| 高效hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表达及其穿膜功能的研究 |
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| 引用本文： | 王晓勋,杞少华,李瑞明,梁清乐. 高效hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表达及其穿膜功能的研究[J]. 分子诊断与治疗杂志, 2016, 0(2): 88-93. DOI: 10.3969/j.issn.1674-6929.2016.02.004 |
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| 作者姓名： | 王晓勋 杞少华 李瑞明 梁清乐 |
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| 作者单位： | 1. 湖北医药学院附属太和医院检验部,湖北十堰,442000;2. 湖北医药学院附属太和医院生物医学研究所,湖北十堰,442000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81171783) |
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| 摘 要： | 目的 探讨hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表达及其穿膜功能. 方法 首先,人工设计合成蛋白转导域序列(protein transduction domain,PTD),以人胚肝组织的总RNA为模板,逆转录扩增得人铜锌超氧化物歧化酶全长cDNA序列.其次,将此序列及人工合成PTD序列定向插入pET16b载体;测序鉴定后,将构建成功的重组载体导入E coli BL21菌株,异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,经镍柱纯化,洗脱液经SDS-PAGE检测.最后,将纯化产物与食管癌细胞(EC9706)共孵育,用激光共聚焦和流式细胞仪的方法检测蛋白穿膜能力及活性. 结果 测序结果与人铜锌超氧化物歧化酶全长cDNA序列相符;SDS-PAGE结果出现18.6 kd和20 kd的目的条带;激光共聚焦和流式细胞仪的方法显示蛋白可穿膜且保持活性. 结论 本实验成功构建了PET16b/hCu,Zn-SOD-PTD原核表达质粒,可在大肠杆菌中稳定表达融合蛋白,融合蛋白具有穿膜且保持活性.
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| 关 键 词： | 蛋白转导域 人铜锌超氧化物歧化酶 生物膜 原核表达载体 内化作用 |
Study on expression and trans-membrane activity of human Cu,Zn-SOD-PTD |
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