靶向幽门螺杆菌毒力因子HtrA鲨鱼纳米抗体的开发

目的 构建鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库,从中筛选出针对幽门螺杆菌关键毒力因子HtrA的鲨鱼纳米抗体。方法 用重组的HtrA蛋白免疫条纹斑竹鲨,从其外周血白细胞(PBLs)和脾脏组织中克隆鲨鱼纳米抗体（VNAR）的编码序列,构建鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库,并从中筛选出抗HtrA的鲨鱼纳米抗体。利用大肠杆菌表达系统对鲨鱼纳米抗体进行重组表达并纯化,并用ELISA检测了鲨鱼纳米抗体的亲和力和稳定性。结果 成功构建了针对HtrA的纳米抗体噬菌体展示文库,筛选出了两个鲨鱼纳米抗体(G11和1A5),分别在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中表达,纯化后进行进一步鉴定。评价了鲨鱼纳米抗体的亲和力和稳定性,G11和1A5的EC50值分别为21.2 nM和27.3 nM,并且在低pH溶液中表现出较高的稳定性。构建了1A5的双价鲨鱼纳米抗体,明显提高了抗原结合活性。