人抗内毒素类脂A抗体轻,重链可变区基因的克隆

目的为了寻找一种治疗内毒素血症及其并发症较为有效的途径，本研究进行了人抗内毒素类脂Ａ轻、重链可变区基因的克隆。方法从含有内毒素抗体的淋巴细胞中提取ｍＲＮＡ，反转录为ｃＤＮＡ，再使用设计合成的人抗体轻、重链引物。结果应用ＰＣＲ技术，扩增获得人抗内毒素抗体轻、重链可变区基因，琼脂糖凝胶电泳，得到两条约３４０ｂｐ和３２５ｂｐ的强荧光带。抗体的ＶＨ和ＶＬ基因经ＭｉｃｒｏＳｐｉｎＴＭ柱纯化后，将ＶＨ和ＶＬ基因用一个编码氨基酸序列为（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３的基因连接子连接，最后将此物定向克隆进载体ｐＣＡＮＴＡＢ５中。结论抗体ＤＮＡ在噬菌体中的重组获得了成功，为下一步的筛选、表达打下了基础。