电纺聚己内酯/Ⅰ型胶原蛋白/纳米锆酸钙复合支架的制备及其生物相容性的研究

目的:制备聚己内酯(PCL)/Ⅰ型胶原(COLI)/纳米锆酸钙(n CZ)复合支架用于骨组织再生,评价其性能及对人牙周膜细胞(PDLCs)生物相容性及成骨分化的影响。方法:用静电纺丝法制备PCL/COLI、PCL/COLI/纳米羟基磷灰石(n HA)和PCL/COLI/n CZ复合支架,通过扫描电子显微镜表征支架形貌,能量色散X射线光谱分析仪分析支架元素组成,万能拉伸机检测支架机械性能。将复合支架与PDLCs共培养,使用CCK-8法检测细胞增殖情况,扫描电镜观察细胞形貌,通过碱性磷酸酶(ALP)、茜素红(ARS)染色观察各组复合支架对PDLCs的矿化能力的影响。结果:PCL/COLI/n CZ复合支架呈多孔网状结构,添加了纳米材料的复合支架表面见粗糙外观。PCL/COLI/n CZ在3种复合支架中机械强度最佳(P<0.05)。CCK-8和扫描电镜显示,PDLCs在3种复合支架上均能稳定增殖(P>0.05)。与PDLCs共培养,PCL/COLI/n CZ组的ALP和ARS染色面积较PCL/COLI组多(P<0.05),与PCL/COLI/n HA组无明显差异(P>0.05)。结论:PCL/COLI/n CZ复合支架有优良的机械性能和生物相容性,且具有成骨诱导的潜能,可用于骨组织工程。     

包载血管内皮生长因子的乙二胺/聚己内酯微囊的制备及其生物活性的研究

目的采用乳化溶剂挥发法制备一种新型的包载血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的经过乙二胺(ethylenediamine,ED)修饰的聚己内酯(polycaprolactoe,PCL)微囊支架(VEGF/ED-PCL),测试其表征,并研究其对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的粘附、增殖和成血管作用。方法运用乳化溶剂挥发法制备PCL微囊,以激光粒度分析仪测试其粒度分布;通过二氯甲烷蒸汽熏蒸微囊,扫描电镜扫描支架表面形态,选取融合度最适宜的支架;体外释放实验测试VEGF微囊的体外释放性能;使用乙二胺浸泡法修饰PCL微囊支架,利用接触角测试仪测试其亲水性;将HUVEC细胞接种于微囊支架上,扫描电镜观察细胞在支架上的形态,并通过CCK-8实验测试实验组和对照组细胞生长情况;同时将实验组和对照组支架植入小鼠皮下,2周后处死小鼠,取得支架周围组织,行免疫组化染色,光学显微镜下比较两组微血管形成数目。结果成功制备VEGF/ED-PCL微囊支架;VEGF/ED-PCL微囊支架细胞增殖高于VEGF/PCL微囊支架组、PCL微囊支架组;植入VEGF/ED-PCL微囊支架的小鼠皮下微血管生成高于PCL支架组,结果具有统计学差异(P<0.05)。结论通过制备乙二胺修饰的包载VEGF的PCL微囊支架有很好的体外缓释性能,表面适宜成血管细胞粘附及增殖,在小鼠体内促进血管的形成。     

选择性激光烧结技术构建HA/PCL骨组织工程支架的研究

目的：应用选择性激光烧结技术构建3D支架,探讨其作为骨组织工程支架的可行性。方法以羟基磷灰石（HA）和聚己内酯（PCL）为原材料,运用选择性激光烧结技术,制备纯PCL支架以及HA质量比为5wt.%和10wt.%的HA/PCL支架,通过扫描电镜观察支架微观形貌,测定各组支架的孔隙率、抗压强度及亲水性,MTT法检测10wt.% HA/PCL支架浸提液的细胞毒性。结果扫描电镜显示：支架具有相互连通的三维孔隙结构,5wt.%和10wt.%的HA/PCL支架孔隙率分别达到78.20%和80.75%。随着羟基磷灰石含量增高,抗压强度略有下降,但支架亲水性提高。MTT的结果显示：10wt.% HA/PCL支架表现出良好的细胞相容性。结论选择性激光烧结技术制备的HA/PCL支架具有外形可塑性及良好的孔隙结构,其力学性能和细胞相容性可支持作为骨组织工程支架应用。     

快速原型技术制备Nano-HA/PCL支架与犬骨髓基质干细胞体外复合研究

目的:探讨快速原型制作纳米-羟基磷灰石/聚己内酯(nano-HA/PCL)根形三维支架的细胞生物相容性,为进一步体内实验提供研究基础。方法:通过CT扫描获得犬头颅骨影像信息,以CAD软件实现犬下颌牙根形态的三维重建影像,应用快速原型(RP)技术制作nano-HA/PCL根形支架,经犬骨髓基质细胞接种后体外复合培养,检测支架材料的细胞相容性。结果:通过CT影像和快速原型技术,可实现解剖根形态结构nano-HA/PCL三维仿真支架。细胞支架复合培养后,扫描电镜显示细胞生长附着于支架表面;细胞与支架复合后增殖情况良好;7 d和14 d碱性磷酸酶活性高于对照组。结论:体外复合培养结果表明,RP技术制备的nano-HA/PCL支架和骨髓基质细胞生物相容性较好,可进一步应用于牙槽骨缺损骨组织工程修复动物实验。     

聚己内酯电纺纤维支架培养人牙周膜细胞的体外研究

目的：研究聚己内酯（PCL）电纺纤维支架上人牙周膜细胞的生物学行为，初步探讨PCL电纺纤维支架材料应用于牙齿再生和牙周组织工程研究的可行性。方法：采用静电纺丝法制备PCL电纺纤维支架。组织块法培养人牙周膜细胞（PDLC），传代扩增后接种于PCL电纺纤维支架上。激光共聚焦显微镜、扫描电镜观察人PDLC在支架材料上的黏附、生长情况，MTT法检测PCL电纺纤维支架对PDLC增殖的影响。结果：PCL电纺纤维支架呈无纺多孔网状结构，直径范围为338～424nm，纤维形态光滑均一。激光共聚焦显微镜、扫描电镜显示PDLC在支架上贴附牢固，伸展充分，增殖旺盛并分泌大量的细胞外基质。MTT法检测显示：PCL电纺纤维支架材料对PDLC生长增殖的影响与对照组培养板相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：PCL电纺纤维支架具有良好的生物相容性，有望作为一种新型的支架材料应用于牙周组织工程。     

EPL/PCL/HA复合支架修复兔颅骨骨缺损的实验研究

目的:观察EPL/PCL/HA复合支架能否用于骨缺损的修复.方法:20只新西兰大白兔颅骨上制备4个直径6mm的圆形贯通骨缺损,植入材料分为4组:1.BC,空白对照组;2.PCL组;3.PCL/HA组;4.EPL/PCL/HA组,分别在4周、8周时各处死10只动物.采用大体观察,micro-CT与硬组织磨片及组织切片等观察成骨效果.结果:EPL/PCL/HA复合支架在各时间点成骨效果均好于其他三组.结论:EPL/PCL/HA复合支架可以快速、有效修复兔颅骨临界骨缺损.     

3D打印含镁聚己内酯支架修复大鼠颅骨缺损

目的 评价3D打印含镁（Mg）聚己内酯（polycaprolactone,PCL）支架在大鼠颅骨缺损模型中的骨修复效果。方法 通过3D打印技术制备掺杂Mg微粒的PCL支架,以纯PCL支架为对照组,用扫描电镜（scanning electron microscopy,SEM）观察两种支架的表面形貌,用能谱分析仪（energy dispersive spectroscopy,EDS）分析表面元素成分,并通过接触角仪和电子万能试验机对其材料学性能进行表征。此外,将PCL-Mg支架浸入磷酸盐缓冲液中,连续28 d检测镁离子的释放行为。本研究已通过单位伦理委员会审查批准。建立SD大鼠颅骨临界尺寸缺损模型,根据植入支架材料不同,15只SD大鼠分为3组：PCL组、PCL-Mg组和对照组（未作处理）,每组5只。术后4周和8周进行micro-CT扫描检测分析,并在8周后获取颅骨缺损区样本及大鼠主要脏器进行组织学染色。结果 通过3D打印技术制备掺杂Mg微粒的PCL支架孔径为（480±25）μm,纤维直径为（300±25）μm,孔隙率约为66%。PCL-Mg支架含Mg 1.0 At%,表明Mg微粒的成功掺杂...     

辛伐他汀/聚己内酯静电纺丝膜的制备及其生物相容性评价

目的：制备辛伐他汀（simvastatin）/聚己内酯（Polycaprolactone,PCL）静电纺丝膜,评价其生物相容性.方法：制备PCL静电纺丝膜和simvastatin/PCL静电纺丝膜,通过扫描电镜观察两种膜片的形貌特征.选择人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）与膜片浸提液共培养,检测细胞增殖情况,评价材料毒性;PDLFs接种于膜片共培养7d,扫描电镜观察细胞生长情况,以直接接触法检测膜片的细胞毒性.将PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜植入大鼠皮下,术后14d取出标本,HE和Masson染色法进行组织学观察.结果：成功制备出纤维直径为纳米级别的simvastatin/PCL静电纺丝膜.细胞增殖试验和直接接触试验结果显示,PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜的浸提液细胞毒性试验均合格,细胞在材料上伸展充分,连接成片.PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜植入皮下2周后均有包膜形成;与PCL静电纺丝膜相比,simvastatin/PCL静电纺丝膜与周围组织界限较明显,反应层炎症细胞较少.结论：simvastatin/PCL静电纺丝膜的生物相容性良好,细胞毒性和组织相容性均符合生物支架材料的要求.     

PLGA/PCL/nHA生物支架复合兔BMSCs体外培养的实验研究

目的:研究新型复合支架聚乳酸-聚乙醇酸/聚己内酯/纳米羟基磷灰石(PLGA/PCL/nHA)的生物相容性,探讨其作为细胞培养材料和骨组织工程支架的可行性.方法:将兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)接种于PLGA/PCL/nHA复合支架上,体外共同培养后,MTT法检测BMSC...     

嵌入BMP-2蛋白微球双重缓释纳米纤维支架对MC3T3-E1细胞增殖、分化的影响

目的: 利用静电纺丝技术构建骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein,BMP-2)缓释纳米微球(nanospheres,NPs）的聚己内酯（polycaprolactone,PCL）复合纳米纤维支架材料,评价其对MC3T3-E1细胞增殖、分化的影响。方法: 采用去溶剂法和静电自组装技术制备载BMP-2的壳聚糖纳米微球,检测其形貌、粒径及成分,BMP-2蛋白包封率及体外缓释情况。利用静电纺丝技术制备含BMP-2纳米微球的PCL复合支架材料,检测其形貌、亲水性能及BMP-2蛋白的缓释情况。进行体外细胞学实验,观察细胞在材料中的生长情况,检测材料促细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、相关基因和矿化结节的形成情况。采用SPSS 21.0软件包进行统计学分析。结果: 成功制备出结构稳定的纳米微球结构,微球载药率高并可实现BMP-2的持续释放。PCL/BNPs支架材料组有着良好的亲水性能并有利于细胞增殖、分化。体外细胞实验结果显示,细胞在支架上铺展良好,黏附数量增加。ALP和相关成骨基因COL1、OPN和RUNX2均表达增高,钙结节大小和数量明显增加。结论: BMP-2缓释纳米微球的聚己内酯复合纤维支架材料可为骨组织工程的发展提供新的材料选择。     

重组人釉原蛋白促进人脐静脉内皮细胞成血管分化作用的研究

目的 观察重组人釉原蛋白(recombinant human amelogenin,rhAm)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)成血管作用的影响。方法 体外培养HUVEC,分别将浓度为0.1、10.0、50.0、100.0 μg/mL的rhAm作用于细胞,与对照组比较,采用MTT法观察HUVEC增殖,通过划痕实验观察HUVEC迁移,运用实时定量PCR和免疫印迹检测rhAm对HUVEC表达成血管相关基因及膜蛋白的影响,经由体外小管生成实验观察HUVEC小管样结构。结果 MTT结果显示,0.1 μg/mL和10.0 μg/mL rhAm可促进HUVEC的增殖(P＜0.05),100.0 μg/mL rhAm出现抑制HUVEC增殖的现象(P＜0.01);划痕实验结果显示,10.0 μg/mL rhAm可促进HUVEC迁移(P＜0.05);实时定量PCR结果显示,10.0 μg/mL rhAm可上调细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)(P＜0.01)和E选择素(E-selectin)(P＜0.05)的mRNA表达,血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-1、VEGFR-2 mRNA表达有上调趋势但不存在统计学差异;免疫印迹实验结果显示,10 μg/mL rhAm可上调ICAM-1(P＜0.01)的蛋白表达,E-selectin、VEGFR-1和VEGFR-2的蛋白表达有上调趋势但不存在统计学差异;体外小管生成实验显示,10 μg/mL rhAm可诱导HUVEC排列成小管样结构。结论 低浓度的rhAm能促进HUVEC的增殖及迁移和成血管相关基因及蛋白的表达,诱导小管样结构生成,提示rhAm在牙周组织再生过程中可能存在成血管作用。     

载银锌介孔钙硅纳米粒子与聚己内酯复合材料的体外生物活性研究

目的 评价载银(Ag)或锌(Zn)的介孔钙硅纳米粒子(mesoporous calcium-silicate nanoparticles,MCSNs)和聚己内酯(poly-ε-caprolactone,PCL)的复合材料的理化性能、体外生物活性及促进成骨能力.方法 通过加热熔融法制备PCL-MCSNs、PCL-Zn-M...     

Effects of benzo(a)pyrene and nicotine on prostaglandin synthesis in buccal pouch and submandibular glands of the Syrian hamster

Adult male Syrian hamsters were treated by swabbing the apex of the buccal pouch with corn oil (control, C), 1 mM benzo(a)pyrene (BP), nicotine (NC), or BP + NC in corn oil, twice daily, 5 days a week. After a 4-week treatment, the pouches and submandibular glands were dissected and used for the determination of endogenous prostaglandin (PG) production and studies on in vitro PG synthesis. Of the three PGs analysed (PGE₂, PGF₂ and 6-keto-PGF₁), PGE₂ was predominant in the pouch and the glands. BP or NC alone had only a weak effect on PG synthesis in both tissues. However, the combination of BP and NC had a synergistic effect, causing diminished PG synthesis in both tissues. In buccal pouch, BP + NC significantly decreased the concentrations of endogenous PGE₂ and PGF₂ (PGE₂: 0.669 + 0.254 versus 1.698 + 0.460, PGF₂: 0.273 ± 0.090 versus 0.625 ± 0.272 ng/g tissue; BP + NC versus C; mean ± SD, n = 5, p < 0.05). Similarly significant results were also found for in vitro PG synthesis (PGE₂: 0.541 ± 0.249 versus 1.399 ± 0.340, PGF₂: 1.045 ± 0.428 versus 2.133 ± 0.510 ng/g tissue; BP + NC versus C; mean ± SD, n = 5, p < 0.05). In submandibular glands, BP + NC significantly diminished the concentration of endogenous PGE₂ (1.183 ± 0.175 versus 2.379 ± 0.488 ng/g tissue; BP + NC versus C; mean ± SD, n = 5, p < 0.05). The synthesis of 6-keto-PGF₁ in both tissues, and the synthesis of PGF₂ in submandibular gland, were slightly decreased with all treatments.     

神经营养素3促进人牙囊细胞成骨分化

目的 研究神经营养素3（NT-3）对人牙囊细胞（hDFCs）成骨分化的影响。方法 体外分离并培养hDFCs,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,CCK-8法检测不同质量浓度NT-3对hDFCs增殖活性的影响,同时检测NT-3对hDFCs的碱性磷酸酶（ALP）活性,以及骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、骨钙素（OCN）mRNA相对表达量的影响,并用茜素红染色法检测矿化情况。结果 波形丝蛋白和角蛋白染色结果表明hDFCs为间充质细胞来源。NT-3对hDFCs增殖活性无明显影响;当NT-3质量浓度为25、50、100 ng·mL^-1时能明显增强ALP活性,提高BMP-2、OCN mRNA的相对表达量,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）,NT-3质量浓度为100 ng·mL^-1时BMP-2、OCN mRNA的相对表达量达到最高。当NT-3质量浓度为50、100 ng·mL^-1时矿化结节数量最多。结论 适宜质量浓度的NT-3能促进hDFCs的成骨分化。     

二维及三维培养对人舌鳞状细胞癌TCA8113细胞株生物学特性的影响

目的: 比较二维及三维方式培养的人舌鳞状细胞癌(简称鳞癌)TCA8113细胞株对细胞的增殖、组织形态及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性的影响,为体外舌鳞癌的研究提供培养方法。方法: 倒置显微镜和苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察二维及三维培养的人舌鳞癌TCA8113细胞的形态;噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察两种培养体系中细胞的增殖;酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测两种培养体系中LDH活性的改变。结果: 倒置显微镜和HE染色观察到三维培养体系中TCA8113细胞成团生长;与二维培养体系比较,三维培养体系中细胞较长时间保持良好的增殖状态,LDH的活性较二维培养的细胞活性显著增高。结论: TCA8113细胞藻酸盐凝胶三维培养体系较二维培养体系能更好地体现细胞的生物学特性。     

K2O-Na2O-Al2O3-SiO2系统牙科微晶玻璃匹配氧化铝陶瓷的初步研究

目的:研究 K₂O-Na₂O-Al₂O₃-SiO₂系统牙科微晶玻璃匹配氧化铝陶瓷的热处理温度制度。方法:根据氧化铝陶瓷的热膨胀系数调整K₂O-Na₂O-Al₂O₃-SiO₂系统牙科微晶玻璃的原材料配比,利用K₂O-Na₂O-Al₂O₃-SiO₂系统牙科微晶玻璃的热处理温度制度形成微晶玻璃-氧化铝陶瓷复合材料;利用偏振光显微镜和X射线衍射分析仪观察样品的形态及显微结构特性,利用材料试验机测试材料的抗压强度。结果:经过原材料组份的调整,白榴石晶粒约1.0 μm、在玻璃基质中分布均匀;微晶玻璃-氧化铝陶瓷复合材料的抗压强度为500 MPa。结论:K₂O-Na₂O-Al₂O₃-SiO₂系统牙科微晶玻璃的热处理温度制度适合匹配氧化铝陶瓷。     

Uptake of fluoride by human surface enamel from ammonium bifluoride and consequent reduction in the penetration in vitro by caries-like lesions

In-vitro fluoride uptake by mid-coronal, premolar enamel surfaces from topically-applied solutions of NH₄HF₂ was determined using a multi-electrode system for fluoride and calcium analyses. In tooth surfaces dehydrated with 100 per cent ethanol before the topical application of 1 per cent aqueous NH₄HF₂, there was a 2–3-fold increase in fluoride concentration up to a depth of 50 μm and fluoride enhancement to a total depth of 100 μm into the enamel. Caries-like lesions were induced in vitro in both treated and untreated enamel by the use of acidified, 6 per cent hydroxymethyl-cellulose gel containing 0.04 per cent hydroxyapatite at pH 4.5. After 120 days exposure, the mean depth of lesion penetration in the controls was 149 (±34) μm. No lesions occurred in half the treated specimens; in specimens with lesions, the mean depth of penetration was 19 (± 3) μm. Thus, NH₄HF₂ was a potent inhibitor of caries-like lesion formation in vitro.     

靶向舌癌多功能纳米粒的制备和体外实验

目的 制备一种基质细胞衍生因子-1（SDF-1）修饰的载多西紫杉醇（DOC）包裹吲哚菁绿（ICG）和液态氟碳全氟己烷（PFH）靶向多功能纳米粒（DOC-SINPs）,检测其性质。方法 双乳化法制备纳米粒,硫醚键连接SDF-1,得到靶向纳米粒。Malvern粒径仪检测其粒径及表面电位,激光扫描共聚焦显微镜观察SDF-1在纳米粒表面的连接情况,高效液相色谱法（HPLC）测定其DOC包封率（ELC）和载药量（DLC）及体外释放规律,热成像仪记录其体外光热特性,光声仪及超声诊断仪观察其体外显像,流式细胞仪评估其体外靶向能力,CCK-8法检查其对舌癌SCC-15细胞活力的影响。结果 靶向多功能纳米粒形态规则,呈球状。平均粒径（502.88±17.92） nm,平均电位（-11.5±3.15） mV。平均ELC为54.12%±1.74%,平均DLC为1.08 mg·mL^-1。体外药物释放规律呈初期爆发性释放,接着是持续缓慢释放。其光热特性呈浓度相关,浓度越高温度越高。纳米粒可检测到明显光声信号和超声信号。体外靶向连接率89.99%。细胞活性实验结果表明,SINPs组在各个浓度下细胞活性无明显差异（P>0.05）。在浓度为150、200 μg·mL^-1时,DOC-SINPs无论有无激光辐照均较SINPs有明显的细胞活性抑制（P<0.05）。结论 成功制备了集诊断与治疗一体的多功能纳米粒,具有超声/光声双模成像,同时具备化疗和光热治疗的抗肿瘤作用。     

载VEGF/VAN多层海藻酸钠-壳聚糖微球的制备及其体外抗感染能力和稳定性研究

目的:制备载有血管内皮生长因子(VEGF)和万古霉素(VAN)的多层海藻酸钠(SA)-壳聚糖(CS)微球,并讨论其体外抗感染能力和稳定性。方法:采用滴注法和层层自组装技术制备多层载药微球;纸片法实验检测微球体外抗感染能力;分别采用ELISA法和紫外分光光度法测定微球中VEGF和VAN的载药量和包封率;微球经过不同条件处理后,通过SEM观察微球表面和截面形态,并分别测定不同条件处理后微球内VEGF和VAN的有效释放量的变化。结果:肉眼观制备出的微球呈类球形;VEGF和VAN的载药量分别为6.63×10^-5%和1.39%,包封率分别为72.1%和3.37%;微球溶解后,溶液对金黄色葡萄球菌的抑菌环直径为(12.61±1.01) mm;不同条件处理后,微球直径约为900~1100 μm,表面完整,存在少许褶皱,截面呈致密网状结构;不同条件处理后微球内VEGF和VAN的有效释放量均有一定下降。结论:本实验制备的载VEGF/VAN多层微球粒径均匀,对金黄色葡萄球菌具有一定抑菌效果,需低温(-80 ℃)且避光储存。     

选择性激光烧结多孔钛种植体及其性能研究

目的 分析选择性激光烧结（SLS）多孔钛种植体的机械性能及生物相容性,探讨其与壳聚糖（CS）/羟磷灰石（HA）复合涂层结合后的促骨结合作用。方法 制备Ti6Al4V试件,部分试件表面进行CS/HA涂层处理;对试件进行扫描电子显微镜观察和机械性能检测;体外培养MC3T3-E1细胞,进行活/死细胞染色、甲基噻唑基四唑（MTT）及碱性磷酸酶（ALP）水平检测;将柱状螺纹种植体植入兔股骨髁部,分析其体内生物学性能。结果 试件准弹性梯度随孔隙率增大而减小,孔隙率为30%时与皮质骨接近,70%时与松质骨接近;试件具有良好的生物相容性。复合CS/HA涂层后可促进MC3T3-E1细胞增殖、分化,有利于骨组织长入孔隙,形成良好的骨结合。结论 多孔钛种植体具有良好的机械性能和生物相容性,与CS/HA涂层结合后具有骨诱导性,利于形成稳定的骨结合。