β-榄香烯与阿霉素及顺铂对人胃腺癌细胞株细胞毒作用的协同效应

 本文以体外培养的低分化人胃腺癌细胞株SGC－7901为实验模型，采用MTT比色法，观察了β-榄香烯单独及与阿霉素、顺铂联合应用时的细胞毒作用。结果表明，β-榄香烯单独应用对SGC－7901细胞具有一定的抑制作用，其细胞毒指数与药物浓度呈正相关；β-榄香烯与阿霉素或顺铂联合应用则呈现明显的协同效应。上述结果对于临床联合应用β-榄香烯与其它化疗药物治疗胃腺癌具有一定指导意义。     

β-榄香烯联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响。方法:体外培养乳腺癌MCF-7细胞,将β-榄香烯(浓度梯度为25、50、100、150、200μg/ml),单独作用于乳腺癌MCF-7细胞,加药24h、48h后用噻唑蓝(MTT法)法检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测用药24h后对MCF-7细胞凋亡和细胞增殖周期的影响,选取合适的药物浓度(β-榄香烯125μg/ml),与顺铂(3μg/ml)进行联合用药。加药24h、48h用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h后药物组对MCF-7细胞凋亡和细胞增殖周期的影响。结果:MTT法结果显示β-榄香烯单独用药24h、48h后,与对照组相比,实验组乳腺癌MCF-7细胞的抑制率高于对照组(P<0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药(P<0.01)。与对照组相比,榄香烯能够使MCF-7细胞产生明显的G0/G1期阻滞(P<0.01)。结论:β-榄香烯单独或与顺铂联合作用均能抑制MCF-7细胞的增殖,促进其凋亡,且β-榄香烯联合顺铂的作用要显著高于单独用药组,β-榄香烯和顺铂可协同(CDI<1)促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能与G0/G1期阻滞有关。     

Manumycin与DDP、PYM、5-FU、ADR联合的体外抗舌癌作用

目的：探讨Manumycin（手霉素）与常用舌癌化疗药物顺铂、5-氟脲嘧啶、平阳霉素、阿霉素联合作用于舌鳞癌Tca8113的细胞毒作用。方法：细胞毒测定以Mrrr法；单药细胞毒测定以半倍浓度梯度设计；联合用药细胞毒测定以Chou TC中效原理设计。结果：Manumycin以及顺铂、5-氟脲嘧啶、平阳霉素、阿霉素单独应用对Tca8113均有明显的细胞毒作用。联合用药显示在相应比例剂量条件下。Manumycin与顺铂联合（3.75：1）后呈拮抗作用，Manumycin与5-氟脲嘧啶联合（0.75：1）作用后，低浓度联合相互拮抗，而高浓度联合时明显协同，Manumycin与平阳霉素（0.75：1）、阿霉素联合（30：1）作用后呈相互协同的作用（CI〈I）。结论：Manumycin与平阳霉素、阿霉素以及与5-氟脲嘧啶高浓度联合作用于Tca8113细胞呈相互协同的细胞毒作用。     

光敏剂photofrinⅡ预激活联合化疗药物对K562细胞杀伤作用的研究

目的:通过体外研究探讨光敏剂photofrinⅡ预激活后对人白血病K562细胞株的杀伤作用及其与化疗药物配伍能否产生协同或拮抗效应.方法:以K562细胞株为研究对象,采用MTT法检测photofrinⅡ预激活后对K562细胞株的抑制作用,同时检测photofrinⅡ预激活后分别与顺铂(DDP)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)联合应用对K562细胞的杀伤作用,Burgi法分析联合用药效果.结果:photofrinⅡ预激活后能明显抑制K562细胞株的增殖,并且这种作用呈剂量依赖性,但其抑瘤作用较后激活组降低.photofrinⅡ预激活后分别与DDP、5-FU、ADM联合,增加了化疗药物的抑瘤作用.结论:photofrinⅡ预激活后能够抑制K562细胞株的增殖,与DDP、5-FU、ADM联合使用具有相加作用.     

β-榄香烯联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨β-榄香烯联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞生长的影响。方法：体外培养宫颈癌SiHa细胞,分别将 β-榄香烯（浓度梯度为25、50、100、150、200μg/ml）,顺铂（浓度梯度为1.5、3、6、9、12μg/ml） ,单独作用于宫颈癌SiHa细胞,加药24h、48h后用CCK-8法检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测β-榄香烯组细胞24h凋亡率。选取合适的药物浓度（β-榄香烯125μg/ml,顺铂3μg/ml） ,进行联合用药,加药24h、48h用CCK-8法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h细胞凋亡率。结果：CCK-8法检测显示β-榄香烯和顺铂单独用药24h、48h后,除顺铂1.5μg/ml外,其它实验组对宫颈癌SiHa细胞的抑制率均高于对照组（P〈0.05）,在一定程度上呈浓度和时间依赖性。联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药（P〈0.01）。结论：β-榄香烯、顺铂单独或联合作用均能抑制SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,且β-榄香烯联合顺铂的作用要显著高于单独用药,β-榄香烯和顺铂可协同（CDI〈1）促进SiHa细胞凋亡。     

新生霉素与格尔德霉素的联合及序贯应用对K562细胞的作用

目的研究Hsp90C-端抑制剂新生霉素（NB）与Hsp90N-端抑制剂格尔德霉素（GA）的联合应用对K562细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡的作用，该作用与细胞色素C释放、Caspase-9和Caspase-3活性的关系，并且研究序贯应用NB和GA对K562细胞的作用。方法细胞用NB和GA联合处理后，采用AO／EB双染检测细胞凋亡，分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的活性，用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C和procaspase-3的含量。用MTT法检测NB→GA和GA→NB序贯处理对K562细胞增殖的抑制作用。结果NB和GA合用抑制K562细胞增殖有单独相加的作用；NB和GA合用激活caspase-3／9的活性程度高于单独使用NB或GA，协同触发K562细胞凋亡；预先用NB处理可增强K562细胞对GA的敏感性，相比之下，预先用GA处理不影响K562细胞对NB的敏感性。结论NB和GA合用可协同抑制K562细胞生长，诱导凋亡；NB可增强GA对K562细胞的抑制能力，而GA不影响NB对K562细胞的抑制作用。     

川芎嗪与β-榄香烯联合应用诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的实验研究

目的:探讨不同作用机制的川芎嗪(Tetrainethylpyrazine,TMP)与β-榄香烯(β-elemene)联合应用,从多环节逆转耐药细胞K562/ADM的多药耐药(multidrug resistance,MDR),以期进一步提高逆转效果.方法:采用MTT法检测细胞的药敏性及抗药性逆转,流式细胞术及透射电镜检测细胞凋亡,应用SPSS(10.0 Production Pacility)软件包对实验结果进行统计学处理.结果:1)非细胞毒性浓度的TMP(350μg/ml)及β-榄香烯(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),逆转耐药倍数分别为2.03倍及2.18倍.β-榄香烯(4.0μg/ml)具有诱导该细胞凋亡的作用.2)上述两种药物以非细胞毒性浓度联合应用,对ADM的逆转倍数为4.65倍,明显高于二者单独应用,而且也高于两者单独应用之和.其主要逆转机制是两药的联合应用通过升高细胞内ADM的浓度,诱导该细胞凋亡的途径,实现提高逆转效果的目的.结论:TMP和β-e榄香烯联合应用能明显逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性和诱导该细胞的凋亡.     

榄香烯联合紫杉醇诱导肺癌细胞凋亡和调控细胞周期的体外研究

目的：观察榄香烯和紫杉醇对肺癌A549细胞的诱导凋亡和周期调控作用。方法：榄香烯和紫杉醇单独及联合作用于肺癌A549细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,免疫印迹法检测蛋白的表达。结果：榄香烯（20μg/ml、80μg/ml）和紫杉醇（2μg/ml）两种药物联合作用A549细胞时,产生协同的增殖抑制作用。榄香烯只诱导A549细胞少量凋亡,紫杉醇使细胞阻滞在G2/M期。榄香烯和紫杉醇联合应用时,细胞凋亡率提高,并检测到PARP的裂解。榄香烯没明显改变survivin的表达,紫杉醇能上调survivin表达。低浓度榄香烯和紫杉醇联合后survivin仍高表达,而高浓度榄香烯和紫杉醇联合后,sur-vivin表达明显下调。结论：榄香烯和紫杉醇对肺癌A549细胞有诱导凋亡和调控细胞周期的作用。     

榄香烯联合紫杉醇诱导肺癌细胞凋亡和调控细胞周期的体外研究

目的:观察榄香烯和紫杉醇对肺癌A549细胞的诱导凋亡和周期调控作用。方法:榄香烯和紫杉醇单独及联合作用于肺癌A549细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,免疫印迹法检测蛋白的表达。结果:榄香烯(20μg/ml、80μg/ml)和紫杉醇(2μg/ml)两种药物联合作用A549细胞时,产生协同的增殖抑制作用。榄香烯只诱导A549细胞少量凋亡,紫杉醇使细胞阻滞在G2/M期。榄香烯和紫杉醇联合应用时,细胞凋亡率提高,并检测到PARP的裂解。榄香烯没明显改变survivin的表达,紫杉醇能上调survivin表达。低浓度榄香烯和紫杉醇联合后survivin仍高表达,而高浓度榄香烯和紫杉醇联合后,sur-vivin表达明显下调。结论:榄香烯和紫杉醇对肺癌A549细胞有诱导凋亡和调控细胞周期的作用。     

三氧化二砷等中药联合CTX对K562细胞株端粒酶的抑制作用

目的　研究三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯及环磷酰胺 (CTX )等几种药物 ,在不同浓度时对K5 62细胞株端粒酶活性的调节作用 ,研究上述中西药的作用机制 ,为寻求治疗急性白血病的中西药联合新方法提供参考。方法　用 3组不同浓度的三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯及CTX与人红白血病细胞株K 5 62共同培养 ,分别于作用 2 4、48、72h后收集细胞并采用PCR ELISA法检测K 5 62细胞端粒酶活性。结果　①人参皂甙、三氧化二砷、β榄香烯及CTX作用后 ,K5 62细胞株端粒酶活性下降 ,下降程度呈浓度时间依赖性 ,在一定浓度及作用时间后端粒酶呈阴性。当三氧化二砷、人参皂甙、β 榄香烯与CTX联合应用时 ,对端粒酶活性的抑制作用增强。②上述药物作用后K 5 62细胞的存活率下降 ,且抑制作用呈浓度、时间依赖性。当三氧化二砷、人参皂甙、β 榄香烯与CTX联合应用时 ,抑制作用增强。 结论　①三氧化二砷、人参皂甙、β 榄香烯及CTX均能完全抑制K5 62细胞株的端粒酶活性 ,抑制端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一。当三氧化二砷、人参皂甙、β 榄香烯与CTX联合应用时 ,对端粒酶活性的抑制作用被增强。②上述药物能抑制K 5 62细胞的生长 ,当三氧化二砷、人参皂甙、β 榄香烯与CTX联合应用时 ,抑制作用增强。     

小分子化合物S1抑制K562细胞增殖及其机理研究

目的:探讨小分子化合物S1对K562细胞的抑制作用及机理,为S1治疗慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）提供理论与实验基础。方法:MTT法检测不同浓度S1对K562细胞增殖的抑制作用;应用Chou-Talalay计算联合指数,观察单独应用S1与S1联合阿糖胞苷对K562细胞增殖抑制的协同作用;Western-blotting方法检测不同浓度S1作用后K562细胞系中Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,S1可以抑制K562细胞的增殖（P<0.05）;S1与阿糖胞苷联合应用对K562细胞的生长抑制具有协同作用,联合指数CI<1;S1可下调K562细胞系中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:小分子化合物可通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达抑制K652细胞的增殖,并与阿糖胞苷具有协同作用。     

羟基磷灰石纳米粒子对人白血病细胞K562毒性作用的研究

目的:探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子体外抑制人白血病细胞K562的生长增殖作用。方法:采用MTT法检测HAP和联合应用化疗药物对K562细胞的增殖抑制及化疗增敏作用。结果:(1)HAP和抗癌药物对K562细胞增殖均有抑制作用;(2)K562细胞生长抑制率与HAP的浓度和作用时间呈明显正相关性;(3)HAP与化疗药物合用具有更良好的抑癌效果。结论:HAP纳米粒子明显抑制K562细胞生长,具有体外抗白血病作用和化疗增敏作用。     

榄香烯乳对r－DNA转录活性的影响及意义

目的;观察榄香烯治疗前后淋巴细胞的ｒ－ＤＮＡ转录活性的变化。方法;榄香烯使用前１天和使用结束后７天抽血化验ｒ－ＤＮＡ转录活性。结果：榄香烯治疗第一个疗程后ｔ－ＤＮＡ转录活性增强。结论;检测ｒ－ＤＮＡ的变化可以作为患者榄香烯治疗后疗效观察的指标之一。     

榄香烯乳注射液抗癌作用的研究

目的探讨榄香烯乳注射液对小鼠移植性肿瘤及肿瘤细胞株的抗癌作用.方法体内抑瘤试验:选肝癌H22、肉瘤S-180、艾氏腹水癌等瘤株.腹腔注射给药,观察记录对腹水癌的生命延长作用及对实体瘤的抑制作用.体外细胞毒试验:选用K562白血病、Hela宫颈癌细胞株,采用MTT法,计算对肿瘤细胞株平均细胞生长抑制率.结果榄香烯乳注射液能明显延长腹水型荷瘤小鼠的生存时间.对K562白血病、Hela宫颈癌细胞株有一定的抑制作用.结论榄香烯乳注射液对肿瘤细胞体内抑瘤试验、体外细胞毒试验均有明显的抑制作用.     

K562多药耐药细胞系中肿瘤干细胞样细胞对伊马替尼耐药机制的初步研究

Objective： To characterize a novel chronic myeloid leukemia （CML） cell line and to further elucidate the mechanisms of resistance to STI571. Methods： A novel K562 cell line （K562NP16） was achieved after exposure of the K562 cells to VP16. A small subpopulation （K562NP16 SP） that was capable of excluding Hoechst 33342 in the K562NP16 cell line was isolated by fiow cytometry sorting. The rest of the K562NP16 cells were classified as non-SP K562NP16. The mechanisms involved in K562NP16 SP cells which became resistant to STI571 were studied. Results： The levels of Bcr-Abl and Abl proteins were similar in the K562 cell line and in non-SP K562NP16 and K562NP16 SP cells. The multidrug-resistant gene 1 （MDR1） expression of the 170 kDa P-glycoprotein （P-gp） was detected in K562NP16 non-SP and K562NP16 SP cells but not in K562 cells. The expression levels of P-gp in the two K562NP16 cell lines were similar. Compared with non-SP K562/ VP16, the K562NP16 SP cells were more resistant to STI571. This resistance could hardly be reversed by many multidrug resistance inhibitors. In addition, in vivo study showed that the K562NP16 SP cells induced tumorigenesis in mice, while the K562NP16 non-SP cells failed to do so. Conclusion： A novel K562 cell line, K562NP16, was generated. A small side population K562NP16 SP cells, had high resistance to STI571 treatment and more tumorigenic than the K562 cells. It may represent the cancer stem cells of the K562NP16 cell line.     

晚期食管癌梗阻的内镜治疗

 目的　为了研究晚期食管癌梗阻患者经内镜扩张治疗后,采用局部化疗及注射榄香烯乳对食管梗阻的解除效果及对肿瘤的抑制率。方法　晚期食管癌患者64例,扩张后均采用局部化疗,局部注射榄香烯乳及支架置入手。结果　扩张后内镜局部化疗使肿瘤缓解80%达PR,而扩张后内镜局部注射榄香烯乳使肿瘤缓解8%达CR,92%达PR。结论　内镜下扩张置入支架安全易行,扩张后局部注射榄香烯乳对抑制肿瘤解决梗阻效果最佳。     

榄香烯乳联合顺铂抑制胃癌AGS细胞生长的实验研究

目的 研究榄香烯乳(elemene)单独或联合顺铂(cisplatin)对人胃癌AGS细胞增殖和周期的影响,并探讨两药是否有协同作用及其可能的分子机制.方法 榄香烯乳单独或联合顺铂作用人胃癌AGS细胞.MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;BrdU掺入标记增殖的AGS细胞,免疫荧光细胞染色法测定增殖细胞数;Western印迹检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达.结果 榄香烯乳(10-160μg/ml)对AGS细胞生长的抑制作用呈现浓度和时间依赖性,与对照组比较,除10μg/ml作用12h外,其它各组差异均有统计学意义(P<0.05).细胞周期中DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例增加,DNA合成期(S期)细胞比例下降.榄香烯乳作用AGS细胞后,降低BrdU的渗入率,减少cyclinD1的表达.榄香烯乳(80μg/ml)联合顺铂(4μg/ml)对细胞增殖和周期的抑制明显强于单独用药(P<0.05).结论 榄香烯乳可抑制人胃癌AGS细胞的增殖并阻滞细胞于G0/G1期,与顺铂联合具有协同作用,其机理可能与降低cyclinD1的表达有关.     

In vitro evaluation of the new anticancer agents KT6149, MX-2, SM5887, menogaril, and liblomycin using cisplatin- or adriamycin-resistant human cancer cell lines

A new model to predict antitumor activity of new analogues was developed, and the cross-resistance against cisplatin (CDDP) and Adriamycin (ADM) was examined. A preclinical evaluation of various new analogues using this new model was performed. The antitumor activities of KT6149, MX-2 (KRN8602), SM5887, menogaril (TUT-7), and liblomycin (NK313) were evaluated against four non-small cell lung cancer cell lines, PC-7, -9, -13, and -14; two small cell lung cancer cell lines, H69 and N231; four CDDP-resistant cell lines, PC-7/1.0, PC-9/0.5, PC-14/1.5, and H69/0.4; a human myelogenous leukemia cell line, K562; and its ADM-resistant subline, K562/ADM by clonogenic assay. The relative antitumor activities of these new analogues were compared with those of parental agents, mitomycin C, ADM, bleomycin, and several anticancer drugs, CDDP, daunomycin, vindesine, and etoposide. KT6149 was more active than mitomycin C against all lung cancer cell lines and the human myelogenous leukemia cell line. Menogaril showed greater activity than ADM, and MX-2 showed activity similar to ADM. However, the antitumor activity of SM5887 was lower than that of ADM. SM5887 and menogaril showed cross-resistance to K562/ADM. Nevertheless, the antitumor activity against K562/ADM of MX-2 was similar to that of the parental cell lines. The activity of liblomycin was similar to that of bleomycin. Thus, KT6149 appears to be the best analogue for use in a clinical trial against lung cancer. MX-2 was active even against ADM-resistant cancer cells. The values of relative resistance to CDDP or ADM were 4.7, 8.1, 7.5, 20.0, and 13.6 for PC-7/1.0, PC-9/0.5, PC-14/1.5, H69/0.4, and K562/ADM, respectively. CDDP-resistant cell lines showed no cross-resistance with other drugs in this study. K562/ADM showed cross-resistance against daunomycin, etoposide, and vindesine. In contrast, mitomycin C and bleomycin had nearly equal activity against K562 and K562/ADM. However, K562/ADM was 2.4-fold more sensitive to CDDP than its parental cell line, K562 (P less than 0.001). These results suggested that the mechanism of CDDP resistance is different from that of multidrug resistance.     

Changes in chemosensitivity of K 562 leukemia cells after induction of erythroid differentiation by hemin

The human leukemia cell line K 562, when treated with subcytotoxic doses of hemin, undergoes reversible erythroid commitment, as shown by the increased synthesis of hemoglobin. Hemin-treated cells maintain replicative capabilities, although perturbations in cell cycle kinetics are induced. K 562 cells were used to investigate changes in antitumor drug sensitivity as a consequence of cell differentiation induced by hemin treatment. K 562 leukemia cells, cultured in the presence of 20 microM hemin for 12 days, were treated with non-phase-specific (adriamycin, 4-OOH-cyclophosphamide, mitomycin C, bleomycin, cis-diamminedichloro platinum) and phase-specific (vincristine, methotrexate and 5-fluorouracil) antitumor drugs. The results obtained by chemosensitivity tests showed a generalized decrease in chemosensitivity of the K 562 cells to all the drugs tested as a consequence of the hemin-induced differentiation.