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1.
目前常规结核分枝杆菌(MTB)细菌学检查和药敏检测尚无法充分满足临床需要。以噬菌体为基础的结核分枝杆菌裂解试验,利用噬菌体生长快、特异性高的特性,快速准确地检测MTB,并进行药敏检测,近年来在结核病研究中备受关注[1-2]。本研究采用噬菌体裂解法快速检测肺结核患者痰标本中的MTB,同时检测对异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)的敏感性,并与改良罗氏培养法分离细菌及比例法药敏结果进行比较,现报告如下。  相似文献   

2.
结核病是当今最具威胁传染病之一,耐药结核病增加是疫情上升重要因素之一。对本院2002—2006年期间住院结核病患者进行了耐药性检测,报告如下。资料与方法1.检测对象:2 380例患者来自宜昌市辖区,均为2002—2006年本院收治的住院肺结核患者。其中男1 870例,女510例,年龄13~85岁之间,平均年龄41.7岁。肺结核选例标准:(1)初始病例:从未用过结核药物或用过结核药物史小于1个月者。(2)获得性病例:为抗结核治疗史1个月以上者。2.方法:留取治疗前痰标本,2002年1月—2006年1月期间检测应用BACTEC460系统,将处理病人痰标本接种至BBLTMMGITTM快速培养检测试剂管(试剂管为美国BD公司生产)。对培养阳性菌株进行分枝杆菌菌群鉴定,在试剂瓶中加入NAP试剂,观察GI指数,如继续生长为非结核分枝杆菌,如生长受到抑制为结核分枝杆菌。对确定为结核分枝杆菌采用绝对浓度间接法进行耐药检测,采用罗氏培养基按常规进行药敏试验并记录各菌株药敏试验的结果和时间。共进行了6种药物耐药性检测,耐药浓度界限分别为异烟肼(H)1μg/ml,利福平(R)50μg/ml,对氨水杨酸钠(P)1μg/ml,链霉素(...  相似文献   

3.
目的:评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescent polymerase chain reaction probe melting curve, MeltPro)技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值。方法:收集2021年5月至2022年5月北京市疾病预防控制中心结核病门诊收治的GeneXpert MTB/RIF检测阳性的初治肺结核患者的痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、MeltPro技术利福平耐药性检测。分析痰标本荷菌量对MeltPro技术耐药性检测结果的影响;培养阳性菌株行利福平比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”),比较比例法药敏试验、GeneXpert MTB/RIF和MeltPro技术检测利福平耐药率的差异;并以培养阳性菌株利福平比例法药敏试验结果为参考标准,评价MeltPro技术耐药性检测的效能。结果:研究共收集结核分枝杆菌阳性合格痰标本158份(例),经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。MeltPro技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药的成功率为79.1%(125/158),且随着痰涂片结果等级的升高,检测成功率由“阴性...  相似文献   

4.
目的通过检测抗结核药物-利福平、异烟肼以及链霉素对结核分枝杆菌RD区(Region of Differences,RD)基因的IC50(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,筛选对3种抗结核药物敏感或耐药的毒性结核分枝杆菌RD区基因。方法将结核分枝杆菌RD6、RD9和RD15区基因与穿梭质粒pMV261连接,连接产物电转化耻垢分枝杆菌中。分别将对数生长期的耻垢分枝杆菌以及重组耻垢分枝杆菌中加入浓度倍比稀释的异烟肼(0.031 25~4μg/ml)、利福平(0.031 25~4μg/ml)和链霉素(0.031 25~4μg/ml)100μl,37℃培养2d后,用酶标仪测A600值。用Graphpad Prism5计算IC50值并进行统计学分析。结果成功构建RD6、RD9和RD15区基因重组质粒,电转化入耻垢分枝杆菌后通过检测利福平、异烟肼以及链霉素对以上RD区基因的IC50值,成功筛选出对链霉素敏感的RD6区基因Rv1508c。同时对Rv1508c在分枝杆菌(毒性结核分枝杆菌H37Rv、减毒结核分枝杆菌H37Ra、BCG、耻垢分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌以及海洋分枝杆菌)中的分布做了鉴定,确定其只存在于H37Rv和H37Ra中。结论结核分枝杆菌RD6区基因Rv1508c能促进分枝杆菌对链霉素的敏感,使链霉素杀伤分枝杆菌作用增强,Rv1508c作为链霉素一个靶点,在今后研究中,Rv1508c可作为抗结核药物增敏剂的应用。  相似文献   

5.
目的通过检测抗结核药物-利福平、异烟肼以及链霉素对结核分枝杆菌RD区(Region of Differences,RD)基因的IC50(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,筛选对3种抗结核药物敏感或耐药的毒性结核分枝杆菌RD区基因。方法将结核分枝杆菌RD6、RD9和RD15区基因与穿梭质粒pMV261连接,连接产物电转化耻垢分枝杆菌中。分别将对数生长期的耻垢分枝杆菌以及重组耻垢分枝杆菌中加入浓度倍比稀释的异烟肼(0.031 25~4μg/ml)、利福平(0.031 25~4μg/ml)和链霉素(0.031 25~4μg/ml)100μl,37℃培养2d后,用酶标仪测A600值。用Graphpad Prism5计算IC50值并进行统计学分析。结果成功构建RD6、RD9和RD15区基因重组质粒,电转化入耻垢分枝杆菌后通过检测利福平、异烟肼以及链霉素对以上RD区基因的IC50值,成功筛选出对链霉素敏感的RD6区基因Rv1508c。同时对Rv1508c在分枝杆菌(毒性结核分枝杆菌H37Rv、减毒结核分枝杆菌H37Ra、BCG、耻垢分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌以及海洋分枝杆菌)中的分布做了鉴定,确定其只存在于H37Rv和H37Ra中。结论结核分枝杆菌RD6区基因Rv1508c能促进分枝杆菌对链霉素的敏感,使链霉素杀伤分枝杆菌作用增强,Rv1508c作为链霉素一个靶点,在今后研究中,Rv1508c可作为抗结核药物增敏剂的应用。  相似文献   

6.
目的发现新安莎类抗生素,康乐霉素A体外抗结核活性。方法应用色谱技术从地中海诺卡氏菌康乐变株1747-64发酵液中分离康乐霉素A,并采用试管二倍稀释法,进行康乐霉素A对耻垢分枝杆菌(ATCC14468),结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294),H37Ra(ATCC25177),临床分离的氧氟沙星(OFLX)敏感结核分枝杆菌以及临床分离的耐氧氟沙星结核分枝杆菌最低抑制浓度(Minimal Inhibitor Concentration,MIC)的试验。结果康乐霉素A对耻垢分枝杆菌活性弱,MIC为64μg/ml,对结核分枝杆菌H37Rv,H37Ra的MIC为8μg/ml,对临床分离的氧氟沙星敏感结核分枝杆菌菌株的MIC范围为1~8μg/ml,临床分离的耐氧氟沙星结核分枝杆菌菌株的MIC范围为1~16μg/ml。结论新安莎类抗生素,康乐霉素A体外具有明显的抗结核活性,有望成为新抗结核药物或先导化合物。  相似文献   

7.
噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 建立快速测定结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性测定中的应用价值。探讨噬菌体检测技术(PhaB)快速检测氧氟沙星抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值。 方法 应用PhaB测定205株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对氧氟沙星的耐药性,并与绝对浓度法药敏结果比较,对两法检测结果不一致的菌株进行比例法测定。 结果 以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则PhaB检测OFX的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值(PPV、NPV)及准确度分别为95.4%、93.2%、91.2%、96.5% 和94.1%,共有12株菌株PhaB法药敏结果与绝对浓度法检测结果不符,其中9株PhaB法药敏结果与比例法相符合。 结论 PhaB检测氧氟沙星药敏结果与绝对浓度法有较高的一致率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法。  相似文献   

8.
目的评价PCR熔解曲线法联合交叉引物扩增技术(CPA)快速检测耐药肺结核的临床价值。方法 2018年1月-2019年5月济宁市传染病医院结核门诊初诊疑似肺结核患者310例,采集痰标本,涂片,做萋苨氏染色、CPA检测、分枝杆菌BACTEC-MGIT 960快速分离培养及熔解曲线耐药检测,对培养阳性菌株进行菌型鉴定和比例法药敏试验。结果 310例患者痰标本涂片检查分枝杆菌阳性61例,阳性率19.7%(61/310),敏感度和特异度分别为62.2%和95.6%;痰培养分枝杆菌阳性141例,阳性率45.5%(141/310)。菌型鉴定为结核分枝杆菌(MTB)感染132例,非结核分枝杆菌(NTM)感染9例;CPA检测阳性148例,阳性率47.7%,方法的敏感度和特异度分别为94.2%和90.1%。以比例法药敏试验为金标准对132例患者的MTB分离菌株或CPA检测为阳性的痰标本进行探针熔解曲线耐药检测,RFP、INH、EMB、SM等4种抗结核药物检测的敏感度分别为96.82%、92.06%、86.79%和83.93%,特异度分别为95.65%、94.20%、78.48%和80.26%,诊断率分别为96.21%、93.18%、81.81%和81.81%。结论 PCR熔解曲线法和CPA检测技术操作简单、稳定、快速,特异度和敏感度较高,可提高MTB的检出率,两种方法联合使用可快速筛查患者MTB的耐药性。  相似文献   

9.
噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌标准化研究   总被引:17,自引:1,他引:17  
目的 对噬菌体生物扩增法快速检测和鉴别标本中分枝杆菌的方法学进行探讨。方法 对噬菌体生物扩增法的条件 :感染时间、杀灭胞外噬菌体的药物浓度和时间进行探讨和比较 ;观察不同分枝杆菌应用此法的检测灵敏度和特异性 ,以及对呼吸道常见细菌的特异度 ;观察实验中所用噬菌体、杀菌剂、辅助细菌在 2 8~ 4 0周内的稳定性。结果  (1)结核分枝杆菌与噬菌体感染 3~ 4h时感染效率较高 ,4 %硫酸亚铁胺 10 0 μl作用 5min能全部杀灭 1 1ml中 1× 10 9噬菌斑形成单位(PFU)的噬菌体 ;(2 ) 80~ 2 0 0集落形成单位 (CFU) /ml的结核分枝杆菌活菌能用此法检测出阳性结果 ,非结核分枝杆菌≤ 1× 10 3 CFU/ml时仅耻垢分枝杆菌出现阳性结果 ,特异性为 95 % ,而≥ 1× 10 4CFU/ml时结果依据不同的菌株而不同 ,呼吸道常见的非分枝杆菌细菌用此法的检测特异性为 10 0 % ;(3)液体 4℃保存实验中的主要成分 ,稳定性均较好。结论 应用噬菌体方法可以快速检测和鉴别结核分枝杆菌 ,所需试剂的稳定性较好 ,为广泛应用于临床检测提供了依据。  相似文献   

10.
目的建立快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性测定中的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法测定112株结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用Bactec MGIT 960测定其最低抑菌浓度(MIC)。以细菌接种量为10-3mg/ml,药物浓度5μg/ml、37℃作用24 h为药敏试验条件。结果噬菌体法测定112株结核分枝杆菌临床分离株卷曲霉素敏感91株、耐药21株,绝对浓度法敏感92株、耐药20株;两法测定均为敏感89株、均为耐药18株。在5株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中,3株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则噬菌体法测定卷曲霉素耐药性的敏感性为90%(18/20),特异性为96.7%(89/92),阳性预测值为85.7%(18/21),阴性预测值为97.8%(89/91),准确性为95.5%(107/112)。结论噬菌体生物扩增法测定卷曲霉素耐药性简便快速,只需2 d时间,操作不需特殊仪器设备,具有很高的敏感性和特异性,可作为MTB的卷曲霉素耐药性快速筛选方法,建议临床推广应用...  相似文献   

11.
噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌方法学研究   总被引:40,自引:2,他引:40  
目的建立噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件.方法应用分枝杆菌噬菌体感染结核分枝杆菌,比较各种检测条件对测定结果的影响,并将所建方法用于痰标本检测,结果与BIOTEC Lab公司产品比较.结果 1×109噬菌斑形成单位(PFU)/ml的噬菌体,37℃感染 60 min可检出200~500条/ml结核分枝杆菌.杀毒剂100 mmol /ml,室温作用5 min可完全灭活受试噬菌体.指示细胞浓度在1×108条/ml 时,形成的噬菌斑清晰,便于计数.加热灭活的细菌和指示细胞不被噬菌体感染.H37Rv、H37Ra和牛分枝杆菌参考菌株检测结果均为阳性,7种非分枝杆菌和16种常见非结核分枝杆菌检测结果为阴性,4种非结核分枝杆菌(偶然、胞内、金色、草分枝杆菌)在高浓度时(>1×105条/ml)检测结果为阳性.重复试验结果表明,本法批间和批内变异系数均<15%.痰标本氢氧化钠-半胱氨酸液化方式的阳性检出率为94%(49/52),显著高于氢氧化钠液化结果的62%(32/52,χ2=15.06,P<0.01);预培养1 d的阳性检出率为65%(51/78),显著高于未预培养结果的40%(31/78,χ2=18.05,P<0.01).临床标本检测结果表明,我们的试剂与进口试剂检测结果基本相同.结论噬菌体生物扩增法快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆菌的快速检测,但是测定条件的选择极为重要.  相似文献   

12.
建立牛分枝杆菌噬菌体快速检测技术,探讨最佳的检测条件,并将建立的方法用于牛分枝杆菌及16种常见非结核分枝杆菌和6种其他细菌的检测。结果表明,噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h为最佳检测条件。杀毒剂浓度在100mmol/L,室温作用10min即可完全杀灭受试噬菌体。选择浓度为4mg/ml的对数生长期指示细菌为工作浓度,获得理想的检测结果。加热灭活的细菌和指示细菌不被噬菌体感染。牛分枝杆菌和耻垢分枝杆菌检测结果为阳性,16种常见非结核分枝杆菌和6种其他细菌检测结果均为阴性。该法可检测出60~120条/ml牛分枝杆菌。重复性试验表明,批内、批间变异系数均小于15%,重复性良好。  相似文献   

13.
噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值比较   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的比较噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值。方法对168份临床诊断为肺结核患者的痰标本同时应用噬菌体裂解法和涂片法检测,对照分析结果。结果168份痰标本,噬菌体裂解法检出阳性率58.9%(99/168),显著高于涂片法萋-奈氏染色的38.1%(64/168)及金胺0染色的41.1%(69/168),(P<0.01),噬菌体裂解法对涂片阴性的标本的检出率高达39.4%(39/99)。结论噬菌体裂解法与涂片法相比,具有较高的敏感性和特异性,是一种崭新的结核分支杆菌快速快速检测方法。  相似文献   

14.
目的探讨Xpert MTB/RIF检测方法在结核病辅助诊断中的应用价值。方法收集2013年8月至2014年3月同时对同一份标本进行结核分枝杆菌(MTB)液体培养(以下简称TB培养)和Xpert MTB/RIF实验的149例临床诊断为结核患者的资料,统计结果,并以TB培养为金标准对结果进行分析。结果149份标本中有痰液标本106份,胸水标本43份。Xpert MTB/RIF法检测结核分枝杆菌阳性率为63.8%(95/149),TB培养法检测结核分枝杆菌阳性率为51.0%(76/149),Xpert MTB/RIF检测法对痰液标本检出率为65.1%(69/106),TB培养检测法对痰液标本检出率为67.9%(72/106),Xpert MTB/RIF检测法对胸水标本检出率为60.5%(26/43),TB培养检测法对胸水标本检出率为9.3%(4/43)。结论 Xpert MTB/RIF检测法检测标本中结核分枝杆菌与TB培养法有较高一致性,Xpert MTB/RIF检测法对肺外结核的诊断可能有较高价值,在结核分枝杆菌及其对利福平耐药快速检测方面有比较好的应用前景。  相似文献   

15.
目的 探讨豫北地区结核分枝杆菌临床分离株基因型及四种二线药物耐药性分布.方法 纳入豫北地区2019年收治肺结核痰涂片阳性培养标本中,结核分枝杆菌(MTB)菌株共2280株,均行MTB基因型鉴定和药敏试验检查,分析纳入患者一般资料和风险因素,评价MTB基因型与再次抗结核治疗耐药性间相关性.结果 2280株MTB菌株中北京...  相似文献   

16.
目的 应用PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变,评价此方法用于结核分枝杆菌利福平 (RFP)耐药性的意义。方法 以结核分枝杆菌H37Rv为对照、50例耐RFP(单耐和多耐)结核分枝杆菌临床分离株、12例RFP敏感菌株、35例耐RFP肺结核患者痰标本,采用PCR-SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌rpoB基因突变。结果 50例耐RFP菌株中有45例PCR-SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别,与药敏试验结果做对比,PCR-SSCP检测敏感性为90%,特异性为100%;12例敏感菌株与H37Rv条带一致,35份肺结核病人痰标本,21份痰PCR扩增阳性,15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别,而且PCR-SSCP28份图谱与H37Rv有差别,阳性率为80%。结论 PCR-SSCP检测结核分枝杆菌rpoB基因突变快速、简便、易行,有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定,并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法。  相似文献   

17.
目的 应用PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变,评价此方法用于结核分枝杆菌利福平 (RFP)耐药性的意义。方法 以结核分枝杆菌H37Rv为对照、50例耐RFP(单耐和多耐)结核分枝杆菌临床分离株、12例RFP敏感菌株、35例耐RFP肺结核患者痰标本,采用PCR-SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌rpoB基因突变。结果 50例耐RFP菌株中有45例PCR-SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别,与药敏试验结果做对比,PCR-SSCP检测敏感性为90%,特异性为100%;12例敏感菌株与H37Rv条带一致,35份肺结核病人痰标本,21份痰PCR扩增阳性,15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别,而且PCR-SSCP28份图谱与H37Rv有差别,阳性率为80%。结论 PCR-SSCP检测结核分枝杆菌rpoB基因突变快速、简便、易行,有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定,并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法。  相似文献   

18.
目的评估Xpert MTB/RIF技术在快速诊断肺结核及利福平耐药的临床应用价值。方法收集肺结核患者痰标本420例,同时进行涂片法、MGIT液体培养法(简称"液培法")+微孔板比例法药敏试验((简称"药敏法")及Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌(Mtb)和利福平耐药。分别以液培法和药敏法为金标准,分析Xpert MTB/RIF检测Mtb和利福平耐药的效能,比较不同方法检测Mtb和利福平耐药的阳性检出率。结果 Xpert MTB/RIF和涂片法检测Mtb的灵敏度为84. 80%、30. 40%(P 0. 05),特异度为78. 82%、98. 82%((P 0. 05)。Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的灵敏度为100. 00%,特异度为97. 65%。Xpert MTB/RIF检测Mtb阳性检出率为59. 05%,涂片法为18. 57%(P 0. 05),液培法为59. 52%(P 0. 05)。Xpert MTB/RIF检测利福平耐药阳性检出率为21. 70%,药敏法为19. 81%(P 0. 05)。结论与传统涂片法和液培法及药敏试验比,痰标本中Xpert MTB/RIF技术检测Mtb尤其是检测利福平耐药具有较高的敏感度、特异度,时间短,准确性高,一致性较好,对肺结核早期诊断与治疗有重要意义。  相似文献   

19.
目的 建立快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性测定中的应用价值。方法 应用噬菌体生物扩增法测定112株结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用Bactec MGIT 960测定其最低抑菌浓度(MIC)。以细菌接种量为10-3mg/ml,药物浓度5μg/ml、37℃作用24 h为药敏试验条件。结果 噬菌体法测定112株结核分枝杆菌临床分离株卷曲霉素敏感91株、耐药21株,绝对浓度法敏感92株、耐药20株;两法测定均为敏感89株、均为耐药18株。在5株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中,3株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则噬菌体法测定卷曲霉素耐药性的敏感性为90%(18/20),特异性为96.7%(89/92),阳性预测值为85.7%(18/21),阴性预测值为97.8%(89/91),准确性为95.5%(107/112)。结论噬菌体生物扩增法测定卷曲霉素耐药性简便快速,只需2 d时间,操作不需特殊仪器设备,具有很高的敏感性和特异性,可作为MTB的卷曲霉素耐药性快速筛选方法,建议临床推广应用。  相似文献   

20.
应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌   总被引:41,自引:7,他引:34  
目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份(95%);21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份(71%);19份涂阴培阴痰标本,5份阳性(26%)。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。  相似文献   

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