EPR-1和survivin基因及其异构体在急性白血病中的表达及意义

目的：探讨抗凋亡基因survivin及其异构体和天然互补序列EPR-1在急性白血病（AL）中的表达，以及在AL的发生、预后等方面的意义。 方法： 采用RT-PCR方法检测86例初治AL患者survivin及其异构体survivin-2B、survivin-Ex3、 EPR-1基因的mRNA表达。 结果： （1） 本组AL患者survivin mRNA表达率为79.1%，高于正常对照组（31.3%）（P<0.01）； （2）survivin阳性患者完全缓解率（CR）明显低于survivin阴性组（P<0.01）；（3）AL中存在survivin-2B、survivin-△Ex3异构体分子；（4）EPR-1在正常人及大多数AL中均有表达， AL以survivin+/EPR-1+表达模式为主。 结论： 在AL 中survivin高表达且与预后有关，并以survivin+/EPR-1+表达模式为多见; survivin-2B、survivin-△Ex3可能参与survivin介导的凋亡调控。     

nm23-H1基因在儿童急性淋巴细胞白血病的表达及其对化疗疗效的影响

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）不同阶段、不同类型患者nm23-H1基因的表达水平及其对化疗疗效的影响。方法研究对象为2006.12～2008.05哈尔滨市儿童医院血液科、哈尔滨医科大学附属第一医院儿科住院的ALL患儿。应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法,检测儿童急性淋巴白血病初治患者、缓解患者、难治患者、复发患者及正常对照儿童nm23-H1基因的表达;观察nm23-H1基因与疗效的关系。结果（1）初治患者nm23-H1表达水平明显高于正常对照组（P〈0.01）和完全缓解组（P〈0.01）;完全缓解后nm23-H1表达水平与对照组无明显差异（P〉0.05）,复发/难治组患者nm23-H1表达水平高于正常对照组（P〈0.01）和完全缓解组（P〈0.01）,与初治患者无明显差异（P〉0.05）;（2）40例初治患者nm23-H1阳性26例,nm23-H1阴性14例,nm23-H1阳性患者的完全缓解（CR）率与nm23-H1阴性患者无明显差异（分别为73.1%、92.9%,P〉0.05）,但完全缓解患者治疗前nm23-H1表达水平低于未缓解患者（P〈0.01）。结论nm23-H1的表达水平随儿童ALL的病情发展而变化,nm23-H1可以作为判断疗效、预测复发、评估预后的一个因素;nm23-H1高表达可能是儿童ALL的不利因素,nm23-H1高表达者疗效差,易耐药,易复发,预后差。     

急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因的表达

背景：据作者查新检索,国内外有关急性白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因表达的报道罕见。 目的：观察急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因的表达及其意义。 方法：50例急性淋巴细胞白血病患者,其中32例急性B淋巴细胞白血病,18例急性T淋巴细胞白血病。同期选择27例非恶性血液病患者作为对照。取肝素抗凝的骨髓液2~4 mL,用Ficoll液分离骨髓单个核细胞,半定量反转录聚合酶链反应法检测TAp63的表达。 结果与结论：50例急性淋巴细胞白血病患者有49例表达TAp63,急性淋巴细胞白血病组明显高于非恶性血液病组(P < 0.05),急性B淋巴细胞白血病表达水平显著高于急性T淋巴细胞白血病(P < 0.05)。动态观察了5例初治急性淋巴细胞白血病化疗后不同阶段TAp63的表达变化,发现初治时TAp63表达,缓解后低表达或不表达,复发后又表达。结果表明TAp63在急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞的表达明显高于非恶性血液病患者,尤其在急性B淋巴细胞白血病患者中高表达。     

白血病细胞中端粒酶抑制因子Pinx1的表达与端粒酶活性关系的研究

目的：研究端粒酶抑制因子Pinx1在急性白血病细胞中的表达和在急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中的表达改变，分析其表达与端粒酶逆转录酶hTERT表达的关系，以了解白血病细胞中Pinx1对端粒酶的作用及可能机制。方法:荧光定量RT-PCR检测30例急性白血病细胞中Pinx1与hTERT mRNA的表达，进一步在ATRA诱导的急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中检测Pinx1及hTERT mRNA表达，分析两者之间的相关性。结果:Pinx1在急性白血病细胞中的表达（0.00312，5.42×10-4-0.024）明显高于正常人骨髓单个核细胞（7.89×10-4，0-0.00863，P＜0.01），与hTERT的表达呈正相关（r=0.296,P＜0.05）。Pinx1表达随NB4细胞分化逐渐下降，与hTERT呈正相关（r=0.900,P＜0.05） 。结论：Pinx1虽然为端粒酶活性的抑制因子，但在白血病细胞中与端粒酶活性的调控方向一致，提示Pinx1的表达改变可能是继发于hTERT的一种负反馈反应，目的是保持端粒酶活性的稳定，具体机制尚待进一步研究。     

急性白血病患者骨髓细胞nucleostemin基因的表达与其类型、疗效的关系

目的：探讨nucleostemin（NS）基因在急性白血病中的表达及临床意义。方法:采用荧光定量PCR的方法检测67例急性白血病患者骨髓细胞nucleostemin基因表达，分析其表达与临床的关系。结果:初治急性白血病患者nucleostemin 基因的表达水平高于完全缓解组、正常对照组（P＜0.01），急性淋巴细胞白血病（ALL）患者nucleostemin表达水平低于急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者（P＜0.05），ANLL中M2、M3、M4、M5患者nucleostemin表达进行两两比较无显著差异（P＞0.05）,急性白血病患者nucleostemin表达水平与性别、年龄、肝、脾肿大和外周血白细胞数无明显相关（P＞0.05），nucleostemin 基因高表达的急性白血病患者的症状完全缓解（CR）率低于低表达的患者（51.3% vs 83.3%，P＜0.05）,急性白血病患者治疗达完全缓解者nucleostemin呈低表达，nucleostemin持续高表达或下降后又上升的患者呈现难治及复发。结论:Nucleostemin基因在急性白血病细胞中高表达，可作为疗效评价及监测残留病灶的指标。     

急性白血病患者同源结构域相互作用蛋白激酶2的表达及其临床意义

目的:探讨急性白血病患者中同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)基因的表达及其临床意义。 方法:应用半定量逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）检测急性白血病患者(AL)及健康供者骨髓单个核细胞（MNC）HIPK2基因的表达。 结果:①初发AL患者HIPK2 的相对转录水平为0.364±0.286，显著低于正常对照组（1.160±0.272）（P<0.01）;②AML患者中M2b 的HIPK2 的转录水平显著高于其它类型的AML(P<0.05);③除M2b外的AL患者HIPK2 的转录水平与FAB亚型、发病时外周血白细胞数、细胞或分子遗传学异常、乳酸脱氢酶水平、多药耐药基因1（mdr1）表达、P170表达及年龄等预后因素无显著相关性(P>0.05)。 结论:HIPK2在AL患者中低表达，可能与AL的发生发展有关。     

急性白血病中MDR1 MRP和Fas表达及其临床意义

目的 研究多药耐药基因（MDR1）、多药耐药相关蛋白基因（MRP）和诱导凋亡的因子Fas在急性白血病（AL）的表达及它们与临床耐药的关系。方法采用流式细胞仪（FCM）直接免疫荧光法和半定量多聚酶链反应（RT-PCR）测定51例AL患者骨髓单个核细胞三种指标的表达情况。结果51例AL患者中MDR1／MRP／Fas三者共表达阳性率为11．76％，MDR1／MRP／Fas三者表达均阴性发生率为23．53％。三指标表达全阴性的患者75％获得完全缓解（CR），MDR^＋／MRP^＋／Fas^＋的患者84．21％获得CR，MDR^＋／MRP^＋／Fas^-或MDR^＋／MRP^＋无一人CR（P〈0．01）。单指标分析表明MDR1、MRP和Fas表达阳性率分别为21．15％、32．69％和65．38％。MDR1阳性者CR率18．18％，明显低于MDR1阴性者72．50％（P〈0．01）；MRP阳性者CR率29．41％，明显低于MRP阴性者76．47％（P〈0．01）；Fas阳性者CR率63．64％，略高于Fas阴性者55．56％，但二者无显著性差异。结论MDR1^＋／MRP^＋或MDR1^＋／MRP^＋／Fas^-者不易获CR，白血病患者的耐药除了与MDR1高表达密切相关外，还与非P^-糖蛋白（P-gp）介导的MRP及Fas表达等因素相关。     

急性白血病患者骨髓细胞中TIMP3、RUNX3蛋白表达情况检测及其临床意义

目的： 检测急性白血病(AL)患者骨髓细胞中的TIMP3、RUNX3蛋白表达的情况及其与基因甲基化的关系,并探讨其与AL患者预后的关系。方法: 采用Western blotting检测50例AL患者骨髓单个核细胞(BMMCs)及10例健康供者外周血单个核细胞(PBMCs)中TIMP3、RUNX3蛋白表达的情况,结合前期实验中TIMP3、RUNX3启动子区域甲基化检测结果,对与AL患者预后有关的因素进行统计分析。结果: 50例AL患者BMMCs中RUNX3甲基化组该蛋白表达明显少于未甲基化组及正常对照组(P<0.05),AL患者完全缓解(CR)率与RUNX3蛋白表达及骨髓中原始细胞比例有关,RUNX3蛋白失表达、骨髓中原始细胞比例高的患者CR率低,反之较高。结论: RUNX3启动子区域甲基化是导致该蛋白失表达的原因,其参与了AL的发病,并与不良预后有关,TIMP3甲基化与急性白血病发病无关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TRAF1 mRNA的表达及其意义

目的：研究肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)mRNA表达在SLE患者的外周血单个核细胞中的表达是否异常，以及该基因mRNA表达与SLE活动指数是否相关。方法：TRAF1 mRNA表达采用RT-PCR半定量法；SLE活动指数以SLEDAI为判断标准。结果：TRAF1 mRNA在SLE患者的外周血单个核细胞中的表达较正常人为高，但与SLEDAI指数无相关。结论：TRAF1基因可能在SLE的发病机制中起重要作用。     

CD34抗原表达和P—gp高表达与急性白血病预后的关系

目的：探讨急性白血病（AL）CD34抗原表达和P－gp高表达与预后的关系。方法：对30例AL患者的单个核细胞用抗CO34和抗P－gp单克隆抗体标记后，通过流式细胞仪进行检测，其结果与临床的实际疗效作分析。结果：CD34和P－gp同时高表达的临床疗效差；两者之间比较，P－gp高表达者疗效较差。结论：CD34和P－gp同时高表达可作为AL预后不良的指标。     

急性淋巴细胞白血病患者BAALC基因表达水平也许有临床意义

目的研究急性淋巴细胞白血病（ALL）患者脑和急性白血病细胞胞浆（BAALC）基因的表达水平及其临床意义。方法57例经细胞形态学、组织化学染色及流式细胞术免疫学分型确诊的ALL患者,其中男性35例,女性22例;中位年龄23（14～66）岁。FAB分型L19例。L245例,L33例。建立实时荧光定量PCR检测BAALC基因表达的技术,并定量检测57例初发ALL患者BAALC基因的表达水平及进一步分析其与临床疗效的关系。结果57例初发ALL患者BAALC基因表达水平显著高于对照组。FAB各亚型中BAALC基因表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）,BAALC基因表达水平的高低与初发AI上患者的免疫表型具有显著性相关．T—ALL患者和伴有髓系抗原表达ALL患者BAALC基因表达水平显著高于B—ALL（P〈0．05）和不伴有髓系抗原表达ALL患者（P〈0．01）。ALL中BAALC基因表达的水平与外周血白细胞计数（WBC）、血红蛋白（Hb）、血小板计数（Plt）及骨髓白血病细胞比例无明显相关性（P〉0．05）。BAALC基因高表达ALL患者的完全缓解率（73．3％）同低表达组f81．0％）比较差异无统计学意义（P〉0．05）,但BAALC基因高表达患者1年复发率（81．8％）明显高于低表达组（44．1％）（P〈0．05）。结论BAALC基因高表达提示可能是ALL患者一个不良预后因素,检测ALL患者BAALC基因表达水平可能有助于指导治疗。     

Multi-drug resistance (MDR1) gene expression in de novo acute leukemia cells: correlations with CD surface markers and treatment outcome.

One important mechanism of drug resistance in acute leukemia is the overexpression of the multi-drug resistance (MDR1) gene that encodes a 170-kDa membrane protein called P-glycoprotein. To estimate the incidence and role of MDR1 gene expression in patients with acute leukemia, we investigated the expression of MDR1 by using the RT-PCR method in blast cells from 40 cases of de novo acute leukemia. We found a high frequency of MDR1 gene expression: 10 out of 20 with de novo acute myeloid leukemia (AML), 8 out of 17 with de novo acute lymphoblastic leukemia (ALL), and none of the 3 with de novo acute mixed leukemia, were MDR1 mRNA-positive. No correlation between cluster designation (CD) surface markers (CD19, CD7, CD13, CD33, CD34, CD14, HLA-DR) and MDR1 gene expression in AML was found. The complete remission rate was correlated with MDR1 gene expression. Among 40 evaluable patients examined, 17% (3 of 18) with MDR1 mRNA-positive reached complete remission versus 77% (17 of 22) with MDR1 mRNA-negative (p=0.044). These results suggest that MDR1 gene expression can be used as a prognostic factor and may be helpful in determining chemotherapeutic protocol for patients with acute leukemia.     

Prognostic significance of multidrug resistance gene 1 (MDR1), multidrug resistance-related protein (MRP) and lung resistance protein (LRP) mRNA expression in acute leukemia

The prognostic significance of multidrug resistance (MDR) gene expression is controversial. We investigated whether multidrug resistance gene 1 (MDR1), multidrug resistance-related protein (MRP) and lung resistance protein (LRP) mRNA expression are associated with outcomes in acute leukemia patients. At diagnosis we examined MDR1, MRP and LRP mRNA expression in bone marrow samples from 71 acute leukemia patients (39 myeloid, 32 lymphoblastic) using nested RT-PCR. The expression of each of these genes was then expressed as a ratio in relation to beta-actin gene expression, and the three genes were categorized as being either 0, 1+, 2+ or 3+. MDR1, MRP and LRP mRNA expression was detected in 23.9%, 83.1% and 45.1 %, respectively. LRP mRNA expression was significantly associated with resistance to induction chemotherapy in acute leukemia patients, and in the AML proportion (p=0.02 and p=0.03, respectively). MRP and high MDR1 mRNA expression was associated with poorer 2-yr survival (p=0.049 and p=0.04, respectively). Patients expressing both MRP and LRP mRNA had poorer outcomes and had worse 2-yr survival. The present data suggest that MDR expression affects complete remission and survival rates in acute leukemia patients. Thus, determination of MDR gene expression at diagnosis appears likely to provide useful prognostic information for acute leukemia patients.     

原发性肝癌患者PD-1基因拷贝数及其转录和蛋白表达水平的研究

目的 检测原发性肝癌患者PD-1基因拷贝数及其转录和蛋白表达水平,研究宿主免疫调节因子PD-1基因拷贝数差异与肝癌的相关性.方法 采用实时荧光定量PCR法检测24例原发性肝癌患者PD-1基因拷贝数和外周血单个核细胞PD-1 mRNA表达水平,采用流式细胞术检测外周血CD8+T细胞PD-1蛋白表达水平.对照组为26例血清抗-HBs阳性健康者.结果 肝癌组和对照组PD-1基因单拷贝率分别为34.62％和4.17％,多拷贝率分别为61.54％和95.83％,两组间分布差异有统计学意义(x2 =7.639,P=0.006),肝癌组人群PD-1基因多倍体率显著高于对照组.PD-1mRNA表达平均值对照组为2.35E-03,肝癌组为1.23E-03,Mann-whitey检验比较两组间表达差异有统计学意义,肝癌组明显低于健康对照组(U=153,P=0.009);CD8+T细胞PD-1蛋白表达频率对照组(3.72±0.32),肝癌组PD-1表达频率(16.13±1.68),肝癌组PD-1表达比健康对照组高,差异有统计学意义(t=-7.073,P=0.000).结论 PD-1基因多拷贝可能是HBV感染者发生肝癌的高危因素.PD-1基因拷贝数差异与原发性肝癌的关系值得进一步研究.     

Dact1基因在结直肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的：观测Dact1基因在结直肠癌组织的表达及其启动子甲基化状态,并探讨它们之间的关系及在结直肠癌发生中的作用.方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测结直肠癌组织、癌旁组织各50例及正常对照组织20例Dact1基因mRNA的表达情况,甲基化特异性PCR（MSP）检测Dact1基因启动子甲基化状态.结果：结直肠癌组中,9例Dact1基因mRNA失表达（18%）,20例表达低于正常对照组（40%）;癌旁组织组中,1例Dact1基因mRNA失表达（2%）,3例表达低于正常对照组（6%）;正常对照组中,1例Dact1基因mRNA低表达（5%）.Dact1基因在癌组织、癌旁组织、正常对照组织中的甲基化阳性率分别为46%、12%、5%,癌组织组与癌旁组织组及正常对照组阳性率比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,而癌旁组织组和正常对照组阳性率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.Dact1基因mRNA的失表达（低表达）与其启动子甲基化状态的相关性分析有统计学意义（P＜0.05）.结论：Dact1基因mRNA的失表达（低表达）可能参与了结直肠癌的发生发展,其失表达可能与Dact1启动子区甲基化相关.     

初发急性髓性白血病患者外周血中高表达TAL1基因及其意义

目的:分析调控造血分化的重要转录因子TAL1在急性髓性白血病(AML)细胞株及原代AML细胞中的表达特点。方法:利用real-time PCR法分别检测47例初发急性髓性白血病患者外周血单个核细胞以及急性白血病细胞株(Jurkat、CCRF-CEM、HL-60和NB4细胞株)中TAL1 mRNA的水平,并以12例健康志愿者外周血样本作为对照组。结果:TAL1 mRNA在AML细胞株(HL-60和NB4)、T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株(Jurkat和CCRF-CEM)和原代AML细胞中的水平均显著高于健康对照组(P0.05)。各AML亚型中TAL1的mRNA表达水平均较对照组显著升高,并以AML-M1和AML-M5 2个亚型升高最为明显(P0.05)。结论:AML细胞中TAL1异常高表达可能与其影响粒系的分化发育有关,其能否作为AML发病相关分子标志物有待进一步研究。     

FoxM1靶向调控bcl-2促进急性髓系白血病发生

目的:探讨叉头框蛋白M1(Fox M1)及其调控的原癌基因B细胞白血病/淋巴瘤-2(bcl-2)在急性髓系白血病(AML)发生中的作用。方法:RT-q PCR和免疫荧光方法检测17例AML初诊患者、17例治疗后达完全缓解(CR)患者、17例难治复发(RR)患者和15例正常骨髓标本中Fox M1的m RNA和蛋白表达;转染Fox M1 si RNA和对照si RNA至白血病HL60细胞和K562细胞,观察Fox M1对细胞生长和克隆形成的影响,流式细胞术检测Fox M1对凋亡的影响,RT-q PCR和Western blot法检测Fox M1对Bcl-2表达的影响,双萤光素酶活性实验检测Fox M1是否可以靶向作用于bcl-2启动子区域进而影响Bcl-2的表达。结果:AML初诊患者骨髓标本的Fox M1表达较正常对照显著升高,CR患者的Fox M1表达较初诊组降低,RR组的Fox M1表达较初诊组进一步升高。转染Fox M1 si RNA沉默HL60细胞和K562细胞的Fox M1表达后,细胞生长速率显著下降,细胞克隆形成能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,bcl-2表达降低,Fox M1可靶向调控bcl-2。结论:初步证实Fox M1可通过靶向调控bcl-2促进AML发生发展,干扰Fox M1表达可抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,提示Fox M1是治疗AML的潜在靶标。     

SHP-1对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响及机制初步探讨

目的探讨SHP-1对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响。方法 MCF-7细胞株分别瞬时转染SHP-1的特异性siRNA干扰序列;然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测MCF-7细胞干扰前后SHP-1基因和蛋白表达变化,并通过RT-PCR检测干扰前后MMP-9基因变化;通过Transwell小室实验检测干扰SHP-1对细胞侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western-blot证实SHP-1在人乳腺癌细胞株MCF-7中有表达以及SHP-1SiRNA的干扰效率;干扰SHP-1后,MMP-9的表达量上调;Transwell小室实验证实,与MCF-7阴性干扰对照及空白对照细胞相比,siRNA组的侵袭能力显著增强（P〈0.001）。结论乳腺癌MCF-7中SHP-1的表达水平高低和该细胞侵袭能力高低呈负相关,其侵袭可能和MMP-9的表达呈正相关。     

血管内皮生长因子及其可溶性血管内皮生长因子受体-1水平与胎儿出生体重

目的本研究通过对比血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)水平差异与新生儿出生体重的关系,以探讨其在胎儿出生体重发生中的作用。方法采用免疫组织化学法检测40例分娩正常出生体重儿组(AGA组)、30例高出生体重儿组(LGA组)及30例低出生体重儿组(SGA组)胎盘组织中VEGF、sFlt-1的表达水平。结果①LGA组胎盘组织中VEGF的表达高于AGA组,sFlt-1的表达水平低于AGA组,差异有统计学意义(χ2=21.17,P<0.01)。SGA组胎盘组织中VEGF的表达低于AGA组,sFlt-1的表达水平高于AGA组,差异有统计学意义(χ2=8.44,P=0.04)。②胎盘组织中VEGF的表达水平与胎儿出生体重呈正相关(r=0.427,P<0.01),胎盘组织中sFlt-1的表达水平与胎儿出生体重呈负相关(r=-0.569,P<0.01)。结论孕妇胎盘组织中VEGF及sFlt-1表达水平的变化可能与胎儿出生体重有关。