MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织内Nrf2 / HO-1 / NQO1 信号通路的影响

【摘要】 目的 探讨皮肤再生医疗技术 (MEBT/ MEBO) 对大鼠慢性难愈合创面组织内核转录因子红系 2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)/ 醌氧化还原酶1(NQO1)信号通路的影响。 方法 选取90只SPF级 Wistar雄性大鼠适应性饲养1周后,采用随机数表法将其随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO 组和贝复新组,每组18只。 其中空白组大鼠只做备皮处理, 对照组大鼠建立急性创面模型, 模型组、MEBO组和贝复新组大鼠建立慢性难愈合创面模型。模型建立后,空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以生理盐水纱布换药处理, MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(MEBO)药纱换药处理,贝复新组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶药纱换药处理, 对比观察各组大鼠创面愈合率、组织病理学变化情况以及皮肤/ 创面组织内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及Nrf2、HO-1、NQO1 蛋白与 HO-1、NQO1 mRNA 表达水平。结果 干预第 3 天, 各组大鼠创面愈合率尤以对照组最高、贝复新组次之 (P均＜0.05); 干预第 7、14 天, 各组大鼠创面愈合率尤以 MEBO 组最高、贝复新组次之 (P均＜0.05)。 HE 染色结果显示, 干预第 3、7、14 天,对照组、MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内坏死细胞及炎性细胞逐渐减少, 成纤维细胞与毛细血管逐渐增多,而模型组大鼠创面组织内坏死细胞和炎性细胞减少不明显; Masson 染色结果显示, 干预第 3、7、14 天, 对照组?MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内胶原纤维由细少且紊乱逐渐趋于粗大且平整, 而模型组大鼠创面组织内胶原纤维虽逐渐增粗、增多, 但排列仍较紊乱。 干预第 7 天, 对照组、MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内 MDA 表达水平均明显低于模型组 (P均＜0.05); 干预第 3、7 天, 对照组、MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内 SOD 表达水平均明显高于模型组 (P均＜0.05)。 干预第 3、7 天, MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内 Nrf2、HO-1、NQO1 蛋白以及 HO-1、NQO1 mRNA 表达水平均明显高于空白组、对照组和模型组 (P均＜0.05), 且干预第 7天, MEBO 组大鼠创面组织内 Nrf2、HO-1 蛋白以及 HO-1 mRNA 表达水平均明显低于贝复新组 (P均＜0.05)。结论 MEBT/ MEBO 可能能够通过激活 Nrf2 / HO-1 / NQO1 信号通路减轻大鼠慢性难愈合创面氧化应激损伤, 促进创面再生修复。     

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织中EGFR表达的影响

目的研究探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。方法将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组(12只)、对照组(12只)、模型组(12只)、贝复新组(12只)及MEBO组(12只),其中,空白组大鼠做背部备皮处理后采用生理盐水纱布湿敷;对照组大鼠做深达筋膜层的全层皮肤缺损创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;模型组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;贝复新组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用贝复新治疗;MEBO组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用MEBO治疗。分别于治疗第3、7、14天取各组大鼠相同部位皮肤或创面组织进行HE染色,并用Western blot法检测组织中EGFR的含量,对比观察各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR的表达水平及组织病理变化。结果局部处理后第3、7天,除空白组外,其余各组大鼠创面组织HE染色病理切片均显示炎症细胞增多,有新生血管生成;局部处理后第14天,对照组、贝复新组、MEBO组大鼠创面组织中炎症细胞消失,创面再上皮化。局部处理后第3、7、14天,空白组大鼠背部皮肤组织中EGFR表达水平无明显变化,F=0.667,P0.05,差异无统计学意义;对照组、模型组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平变化均较明显,F值分别为79.546、89.600、63.036、56.628,P均0.01,差异具有统计学意义,其中对照组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平均呈先升高后降低的趋势,而模型组则呈递增趋势;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平组间两两对比,除贝复新组与MEBO组对比,P0.05,差异无统计学意义外,其余各组组间两两对比,P均0.05,差异具有统计学意义;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平多个样本均数对比,F值分别为57.036、134.368、92.829,P均0.01,差异具有统计学意义。结论 MEBT/MEBO可通过上调大鼠慢性难愈合创面组织中EGFR的表达水平,促进慢性难愈合创面的愈合,能够为MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面的临床应用提供理论基础。     

海水浸泡对大鼠小肠组织NF-κB,IκBα表达的影响

目的 观察海水浸泡并创伤大鼠小肠NF-κB,IκBα达的变化规律.方法 Wistar大鼠91只,随机分为3组:空白对照组7只,创伤组42只,海水浸泡并创伤组42只.创伤组采用腹部开放伤模型,海水浸泡并创伤组在腹部开放伤的基础上海水浸泡1 h.采用Western blotting方法测定3组小肠组织NF-κB,IκBα达量并进行统计分析和组间比较.结果 与创伤组相比,海水浸泡并创伤组伤后3 h小肠组织NF-κB的表达即出现明显增高,并一直持续到72 h(P<0.05),创伤组似较空白组略有降低,但差异无统计学意义(P>0.05);IκBα变化规律与NF-κB相反.结论 IκBα速而且持续地参与了海水浸泡并创伤大鼠的炎症反应过程,海水浸泡并创伤组大鼠伤情严重,损伤因素持续存在.在相当长一段时间内NF-κB负反馈机制并未得到建立.     

模拟失重对大鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的研究模拟失重条件下健康大鼠肺组织中核因子-κB（NF-κB）的表达变化及其意义。方法采用尾悬吊模拟失重大鼠模型，分为悬吊7天、21天组及相应对照组，每组10只健康雄性Wistar大鼠。免疫组织化学法检测肺组织中NF-κB的表达水平。结果悬吊7天及21天组大鼠肺组织NF-κB表达水平与相应对照组比较均显著升高（P〈0．01，P〈0．05）。悬吊21天组大鼠肺组织中NF-κB表达水平较悬吊7天组减弱（P〈0．05）。结论尾悬吊模拟失重大鼠肺组织NF-κB表达水平明显上调，考虑与肺组织损伤有关。     

硫化氢抑制p38MAPK和NF-κB p65信号通路活性改善糖尿病心肌纤维化的作用和机制

目的 研究外源性硫化氢(H2S)对糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的改善作用及其机制.方法 24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(ALX组)、低剂量NaHS治疗组(ALX+LDNaHS组)、高剂量NaHS治疗组(ALX+HDNaHS组),每组6只.采用四氧嘧啶(ALX)200mg/kg腹腔注射建立糖尿病小鼠模型,造模成功后,NC组和ALX组每天自由饮用自来水,ALX+LDNaHS组和ALX+HDNaHS组自由饮用浓度分别为30μmol/L和90μmol/L的NaHS(H2S供体)溶液.喂养8周后取材,采用HE染色观察心肌组织形态学变化,Real-time PCR检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65) mRNA的表达,Western blotting检测p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果 与NC组比较,ALX组心肌组织胶原表达量增加,心肌间质出现纤维化,p38MAPK、NF-κB p65 mRNA表达明显增加(P＜0.01),同时p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白表达也明显增高(P＜0.01).经硫化氢干预后糖尿病小鼠心肌纤维平行排列,心肌组织胶原表达量明显减少,心肌间质有少量结缔组织;p38MAPK、NF-κB p65 mRNA表达明显减少(P＜0.01),p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白表达明显下降(p＜0.01),且ALX+HDNaHS组较ALX+LDNaHS组明显改善(P＜0.05).结论 H2S可改善糖尿病小鼠心肌纤维化,可能与调节p38MAPK和NF-κB p65介导的炎症反应有关.     

抑制NF-κB激活的策略

NF-κB是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子。它可以参与机体的炎症反应、免疫反应、细胞分化与凋亡及其他应激反应。NF-κB启动基因的表达涉及到IKK的激活、IκB磷酸化和泛素化、IκB裂解、NF-κB向核内的迁移、NF-κB与DNA的结合等过程。NF-κB的过度激活会引起一系列的疾病，如哮喘、类风湿性关节炎、肠炎等，利用药物或通过转基因方法来抑制以NF-κB为核心的信号转导途径可能会成为防治某些疾病的途径。     

低聚原花青素通过抑制TLR 4/NF-κB通路对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护和炎症抑制作用

目的 探讨低聚原花青素(OPC)抑制TLR 4/NF-κB通路对糖尿病肾病(DKD)大鼠的肾保护和炎症因子抑制作用。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)、高脂高糖饮食制造DKD大鼠模型，后分别使用低、中、高剂量OPC(125、250和500 mg/kg)灌胃治疗DKD大鼠。8周后检测大鼠的血糖水平、肾脏指数、尿微量白蛋白定量、血尿素氮、血肌酐等肾损伤指标。采用ELISA试剂盒检测血清和肾皮质中IL-1β、IL-6和MCP-1等炎症因子的浓度。Western blot分析TLR 4/NF-κB相关蛋白的表达。结果 OPC低、中、高剂量组大鼠肾小球病理状态较模型组改善显著。与模型组相比，OPC中、高剂量组大鼠的空腹血糖、肾脏指数、尿微量白蛋白、血清肌酐和血尿素氮水平较模型组显著降低(P均<0.05),血清、肾脏中IL-1β、IL-6和MCP-1水平均较模型组显著降低(P均<0.05)。Western blot分析显示，与模型组相比，OPC中、高剂量组大鼠的TLR 4蛋白水平、p-IκBα/IκBα比值、p-p65/p65比值显著降低(P均<0.05)。结论 O...     

尼莫同对大鼠创伤性脑损伤后脑组织NF-κB表达和活化的影响

目的 观察尼莫同对大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后NF-κB表达和活化的影响. 方法制作SD大鼠落体撞击脑损伤模型,分别给予地塞米松和尼莫同干预,检测脑组织NF-κB P65和IκBα的表达. 结果 TBI后脑组织NF-κB P65的表达明显增加,伤后24 h最低,持续到96 h仍有明显表达;IκBα表达明显减弱,伤后24 h达到低峰.尼莫同与地塞米松可以显著降低TBI后NF-κB P65的表达和增加IκBα的表达(P<0.01),尼莫同作用优于地塞米松(P<0.05). 结论尼莫同可以抑制TBI后NF-κB表达和活化,从而调节脑损伤后的炎症反应.     

三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应

目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝(台盼蓝)拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基(p65、p50)的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。     

葛根素对糖尿病大鼠肾脏NF-κB65、TNF-α表达的影响

目的观察葛根素对糖尿病大鼠肾脏NF-κB65、TNF-α表达的影响。方法 SD大鼠随机分为正常对照组(A组),糖尿病组(B组),葛根素低、中、高剂量组(C、D、E组),每组10只。糖尿病大鼠模型建立后,C、D、E组分别给予葛根素注射液40、80、160mg/(kg·d)腹腔注射,A组和B组腹腔注射等量生理盐水。实验第8周末检测各组空腹血糖(FBG)、24h尿微量白蛋白排泄率(UAER)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);采用光镜和电镜观察肾皮质形态学改变;采用免疫组织化学法检测肾组织中NF-κB65、TNF-α蛋白的表达。结果 C、D、E组FBG、UAER、Scr、BUN均高于A组(P0.01或P0.05),但明显低于B组(P0.01或P0.05)。光镜及电镜下,C、D、E组肾脏病理改变较B组明显改善,且肾组织NF-κB65、TNF-α表达较B组减少。结论葛根素能减少尿白蛋白,改善糖代谢、肾功能和肾组织结构,对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与下调肾组织NF-κB65、TNF-α表达有关。     

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及LOX-1、NF-κBp65表达的影响

目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对载脂蛋白E(Apo E)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及主动脉凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法 20只6周龄雄性Apo E基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组(n=10)、瑞舒伐他汀药物干预组(n=10),高脂饮食喂养13周;10只6周龄C57BL/6J(野生型,W T)雄性小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周。13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。处死小鼠取主动脉,行HE染色;采用Western blotting和RT-PCR检测定量分析主动脉组织LOX-1、NF-κB p65表达变化。结果与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀药物干预组血清中TCH、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,瑞舒伐他汀药物干预组主动脉粥样硬化病变程度减轻。与正常对照组相比,高脂模型组主动脉LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均明显增加(P<0.05),瑞舒伐他汀药物干预组LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均减少(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可明显降低血脂,减轻Apo E基因缺陷小鼠主动脉组织粥样硬化病变程度,其抗动脉粥样硬化作用可能与下调LOX-1、NF-κB p65的表达有关。     

三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应

目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷（As2O3）诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝（台盼蓝）拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基（p65、p50）的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。     

上、下坡跑台运动对去卵巢小鼠破骨细胞分化NF-κB信号通路的影响

目的:通过去卵巢手术制备小鼠骨质疏松模型,对比研究上、下坡跑台运动对去卵巢小鼠破骨细胞分化的影响,以及NF-κB信号通路在介导运动对破骨细胞分化影响过程中的作用。方法:32只8周龄C57 BL/6雌性小鼠被随机分为4组:假手术安静组(S组)、去卵巢安静组(O组)、去卵巢上坡跑组(U组)和去卵巢下坡跑组(D组)。U组和D组小鼠于摘除卵巢一周后分别进行为期8周的上坡跑和下坡跑训练,每周训练5次,每次训练40 min,跑台坡度分别为±9°,跑速均为0.8 km/h。S组和O组在笼中正常饲养,不进行任何训练。8周后对股骨组织进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测,并对其骨髓进行破骨细胞原代培养,检测破骨细胞分化过程中NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:各组小鼠股骨TRAP阳性染色区域的平均光密度值和平均阳性染色面积百分比存在显著差异,表现为O组显著高于S组,两运动组显著低于O组,且D组显著低于U组。各组小鼠破骨细胞前体IκBα和p65蛋白相对表达量无显著性差异;而p-IκBα和p-p65蛋白相对表达量组间差异显著,表现为O组显著高于S组,两运动组显著低于O组,且D组显著低于U组。结论:小鼠去卵巢后骨组织破骨细胞特异性酶TRAP大量生成,显示去卵巢手术可引起小鼠骨组织破骨细胞的大量分化和活化,而跑台运动可通过抑制破骨细胞分化过程中p65和IκBα蛋白的磷酸化而有效抑制破骨细胞分化NF-κB信号通路,从而有效抑制骨吸收,且下坡跑效果优于上坡跑。     

高盐诱导下以 TonEBP/NF-κB 通路为基础的小鼠巨噬细胞表型偏移机制的研究

 目的 探讨高盐刺激下巨噬细胞表型偏移的可能机制,为相关心血管疾病的防治提供新的实验依据。方法 选取Raw264.7小鼠巨噬细胞为研究对象,构建TonEBP慢病毒干扰稳定细胞株,利用Real-time PCR技术检测TonEBP干扰效率,选取干扰效率最高的感染组细胞株用于后续实验。给予各组相应干预后同步培养24 h,利用Real-time PCR检测各组细胞TonEBP、NF-κB及其M1、M2型巨噬细胞表型标志物mRNA的表达水平;Western blot法检测各组TonEBP、NF-κB、pNF-κB、pIKKα/β的蛋白表达水平。结果 成功构建TonEBP -shRNA稳定干扰细胞株,与Control组相比其TonEBP干扰效率达70％;Real-time PCR结果显示单纯高盐干预下Raw264.7细胞TonEBP、NF-κB和M1型巨噬细胞表型标志物的mRNA表达水平显著上调(P＜0.05),M2型巨噬细胞表型标志物mRNA表达水平显著下调(P＜0.05);高盐刺激下分别干扰TonEBP、NF-κB的表达后,M1型巨噬细胞表型标志物的mRNA表达水平显著下调,M2型巨噬细胞表型标志物mRNA表达水平显著上调。Western blot结果显示单纯高盐刺激下Raw264.7细胞TonEBP、p-IKKα/β、NF-κB、p-NF-κB的蛋白表达水平均明显上调,NF-κB,p-NF-κB,p-NF-κB与NF-κB比值增加;高盐刺激下分别干扰TonEBP、NF-κB的表达后,p-IKKα/β、p-NF-κB蛋白表达水平均显著下调。结论 TonEBP/NF-κB信号通路的激活是高盐刺激下Raw264.7细胞向M1型巨噬细胞发生偏移的可能机制;调节TonEBP/NF-κB信号通路,可改变高盐诱导下Raw264.7细胞表型偏移方向。     

核因子-κB在正常妊娠和妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘中表达的意义

目的:探讨正常和妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘组织中核因子-κB(NF-κB)表达的意义。方法:采用组织微阵列技术和免疫组织化学染色方法检测正常胎盘(30例)和ICP胎盘(轻度28例,重度19例)组织中NF-κB p65蛋白的表达水平。结果:NF-κB p65在正常胎盘和ICP胎盘绒毛表面合体滋养细胞胞浆和胞核内呈阳性表达,绒毛间质的血管平滑肌和内皮细胞内表达较少;ICP重度组单位胎盘面积IOD最高(95.69±13.49),ICP轻度组次之(71.37±7.74),正常胎盘最低(57.54±4.13),三组间差异显著(P<0.01)。结论:ICP胎盘组织NF-κB表达明显增高,且与ICP的疾病程度有关,NF-κB激活与ICP发生发展过程有关。     

赤芍对大鼠内毒素急性肺损伤丝裂原活化蛋白激酶p38/NF-κB/iNOS的影响

目的 观察赤芍对大鼠内毒素性急性肺损伤(acute lung injury,ALI)丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)/NF-κB/诱导型-氧化氮合酶(iNOS)信号通路的影响,探讨其防治作用的分子机制. 方法采用大鼠内毒素ALI模型,40只Wistar大鼠完全随机分为假手术对照组(A组)、内毒素组(B组)、赤芍治疗组(C组)、赤芍预防组(D组)和SB203580组(E组),每组8只大鼠.观察赤芍对肺组织中p38MAPK、NF-κB和iNOS表达的影响,肺泡灌洗液中性粒细胞比和蛋白含量、肺组织丙二醛(MDA)含量及血清NO含量的变化,于LPS滴注后6 h行血气分析,并进行病理学观察. 结果与A组比较,B、C、D和E组p38MAPK、NF-κB和iNOS表达显著增强,肺泡灌洗液中性粒细胞比和蛋白含量、肺组织MDA含量和血清NO含量显著增加,PaO2和HCO3-明显降低(P<0.05或0.01);与B组比较,C、D组和E组p38MAPK、NF-κB和iNOS表达明显降低(P<0.05);肺泡灌洗液中性粒细胞比和蛋白含量、肺组织MDA显著减少,PaO2和HCO3-明显升高(P<0.05或<0.01).病理学显示C、D组和E组肺组织损伤程度较B组明显减轻;c、D、E组之间各项指标差异无统计学意义.结论 赤芍对内毒素性ALI的防治作用可能与抑制p38MAPK/NF-κB/iNOS信号通路密切相关.     

核因子-κB诱导激酶和IκB激酶在碱性成纤维细胞生长因子作用下基因表达及肌腱细胞增殖

目的　探讨核因子 -κB(NF -κB)、NF -κB诱导激酶 (NIK)和其抑制蛋白 (IκB)激酶(IKK)在碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)促肌腱细胞NF -κB基因表达信号传递中的作用。　方法　用兔的趾屈肌腱细胞 ,分成三组 ,分别在无bFGF、2ng mlbFGF和 10ng mlbFGF环境下培养5d ,绘制肌腱细胞生长曲线 ,5d时提取mRNA ,逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)检测NIK、IκB激酶α(IKKα)、IκB激酶 β(IKKβ)基因表达水平。　 结果　随使用bFGF剂量增加 ,肌腱细胞生长曲线前移。 2ng mlbFGF组的NF -κB、NIK、IKKα、IKKβ基因表达相对值分别为 0 .4± 0 .2 ,0 .4± 0 .1,0 .3± 0 .1,0 .2± 0 .1;10ng mlbFGF组各基因分别为 1.8± 0 .5 ,1.0± 0 .3,0 .8± 0 .2 ,1.5± 0 .4 ,bFGF加入后 4种基因表达均显著增加 (P <0 .0 1)。　结论　bFGF增强NF -κB通路上各信号传递因子的基因表达并促进肌腱细胞增殖 ,提示bFGF促进腱细胞增殖的信号传递系统可能为NF -κB系统。     

核因子-κB/p65 siRNA对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、细胞周期及迁移能力的影响

目的 研究下调核因子-κB(NF-κB)/p65的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖、周期及迁移能力的影响,并探讨其相关的分子机制.方法 应用脂质体2000将NF-κB/p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测p65 mRNA及其蛋白的表达,采用CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测NF-κB/p65 siRNA对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响,Boyden小室法分析其对Tca8113细胞迁移能力的影响.进一步用Real-time PCR和Western blotting技术检测细胞周期相关基因cyclin E和cdk2以及浸润转移相关因子MMP-9 mRNA和蛋白表达的变化.结果 NF-κB/p65 siRNA能有效下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中NF-κB/p65 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),明显抑制Tca8113的细胞增殖(P<0.05),诱导细胞静止在G0/G1期,并降低Tca8113细胞的迁移能力.NF-κB/p65转染Tca8113后的48h,cyclin E、cdk2及MMP-9的表达均显著降低(P<0.05).结论 NF-κB/p65在舌鳞状细胞癌细胞周期及浸润转移中起重要作用,这可能与相关基因表达的改变有关.     

高压氧干预对大鼠创伤性脑损伤后脑组织NF-κB（p50）表达的影响

目的 观察高压氧干预（hyperbaric oxygenation treatment,HBOT）对大鼠创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）后NF-κB（p50）表达的影响,并探讨其机制。方法 将35只SD大鼠完全随机分为假手术对照组（Con组）5只、创伤组（TBI）15只、高压氧干预组（HBOT）15只。采用Allen’s改良法制造大鼠自由落体重型脑损伤模型,Con组仅切开头皮去骨窗,TBI组给予撞击损伤,HBOT组于创伤后给予高压氧治疗。利用Western-blot法分别于伤后8 h及1、3、5、8 d检测脑组织NF-κB的表达。结果 与Con组比,TBI组各时点脑组织NF-κB表达均升高（P〈0.05）,损伤后3 d达高峰（0.7267±0.0305）,5~8 d仍维持较高水平（0.5567±0.0603）。HBOT组各时点NF-κB表达水平均较TBI组下降（P〈0.05）。结论 高压氧干预可以减弱创伤后脑组织NF-κB（p50）表达,有效抑制炎性反应,为重型颅脑损伤治疗提供理论基础。