HSV-TK/CD基因联合IL-12基因体内治疗肝癌

目的观察HSV-TK/CD基因联合IL-12基因体内治疗肝癌的疗效.方法SCID小鼠双侧腋部皮下植入5×105(0.2ml)HepG2细胞,同时腹腔注射PBL 2×107(0.5 ml).荷瘤小鼠分为4组,左侧腋部瘤内分别注射5×105(0.1 ml)丝裂霉素处理过的HepG2-IL-12细胞、5×105(0.1 ml)HepG2-pALBeAFP-CD/TK细胞或两者(各0.05 ml),次日起腹腔注射PBS或GCV 100 mg/kg 5-FC 500 mg/kg,连续10天.Ⅰ组:HepG2-IL-12 GCV,5-FC;Ⅱ组:HepG2-pALBeAFP-CD/TK PBS;Ⅲ组:HepG2-pALBeAFP-CD/TK GCV,5-FC;Ⅳ组:HepG2-pALBeAFP-CD/TK HepG2-IL-12 GCV,5-FC.治疗结束5天后作常规肿瘤组织病理学检查.结果与Ⅱ组比较,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组治疗侧均有明显的生长抑制,第30天较Ⅱ组分别减小20.5%、54.9%和87.6%,且Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组之间差异明显.Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组右侧肿瘤较Ⅱ组同侧显著缩小,分别达23.2%、24.9%和45.0%.结论pALBeAFP-CD/TK双自杀基因体内治疗肝癌有效.在免疫活性鼠,局部转染IL-12基因可增强双自杀基因的疗效和远处旁观者效应.     

Ad-KDR-CDglyTK双自杀基因系统对荷瘤鼠胃癌体内抑制实验

目的:探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对荷瘤鼠胃癌的体内抑瘤作用.方法:建立胃癌移植瘤动物模型,当肿瘤直径达0.5 cm时,随机分为A组:空白对照,不施加任何处理;B组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC和GCV;C组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK;D组:仅注射前药5-FC和GCV.治疗过程中绘制肿瘤生长曲线,观察该治疗体系的体内抑瘤效应;通过RT-PCR检测肿瘤组织内融合基因的表达;采用免疫组化行微血管密度检查.结果:接种肿瘤细胞后13d,裸鼠出现右臀区皮下瘤结节.治疗结束后A、B、C、D组间瘤质量差异有统计学意义(F=12 727.42,P=0.000),B组明显缩小.重组腺病毒转基因荷瘤鼠胃癌组织内可检测到CDglyTK融合基因产物的表达.肿瘤组织的MVD值在A、B、C、D组之间差异有统计学意义,F=27.04,P=0.000.结论:KDR启动子驱动双自杀基因体系对裸鼠皮下移植瘤有明显的抑瘤作用,表现为肿瘤的生长抑制和瘤体微血管密度减少等.     

逆转录病毒介导的胸苷激酶基因治疗难治性卵巢癌裸鼠模型的观察

目的:运用HSV-TK/GCV系统治疗卵巢癌裸鼠移植肿瘤模型,比较不同治疗方式的疗效.方法:常规培养包装细胞PA317,PA317细胞含有携带HSV-TK基因的逆转录病毒,测定病毒滴度.在移植瘤内多点注射PA317细胞以及浓缩病毒,现察GCV治疗后的肿瘤体积变化,对移植肿瘤进行组织病理分析,PCR检测TK基因在移植肿瘤组织的转导情况.比较两种不同治疗方式的疗效.结果:常规细胞培养上清重组逆转录病毒滴度为6×104 cfu/mL;注射PA317细胞后肿瘤生长受到抑制,P<0.05;注射浓缩病毒后肿瘤生长抑制不明显,P>0.05;PCR检测证实TK基因在肿瘤组织中的转导;病理检测见中、重度治疗反应.结论:HSV-TK/GCV系统对人难治性卵巢癌裸鼠移植肿瘤有治疗作用,不同治疗方式疗效不同.     

双自杀基因CD和TK对K562细胞体内外杀伤作用的实验研究

目的:探讨双自杀基因CD和TK对K562细胞的体内外抑制作用及前体药物对肿瘤的杀伤作用。方法:将目的基因转染入K562细胞,MTT法观察细胞在体内外的增殖状况及5-FC/GCV对转染细胞的杀伤作用,电子显微镜观察其超微结构变化。将K562/CDgly TK和K562细胞接种于裸鼠皮下,观察各种肿瘤细胞在体内的成瘤情况及对前体药物治疗的敏感性。结果:单独使用GCV或5-FC对K562及K562/CDgly TK细胞产生明显的杀伤作用,联合应用该2种药物对肿瘤细胞的杀伤作用更强。将K562细胞和K562/CDgly TK细胞接种于小鼠皮下后小鼠成瘤率为100%,GCV或5-FC可明显抑制裸鼠体内的肿瘤形成,联合应用GCV和5-FC治疗K562/CDglyTK细胞在小鼠体内形成的肿瘤,较单独应用GCV和5-FC及对照组小鼠形成的肿瘤体积明显缩小,生存期也明显延长。结论:双自杀基因在体内外对K562细胞均有明显的抑制作用,可增加前体药物GCV和5-FC对瘤细胞的杀伤率。     

组织特异性CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移的疗效

目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(cytisine deaminase/5-fluorocytosine,CD/5-FC)系统热化疗对结肠癌肝转移裸鼠模型的治疗作用.方法:将含CEA启动子调控CD基因表达的逆转录病毒载体进行扩增、纯化、包装,并收集病毒上清.45只裸鼠经门静脉注射人结肠癌LoVo细胞,成瘤后2 d腹腔注射病毒上清(0.2 ml/次,每天1次,共5 d).随机分为对照组、常温化疗组和热化疗组,分别经腹腔注射生理盐水、室温前药5-FC和43℃前药5-FC[均为500 mg/(kg·d)]进行治疗.治疗21 d后处死裸鼠,观察肝脏转移率和转移结节数,RT-PCR检测CD基因在肿瘤组织的表达,光镜及电镜下观察肿瘤病理学的变化.结果:病毒滴度为5.6×106CFU/L.CD基因在移植瘤组织中有效表达.热化疗组的肝转移率与转移结节数均低于常温化疗组[13.3%vs 40.0%,(0.20±0.56)个vs(0.80±1.01)个;均P＜0.05].光镜下见对照组肝转移瘤组织细胞生长活跃,热化疗组较化疗组肝转移瘤细胞生长受抑制更明显.电镜下见化疗组、热化疗组肝转移瘤细胞有不同程度的凋亡改变.结论:组织特异性CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移瘤有明显的抑制作用.     

重组腺病毒胸苷激酶基因构建体联合更昔洛韦治疗移植瘤裸鼠小细胞肺癌的实验研究

目的　观察以腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因重组构建体 (ADV TK)联合更昔洛韦 (GCV)体内抗肺癌的活性。方法　建立移植瘤裸鼠小细胞肺癌模型 ,肺癌局部注射ADV TK后 ,腹腔注射GCV ,观察肿瘤体积、相对肿瘤体积、瘤重、相对肿瘤增殖率以及肿瘤体积生长变化的时间曲线 ,评价ADV TK的抗肿瘤活性。结果　在作用底物GCV存在条件下 ,ADV TK对人癌裸鼠移植性小细胞肺癌生长具有明显抑制作用 ,对裸鼠移植性小细胞肺癌的体积和瘤重的抑制效应与ADV TK呈剂量依赖性增强 ,且未达量效平台期 ,其中 6 .0× 10 9病毒颗粒 /kg剂量组的肿瘤生长抑制率分别达到 6 4 .6 %和 81.7%。将ADV TK和GCV分别单独应用 ,结果显示对肿瘤生长均有一定的抑制作用 ,但与阴性对照组相比 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　ADV TK联合GCV对肺癌具有明确的实验性治疗作用 ,值得进一步研究 ,开展临床试验。     

HSV-TK/GCV系统治疗难治性卵巢癌动物试验

目的:运用单纯疱疹病毒腺苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)自杀基因系统治疗模型动物并观察其疗效。方法:常规培养携带HSV-TK基因的包装细胞PA317,测定病毒滴度。在移植瘤内多点注射PA317细胞,观察更昔洛韦(GCV)治疗后的肿瘤体积变化,对移植肿瘤进行组织病理分析,PCR检测TK基因在移植肿瘤组织的转导情况。结果:重组逆转录病毒滴度为6×104cfu/ml,当肿瘤体积较小,应用HSV-TK/GCV系统治疗后肿瘤生长受到抑制(P<0.05);当肿瘤体积较大时,则抑制作用不明显;经PCR检测证实,TK基因能在肿瘤组织中转导。结论:HSV-TK/GCV系统对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠具有一定的治疗作用,但当肿瘤体积较大时,疗效不佳。     

纽卡斯尔病毒疫苗和白细胞介素-12对荷人卵巢癌裸鼠模型作用的实验研究

目的:探讨纽卡斯尔病毒疫苗(ATV-NDV)和白细胞介素-12(IL-12]对3AO裸鼠皮下移植瘤的影响及其作用机制.方法:建立3AO裸鼠移植瘤模型,随机分为4组,每组10只.Ⅰ组注射ATV-NDV(0.2 mL);Ⅱ组注射IL-12(100 ng/kg);Ⅲ组注射IL-12(100 ng/kg)加ATV-NDV(0.2 mL);Ⅳ组为对照组,腹腔注射生理盐水0.2 mL;观察各组裸鼠成瘤率、生存期和生存延长率及肿瘤生长曲线.流式细胞术(FCM)观察裸鼠移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,双标记计数NK细胞比例;称取裸鼠脾脏质量;移植瘤瘤体及各组裸鼠肝、脾、肾行组织病理学变化检查.结果:治疗组在荷瘤裸鼠生长延长率,裸鼠移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数,裸鼠脾脏重量方面明显高于对照组,Ⅲ组高于Ⅰ组和Ⅱ组.组织病理学检查各治疗组中均可见有肿瘤坏死,肿瘤内及周围有明显的淋巴细胞浸润.结论:ATV-NDV和IL-12对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用.IL-12可增强ATV-NDV对卵巢癌的抑制作用.     

腺病毒介导IGF-ⅡP3 启动子调控胸苷激酶对裸鼠肝癌生长的抑制作用*

目的:观察腺病毒介导IGF - ⅡP3 启动子调控胸苷激酶对裸鼠肝癌移植瘤杀伤效应及毒性反应。方法:皮下接种HepG2 建立裸鼠肝癌移植瘤模型,瘤内注射重组腺病毒,第2 天腹腔注射GCV ,每4 天测量肿瘤体积大小,描绘肿瘤生长曲线,实验结束后处死裸鼠剥离肿瘤测量体积大小,RT-PCR 方法检测肿瘤及心、肝、肾脏组织中胸苷激酶表达,常规病理学检查观察心、肝和肾脏毒性反应。结果:Ad-tkEGFP-P 3 +GCV 治疗组裸鼠,其肿瘤生长显示被明显抑制,至第22天始,其体积明显小于其他各组（P<0.05）;实验结束后剥离出的肿瘤,Ad-tkEGFP-P 3 +GCV 组肿瘤体积明显小于其他组;只在肿瘤组织中可见有胸苷激酶特异性表达,心、肝和肾脏中未见表达;常规HE染色病理检查,显示三种重要器官结构正常,未见有炎症、变性、坏死和细胞凋亡等现象。结论:腺病毒介导IGF-ⅡP3 启动子调控胸苷激酶可以抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长,并对裸鼠无明显毒性反应,具有肝癌靶向基因治疗的可行性。      

HSV1-TK/GCV自杀基因系统治疗卵巢癌的体内杀伤作用

目的:探讨Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirustypeⅠthymidinekinase,HSV1TK)/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)自杀基因系统对卵巢癌的体内治疗效果。方法:用携带TK基因的重组逆转录病毒转染人卵巢癌细胞系SKOV3,用G418筛选抗性克隆(命名为SKOV3/TK)。PCR方法检测TK基因整合情况。将SKOV3和SKOV3/TK细胞按不同比例混合培养,给与10mg/LGCV治疗,观察体外旁观者效应。再分别用含有不同SKOV3/TK浓度的细胞建立荷瘤鼠模型作为3个TK基因转染组,并以接种单纯SKOV3细胞的动物模型作为对照组。TK基因转染组均行GCV20mg/(kg·d)腹腔注射共9d,对照组给等体积生理盐水腹腔注射。绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,并取瘤细胞做病理学检查。结果:体外混合培养细胞显示明显BSE,当SKOV3/TK细胞数占混合细胞数20%时,10mg/LGCV就可将约50%的混合细胞杀死。体内实验显示,20%、40%和100%TK基因转染组肿瘤体积与对照组比较,抑瘤率分别为38%、61%和99%,各组间两两比较差异有统计学意义,P<0.01(除20%TK基因转染组和40%TK基因转染组P值为0.001外,其余各组间P值均<0.001)。病理结果显示,TK基因转染组出现不同程度点、片状坏死,以100%TK基因转染组最重,残存的肿瘤均为坏死组织。结论:HSV1TK/GCV自杀基因系统对荷人卵巢癌皮下瘤裸鼠模型的肿瘤具有杀伤作用,同时存在BSE。这种杀瘤作用随着TK基因转染率的提高而增强。