| 摘 要： | 目的构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂/3-磷酸甘油醛脱氢酶复合表位基因(CPI502/GAPDH720)真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720, 并观察其在人宫颈癌细胞(Hela细胞)中的蛋白表达。方法根据T细胞表位预测的基因序列设计引物, 以质粒pGEM-T-CPI621为模版, 利用反转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段, 将该片段克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中, 构建原核表达质粒pET28a(+)-BmCPI502。根据软件设计合适引物, RT-PCR分别扩增BmCPI502基因和BmGAPDH720基因, pcDNA3.1(+)、BmCPI502、BmGAPDH720分别进行双酶切后进行连接, 构建复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720。将复合表位基因重组质粒转染至Hela细胞后, 进行RT-PCR验证, 获得与预期相符目的条带;将表达产物利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测。结果获得了原核表达重组质粒pET28a(+)-BmCPI502, 经...
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