测2组细胞的增殖,凋亡和细胞上清中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）水平。结果 在LPS刺激下,富氢培养基组细胞增殖活性显著高于普通培养基组,凋亡率降低（P<0.05）。2组间LDH释放量差异无统计学意义。6 h和12 h富氢培养基组细胞上清中CAT活性较普通培养基组显著升高（分别为P<0.05,P<0.01）;而2组的SOD水平在各个时间点均无统计学差异。6 h富氢培养基组细胞上清中MDA水平较普通培养基组显著降低（P<0.05）。结论 氢气可有效改善LPS导致的hPDLCs增殖活性降低及凋亡,并可显著降低氧化应激损伤。     

实验性前导斜度改变的大鼠模型的建立及其颞下颌关节滑膜组织病理学观察

目的 建立稳定的前导斜度改变的大鼠模型,探索其对大鼠颞下颌关节（TMJ）滑膜的组织病理学影响。方法 将32只大鼠随机分为4组,分别是对照组（C）、前导缺失组（T1）、前导斜度增大15°组（T2）、前导斜度增大30°组（T3）。在大鼠上前牙粘接舌侧增大15°、30°金属冠改变相应前导斜度。采用低速金刚砂轮打磨大鼠上下前牙,使下颌在各个方向运动时上下牙切缘不接触,造成前导缺失。3、7、14、28 d各处死2只。实验结束后取大鼠一侧TMJ作石蜡切片苏木精-伊红（HE）染色,通过组织病理学诊断鉴定大鼠TMJ滑膜的改变。结果 T1组体重短暂下降后缓慢增加（P<0.05）,T3组体重明显下降后略回升,但始终低于初始体重（P<0.05）,T3组滑膜衬里细胞增生,血管扩张明显（P<0.05）。结论 本研究所建立的前导斜度增大30°大鼠模型能较好地模拟临床上前导斜度过大造成的TMJ滑膜出现的组织病理变化过程。提示前导斜度增大越多,发生TMJ滑膜损伤的风险越大。而前导缺失对TMJ滑膜的影响有待进一步确定。     

不同抛光工具对CEREC Blocs陶瓷抛光效果的比较研究

目的 比较临床常用的几种玻璃陶瓷抛光工具对CEREC Blocs陶瓷的抛光效果,为临床抛光工具的选择提供依据。方法 制作60个陶瓷试件,随机分为6组（n=10）,进行不同的表面处理。G组：釉膏上釉;SF组：使用松风Porcelain Adjustment Kit+CeraMaster 组合抛光;3M组：使用3M Sof-Lex^TMDiscs套装抛光;Tob组：使用道邦玻璃陶瓷套装抛光;EVE组：使用EVE DIAPRO套装抛光;Ivo组：使用义获嘉伟瓦登特OptraFine^®套装抛光。测量各组试件表面粗糙度值Ra、Rz并作统计分析,通过扫描电子显微镜（SEM）观测试件并对其表面形态作定性分析。结果 G、3M、SF、Ivo、EVE、Tob组的抛光后Ra值分别为（0.069±0.008）、（0.073±0.009）、（0.223±0.025）、（0.229±0.022）、（0.491±0.093）、（0.763±0.067）µm,经统计学分析,Ra值从小到大依次为G和3M组P>0.05）,其余各组间差异均有统计学意义（P<0.05）。Rz值统计结果与Ra值一致。SEM观察结果与粗糙度值的统计结果一致。结论 不同抛光工具对CEREC Blocs陶瓷的抛光效果不同,本实验条件下,Sof-Lex^TM Discs套装抛光表面最光滑,效果近似釉膏上釉。     

神经肽P物质及骨形态发生蛋白信号通路在ST2细胞成骨分化过程中的作用

目的 探讨神经肽P物质（SP）在ST2细胞（小鼠骨髓间充质干细胞）成骨分化过程中的作用及机制,以期为颞下颌关节骨关节炎的治疗提供依据。方法 对第3代ST2细胞分别用0、10^-10、10^-8 、10^-6、10^-5 mol·L^-1 SP培养,24、48、72 h后采用CCK-8实验检测细胞增殖情况。以10^-6 mol·L^-1 SP培养第3代ST2细胞1、3、5、7 d后,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中碱性磷酸酶（ALP）、Ⅰ型胶原蛋白（CollaⅠ）和骨钙素（OCN）的表达,免疫荧光染色检测细胞ALP活性。分别用SP、Noggin（骨形态发生蛋白信号通路抑制剂）、SP+Noggin和2%胎牛血清培养ST2细胞,采用ELISA法检测上清液中ALP、CollaⅠ和OCN的表达。结果 CCK-8结果显示,24、48、72 h时均以10^-6 mol·L^-1 SP促进ST2细胞增殖活性最为明显（P<0.01）。ELISA结果显示,ALP表达在5 d时较对照组差异最为明显（P<0.01）,CollaⅠ和OCN的表达在7 d时较对照组差异最为明显（P<0.05）;免疫荧光结果显示,ALP活性在5 d时最强;加入抑制剂Noggin后,ALP、CollaⅠ和OCN表达量均降低。结论 SP可促进ST2细胞增殖和成骨分化,骨形态发生蛋白信号通路可能参与了此过程。     

口腔癌患者生存质量的影响因素及医学应对方式分析

目的 评价口腔癌患者术后生存质量的影响因素并对患者的应对方式进行分析。方法 采用第4版华盛顿大学生存质量量表（UWQOL）和医学应对问卷（MCMQ）分别对符合纳入标准的131例口腔癌术后患者进行调查,了解患者生存质量的影响因素及应对方式与生存质量之间的相关关系。结果 共回收有效问卷126份,回收率为96.18%（126/131）。单因素分析显示年龄、婚姻状况、文化程度、其他系统性疾病、个人收入水平、牙齿缺失、手术次数、辅助放疗、分期、颈淋巴清扫术、复发及颌骨切除等因素对口腔癌患者生存质量有不同程度的影响（P<0.05）;多重回归分析显示,牙齿缺失、分期、复发及颌骨切除主要在生存质量总得分上的差异有统计学意义（P<0.05）。口腔癌术后患者应对方式中的面对维度得分为（17.54±4.97）分,回避维度得分为（17.79±2.19）分,屈服维度得分为（12.97±5.70）分,与常模比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,相关分析表明,面对和回避维度与患者生存质量呈正相关,屈服维度与患者生存质量呈负相关（P<0.05）。结论 年龄、婚姻状况、文化程度、其他系统性疾病、个人收入水平、牙齿缺失、手术次数、辅助放疗、分期、颈淋巴清扫术、复发及颌骨切除在生存质量各方面均有不同程度的影响,而牙齿缺失、分期、复发及颌骨切除是影响患者整体生存质量的主要因素,应加强个性化治疗及护理,全面提高患者的生存质量,改变患者的不良应对方式。     

体外沉默二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ对舌癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 应用RNA干扰技术,体外沉默二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ（GGTase-Ⅰ）,研究其在舌癌迁移、侵袭中的作用。方法 登录Genebank确定人GGTase-Ⅰ基因序列,针对GGTase-Ⅰ的基因序列设计并构建3条siRNA,分别将RNA干扰组（GGTase-Ⅰ siRNA1、GGTase-ⅠsiRNA2、GGTase-Ⅰ siRNA3）、阴性对照组（NC-siRNA）和空白对照组转染至舌癌细胞Cal-27,实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测各组细胞转染后GGTase-Ⅰ、RhoA基因的mRNA、蛋白表达;选取沉默效率最高的一组siRNA作为实验组,蛋白质印迹法检测各组细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达,GST-pull down实验检测GTP-RhoA蛋白的表达,划痕实验检测细胞迁移能力变化,Transwell小室检测细胞侵袭能力变化。结果 干扰后细胞的GGTase-Ⅰ mRNA、蛋白表达明显下降（P<0.05）,RhoA mRNA和蛋白表达无明显改变,MMP-2、MMP-9、GTP-RhoA的表达下降,迁移、侵袭能力明显下降（P<0.05）。结论 抑制GGTase-Ⅰ表达,可降低舌癌细胞的迁移、侵袭能力,对GGTase-Ⅰ的深入研究可能为舌癌的治疗提供新的有效分子靶点。