条件培养基诱导人牙髓干细胞分化为角膜上皮样细胞

目的 探讨条件培养基（CM）诱导人牙髓干细胞（DPSCs）分化为角膜上皮样细胞的可行性。 方法 体外分离培养DPSCs，通过流式细胞术鉴定DPSCs，细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测基础培养基（BM）和不同比例CM培养的DPSCs增殖活性，选用30%、60%、90% CM诱导DPSCs，BM培养的DPSCs设为阴性对照组，免疫荧光检测角膜上皮细胞标志物细胞角蛋白3（CK3）、细胞角蛋白12（CK12）的表达。 结果 DPSCs增殖活性的差异无统计学意义（P> 0.05）；诱导3 d时，30%、60%、90% CM组细胞不表达CK3，60%和90%CM组细胞开始表达CK12；7 d时，30%、60%、90%CM组细胞可见CK3、CK12的表达；11 d和14 d时，30%、60%、90%CM组细胞继续表达CK3、CK12。BM组细胞未见CK3、CK12表达。 结论 在一定诱导条件下，DPSCs可分化为角膜上皮样细胞。     

成骨细胞与镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层的体外相容性

目的 评价成骨细胞在镁合金表面硅酸盐磷酸盐复合涂层上的生长状况,探讨镁合金表面硅酸盐磷酸盐复合涂层与成骨细胞的生物相容性。 方法 用胶原酶消化法分离培养大鼠成骨细胞,并用免疫荧光和茜素红染色法进行鉴定;然后将第4代大鼠的成骨细胞接种于材料表面,用扫描电镜观察成骨细胞在不同表面上黏附形态的变化,同时制备材料浸提液,用浸提液法培养细胞,并通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法和碱性磷酸酶（ALP）活性法检测成骨细胞的增殖和分化情况。 结果 将成骨细胞与材料进行复合培养后,扫描电镜下可见,涂层组的成骨细胞生长活力旺盛、形态饱满、分布均匀,而单纯镁合金组未见细胞生长;MTT和ALP活性分析结果显示,硅含量为1%~5%涂层对大鼠成骨细胞的体外生长、增殖和分化的促进作用最佳。 结论 镁合金表面硅酸盐磷酸盐涂层与成骨细胞具有良好的相容性,在体外培养的环境下,有利于细胞的生长、黏附、增殖和分化。     

脱细胞胶原基质双层材料与骨髓间充质干细胞的生物相容性研究

目的 对脱细胞胶原基质双层材料和骨髓间充质干细胞（BMSCs）间的生物相容性进行研究.方法 将BMSCs与脱细胞胶原基质双层材料共培养作为实验组,单独培养的BMSCs为对照组,对BMSCs的生长和增殖情况进行研究,扫描电镜下观察细胞在材料上的贴附生长情况,并采用CCK-8法测定细胞活性.结果 扫描电镜结果显示BMSCs在脱细胞胶原基质双层材料上生长良好.CCK-8法测得的BMSCs与脱细胞胶原基质双层材料共培养的生长曲线显示,实验组与对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 脱细胞胶原基质双层材料具有较好的生物相容性,这为脱细胞胶原基质组织工程支架双层材料下阶段在体内动物中的应用提供了科学依据.     

硼硅酸盐对成骨细胞体外生物活性的影响

背景：硼硅酸盐不仅可通过矿化作用形成羟基碳酸盐磷灰石层,而且具有强化学反应活性,可促进骨细胞再生。 目的：通过体外培养实验观察硼硅酸盐生物玻璃对兔成骨细胞生长行为的影响。 方法：根据 ISO10993-12：2007 的要求制备硼硅酸盐生物玻璃初次浸提液与二次浸提液。分离培养兔骨髓间充质干细胞,取第2代细胞诱导生成成骨细胞。取第5-15代成骨细胞,分别以硼硅酸盐生物玻璃初次浸提液、硼硅酸盐生物玻璃二次浸提液与α-MEM培养基培养,观察硼硅酸盐生物活性玻璃对成骨细胞增殖、蛋白合成、碱性磷酸酶活性、细胞凋亡及细胞横向与纵向迁移的影响。 结果与结论：初次浸提液组与二次浸提液组成骨细胞增殖优于α-MEM培养基组(P < 0.05),且初次浸提液组成骨细胞增殖优于二次浸提液组(P < 0.05)。初次浸提液组成骨细胞总蛋白含量高于二次浸提液组与α-MEM培养基组(P < 0.05)。3组间成骨细胞碱性磷酸酶活性、凋亡率、横向迁移距离及Transwell 中穿膜细胞数比较差异均无显著性意义。表明硼硅酸盐生物玻璃具有良好的细胞相容性,对成骨细胞增殖有一定的良性调节作用。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

丝蛋白应用于牙周组织工程的可行性

背景：丝蛋白是有利于表皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞、血管内皮细胞、胶质细胞黏附和生长的一种新型生物材料。 目的：评估丝蛋白作为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。 方法：采用组织块法培养人牙周膜细胞,将第5代细胞悬液以2×10⁷ L^-1的浓度接种到丝蛋白支架材料上复合培养,并以1%,10%,50%,100%的丝蛋白支架浸提液培养,观察人牙周膜细胞在丝蛋白上及在丝蛋白浸提液中生长状况,用MTT法测定浸提液培养人牙周膜细胞的活力。 结果与结论：扫描电镜可见人牙周膜细胞在丝蛋白支架上伸展充分,生长旺盛,不同浓度丝蛋白支架浸提液培养对人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶活性均无影响。说明丝蛋白材料具有良好的生物相容性、独特的力学性能,可作为人牙周膜细胞黏附生长的理想支架材料较好地应用于牙周组织工程中。     

可注射藻酸盐支架与人骨髓基质干细胞的体外复合培养*☆

背景：目前可注射组织工程骨的研究主要限于动物实验,若人骨髓基质干细胞与藻酸盐生物相容性良好,可注射组织工程骨将是极具前途的临床治疗手段。 目的：体外观察人骨髓基质干细胞与可注射支架藻酸钙凝胶的生物相容性。 方法：实验组将第2代人骨髓基质干细胞与藻酸钙凝胶复合培养,对照组单纯接种骨髓基质干细胞。倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞形态及增殖情况,MTT法半定量检测细胞增殖情况。 结果与结论：倒置显微镜下见实验组细胞生长良好,与对照组无明显差异。扫描电镜见骨髓基质干细胞在藻酸钙表面贴附、增殖良好,第6天时细胞已跨越微孔表面或向孔内生长。MTT法显示与对照组相比,实验组细胞增殖能力不受影响。结果初步表明藻酸钙与人骨髓基质干细胞体外生物相容性较好。      

脂肪源干细胞与聚丙烯网片的生物相容性研究

目的观察脂肪源干细胞(ADSCs)与聚丙烯网片的生物相容性。方法制备兔ADSCs悬液。取聚丙烯网片浸提液培养ADSCs。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,评价支架细胞毒性。ADSCs传代扩增后,接种到聚丙烯网片支架上,体外培养1周。用扫描电子显微镜观察细胞在支架上黏附生长及增殖。结果 ADSCs在聚丙烯网片浸提液中可保持较高的增殖率(RGR)(24、48、72 h实验组细胞RGR分别为97%、96%、101%,平均RGR为103.5%),与对照组比较,差异无统计学意义(χ2=17.45,P0.05),聚丙烯网片浸提液无细胞毒性。脂肪干细胞种植于两种支架材料后生长速度快,扫描电子显微镜观察可见脂肪干细胞呈球型,并伸展形成伪足,贴附于支架材料,细胞间相互连接成团。结论聚丙烯网片支架与ADSCs具有良好的生物相容性,无细胞毒性,可作为脂肪组织工程较理想的生物支架材料。     

不同配比壳聚糖/聚磷酸钙复合支架应用于半月板的生物相容性研究

目的评价对比不同配比壳聚糖/聚磷酸钙复合支架的体外生物相容性,观察半月板纤维软骨细胞在不同配比支架材料上的生长情况,选出最佳配比CS/CPP生物材料用于半月板的治疗。方法利用ADA将CS与CPP混合液交联,制备不同配比的CS/CPP复合支架材料。采用扫描电镜检测半月板细胞在支架材料上的生长情况。采用MTT法检测不同配比CS/CPP支架材料浸提液的毒性,通过细胞接种的方法评价支架材料的生物相容性。结果扫描电镜下,CS/CPP复合支架材料均呈三维多孔结构;细胞在支架材料上粘性良好,分布均匀,生长良好,其中配比为3∶7CS/CPP复合支架材料上细胞粘性最好,黏附细胞数量最多。不同配比CS/CPP复合支架材料不同浓度浸提液的毒性均不高于1级,全部合格,配比为3∶7CS/CPP复合支架材料浸提液细胞相对增殖高、毒性小,细胞相容性最好,与其它配比相比,差异有统计学意义(0.05)。结论不同配比壳聚糖/聚磷酸钙均具有良好的细胞相容性,其中配比为3∶7CS/CPP复合支架材料生物相容性最好,有望成为组织工程半月板的支架载体。     

猪小肠黏膜下层脱细胞支架的制备及组织学评价

目的评价不同浓度的十二烷基磺酸钠(SDS)处理猪小肠黏膜下层(SIS)的脱细胞效果,筛选最佳脱细胞浓度,为组织工程化角膜上皮的制备提供支架材料。方法配制0.1%、0.2%、0.3%、0.5%SDS随机分成A、B、C、D 4组,分别脱细胞处理SIS 15min、30min、1h、2h(n=20),同时观察SIS的大体形态变化,HE和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察脱细胞前后SIS的生物学特性,并对脱细胞支架进行基因组DNA分析(n=5)。结果脱细胞SIS肉眼观察呈乳白色、半透明的膜状物,具有一定的弹性、韧性及透光性;HE和DAPI染色光学显微镜观察结果显示,A组及B组处理30min时SIS生物支架无细胞及DNA残留,组织结构保留完整,胶原纤维间孔隙率增加;A组及B组处理30min脱细胞率可达90%以上。结论 0.1%及0.2%SDS处理30min条件下脱细胞效果较好,能更好地降低SIS的免疫原性,是SDS脱细胞处理SIS比较理想的浓度时间条件,为组织工程化角膜上皮的构建奠定理论基础。     

大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合支架降解产物的生物相容性

背景：人们对壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架在体内的降解过程并非十分清楚,而且有关其降解产物对成骨细胞的影响研究也较少。 目的：分析大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物的生物相容性。 方法：将培养的第2代大鼠成骨细胞分别在壳聚糖/羟基磷灰石复合支架降解产物浸提液和含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中培养,培养第2,4,6,8,10天分别对两组细胞做MTT细胞计数,采用联合会推荐法测定细胞碱性磷酸酶活性,采用BCA蛋白定量法测定总蛋白。 结果与结论：在壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物浸提液中培养的大鼠成骨细胞增殖速度、细胞碱性磷酸酶活性、细胞总蛋白合成及碱性磷酸酶与总蛋白的比值明显高于在体积分数为10%胎牛血清DMEM培养液中培养的细胞(P < 0.05)。表明壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架的降解产物不仅可促进大鼠成骨细胞的黏附、生长和增殖,还可增强其骨化功能,具有较好的生物相容性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

脱细胞猪角膜基质支架的制备及其生物相容性

BACKGROUND: Studies have found that a variety of biological materials can be used for preparing corneal stroma scaffolds that have good biocompatibility, but research on preparation and biocompatibility of the acellular porcine corneal stroma scaffold is little. OBJECTIVE: To explore the preparation and biocompatibility of the acellular porcine corneal stroma scaffold. METHODS: Acellular porcine corneal stroma scaffold and its extract were prepared. Well-grown human corneal stromal cells were selected and cultured in the extract of acellular porcine corneal stroma scaffold (experimental group) or in the complete medium (control group), respectively. After 1, 2 and 3 days of culture, the proliferation ability of human corneal stromal cells was detected by MTT assay. In the meanwhile, human corneal cells were directly seeded onto the acellular porcine corneal stroma scaffold, and then the cell growth on the scaffold was detected using immunochemical method. RESULTS AND CONCLUSION: The number of human corneal stromal cells was in a rise with time in the two groups, and absorbance values had no significant difference between two groups at different time points of culture. Human corneal stromal cells grew well on the scaffold, and were positive for cell integrin β1, vimentin, aldehyde dehydrogenase 3A1, as well as CD34, CDK2 and K-Ras. These results show that the acellular porcine corneal stroma scaffold has no cytotoxicity, and has good biocompatibility.     

骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质支架的生物相容性

背景：国内外许多研究者一直寻找理想的种子细胞与合适的支架材料复合,试图模拟接近正常生理功能的组织工程化尿路替代物。 目的：探讨骨髓间充质干细胞与兔膀胱脱细胞基质支架的生物相容性。 方法：采用密度梯度离心法分离培养兔骨髓间充质干细胞,将第3代兔骨髓间充质干细胞接种到兔膀胱脱细胞基质上进行复合培养,每天进行细胞计数,连续12 d,绘制细胞生长曲线,以单独培养骨髓间充质干细胞为对照组。 结果与结论：骨髓间充质干细胞成功种植到膀胱脱细胞基质上,倒置显微镜下可见骨髓间充质干细胞从膀胱脱细胞基质边缘爬出,膀胱脱细胞基质周围有大量长梭形骨髓间充质干细胞生长。接种5 d内,两组细胞均呈现出平缓生长的状态,接种6-9 d,生长曲线逐渐变得陡峭,细胞呈倍数状态进行分裂生长,速度较快,接种10-12 d,再次趋于平缓状态。两组细胞生长曲线基本重合,可推断兔骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质生物相容性良好。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

天然及合成尿道重建支架材料的生物相容性及力学性能

背景：目前应用何种尿道组织工程修复重建支架材料更为合适的争论仍不断出现,其生物相容性及力学特性的评估也鲜见报道。 目的：评估应用于尿道修复重建多种生物材料的力学特性及生物相容性。 方法：脱细胞法制备小肠黏膜下层组织、膀胱脱细胞基质以及脱细胞尿道海绵体基质,同时编织法制备聚乙醇酸支架。单轴拉伸测试测定各类支架生物力学特性,光镜及扫描电镜测定支架表面孔径大小。线粒体代谢活性MTT法检测各种生物材料的细胞毒性。所有支架表面接种海绵体平滑肌细胞,体外培养14 d后进一步评估细胞渗透情况。 结果与结论：生物力学评估显示脱细胞尿道海绵体基质在弹性模量以及断裂强度方面的检测结果明显优于其余材料(P < 0.05)。MTT结果显示所有支架材料均支持正常的细胞生长代谢,并未发现存在明显的细胞毒性。聚乙醇酸在扫描电镜中显示出最大的孔径(> 200 μm),同时脱细胞尿道海绵体基质的尿道面(< 5 μm)和海绵体面(>10 μm)观察到明显不同的孔径大小。细胞接种14 d后聚乙醇酸材料的内部可见种子细胞的广泛分布,在膀胱脱细胞基质以及脱细胞尿道海绵体基质的尿道面未发现有明显的细胞渗透迹象,而小肠黏膜下层组织和脱细胞尿道海绵体基质的海绵体面观察到明显的细胞渗透生长表现。提示所有支架材料显示出良好的生物相容性,同时在力学特性方面也与正常尿道组织相仿,但脱细胞尿道海绵体基质在力学和组织学的诸多参数上具有一定的优越性。     

Dermal fibroblasts cultured on small intestinal submucosa: Conditions for the formation of a neotissue

Small intestinal submucosa (SIS) is a naturally occurring, acellular biomaterial that has been used extensively as a soft tissue replacement, as a scaffold for tissue engineering, and as a substrate for the study of cells in 3D culture. The aim of this study is to define culture parameters that promote neotissue formation with the use of dermal fibroblasts and SIS. SIS sheets were seeded with dermal fibroblasts and cultured for 4 weeks. The resultant cell-scaffold composites (CSCs) were cultured with media alone, media supplemented with ascorbic acid, or fibronectin-pretreated SIS and ascorbic acid. CSCs were analyzed for cellular invasion into the scaffold, the rate of type I collagen production, MMP gelatinolytic activity, thickness, and ultrastructural morphology. CSCs treated with fibronectin and ascorbate showed an increase in Type I collagen production, no change in the MMP gelatinolytic activity, an increase in CSC thickness, and an organized neotissue on the surface of the SIS. Minimal cellular invasion was noted, suggesting that fibroblasts use the SIS as a template for neotissue growth rather than as a scaffold. These results indicate that fibronectin-treated SIS cultured with dermal fibroblasts in the presence of ascorbic acid will promote true neotissue formation for future cardiovascular tissue engineering efforts.     

干燥脱水保存鸵鸟脱细胞角膜基质载体材料的细胞毒性

背景：陕西省眼科研究所通过前期研究发现鸵鸟角膜具有开发成为人角膜材料替代品的优势。 目的：判断鸵鸟角膜基质支架材料对细胞的潜在毒性作用。 方法：采用细胞培养方法,将干燥脱水法保存的鸵鸟脱细胞角膜基质载体支架制备成浸提液与L-929细胞共同培养,采用MTT比色法评价其作用1,2,3 d,对细胞生长和增殖的影响。 结果与结论：干燥脱水法保存的鸵鸟脱细胞角膜基质载体支架浸提液组培养1,3,5 d,对实验细胞毒性反应级别均为1级。参照《中华人民共和国国家标准GB/T16886.5-2003》进行细胞毒性试验,供试品组见少量细胞呈圆形,疏松贴壁,无胞浆内颗粒,偶见细胞溶解。结合MTT法分析结果表明,采用干燥脱水法保存鸵鸟脱细胞角膜基质载体材料,细胞毒性为1级,为合格材料。     

人羊膜上皮细胞体外培养重建角膜上皮的实验研究

目的: 探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells, HAECs)诱导分化为角膜上皮细胞的可塑性及其重建角膜上皮的可行性。方法: 取足月产人羊膜,通过胶原酶、胰蛋白酶和EDTA消化获得HAECs,将细胞在体外培养扩增、传代,将2~3代HAECs接种于去上皮的兔角膜基质上培养,待HAECs融合形成单层后,置于插入式培养皿中进行气液界面培养14 d。对角膜基质上培养的HAECs用光镜、扫描电镜和透射电镜进行形态学及超微结构观察,以及细胞角蛋白(CK)3/12的免疫组织化学检测。结果: HAECs可在角膜基质上生长,培养1~2 d可形成单层,气液界面培养14 d可形成4~5层细胞的复层上皮,扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛,透射电镜下可见上皮细胞之间有桥粒连接,免疫组化检测复层细胞表达CK3/12,所形成的复层结构与正常角膜上皮相似。结论: HAECs有可能作为种子细胞用于组织工程角膜上皮重建。     

重组骨脱细胞细外基复合Wistar大鼠成骨细胞体外培养的形态学观察

目的新型重组骨脱细胞细胞外基质(REAECM)的制备及其细胞相容性的初步检测,为骨组织工程寻找一种新型的细胞外支架提供实验依据。方法应用体外细胞培养技术,对鼠成骨细胞和REAECM体外进行联合培养1-4周,通过相差显微镜、光镜、电镜观察细胞在材料中的生长情况。结果成骨细胞可以在REAECM上发生良好的黏附、增殖,并且可以长入REAECM的孔隙内。结论REAECM可作为构建组织工程骨的一种较好的支架材料,具有网状孔隙结构;在体外和成骨细胞复合培养时表现出良好的细胞相容性,可以作为一种天然的骨组织替代材料。