靶向幽门螺杆菌UreB鲨鱼纳米抗体的筛选与鉴定

目的 开发靶向幽门螺杆菌（H. pylori）尿素酶B亚基（UreB）的鲨鱼纳米抗体。方法 利用大肠杆菌表达系统对UreB进行重组表达,纯化后对条纹斑竹鲨进行免疫,通过间接ELISA检测免疫后鲨鱼血浆的抗体效价。提取鲨鱼外周血淋巴细胞及脾脏组织的总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增鲨鱼纳米抗体片段,构建鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库。扩增噬菌体文库,采用固相淘选,通过噬菌体多克隆ELISA检测特异性噬菌体的富集程度。随后通过单克隆ELISA鉴定阳性噬菌体,并通过序列比对,确定靶向UreB的鲨鱼纳米抗体序列。构建鲨鱼纳米抗体重组表达质粒,利用大肠杆菌表达系统制备重组鲨鱼纳米抗体。通过ELISA检测鲨鱼纳米抗体对重组UreB和H. pylori菌株的结合能力。结果 成功制备了重组UreB蛋白,用于免疫鲨鱼,经6次免疫后构建了库容量为1.28×108 CFU的鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库。淘选到的两株靶向UreB的鲨鱼纳米抗体,具有较高的亲和力,其中1E3可特异性结合H. pylori。结论 成功筛选到靶向UreB鲨鱼纳米抗体,为H. pylori感染的诊断和治疗药物的开发奠定了基础。