| 人regucalcin cDNA高表达重组质粒的构建及其在原核细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 徐洪,胡亮,倪培华,吴洁敏,赵涵芳.人regucalcin cDNA高表达重组质粒的构建及其在原核细胞中的表达[J].上海医学检验杂志,2006(4). |
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| 作者姓名： | 徐洪 胡亮 倪培华 吴洁敏 赵涵芳 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室 上海200025(徐洪，胡亮，赵涵芳)，上海交通大学医学院检验系 上海200025(倪培华，吴洁敏) |
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| 基金项目： | 973国家基础研究项目(2004CB518804)，上海教委第4期重点基础学科基金(ZDXK2001) |
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| 摘 要： | 目的原核表达获得大量人regucalc in(RGN)蛋白。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)中扩增RGN全长cDNA,将扩增的产物连接于测序载体pMD18-T,测序鉴定准确后,进行酶切,将正确的RGN全长cDNA与原核表达载体pET42b( )构建成重组质粒pET42b( )-RGN。将pET42b( )-RGN先转化入大肠杆菌DH5α,提取质粒经双酶切鉴定正确后,再转化入表达宿主大肠杆菌DE3菌株。对转化菌株进行诱导、破菌,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹分析,鉴定RGN融合蛋白质表达的正确性。RGN重组融合蛋白经N i2 亲和层析纯化,达电泳纯。结果构建了重组质粒pET42b( )-RGN并获得高效表达,RGN重组融合蛋白经异丙基硫化-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后以包涵体形式存在,表达的蛋白质相对分子质量为34 000。结论人RGN蛋白在pET42b( )原核表达载体可获得高效表达,为进一步了解RGN蛋白质的结构、功能及其抗体的制备等奠定了基础。
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| 关 键 词： | Regucalcin 克隆 原核表达 |
Construction of human regucalcin prokaryotic expression vectors and their expression |
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| XU Hong,HU Liang,NI Peihua,WU Jiemin,ZHAO Hanfang.Construction of human regucalcin prokaryotic expression vectors and their expression[J].Shanghai Journal of Medical Laboratory Sciences,2006(4). |
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| Authors: | XU Hong HU Liang NI Peihua WU Jiemin ZHAO Hanfang |
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| Institution: | XU Hong,HU Liang,NI Peihua,WU Jiemin,ZHAO Hanfang.Department of Biochemistry,Basic Medical College,Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200025,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Regucalcin Cloning Prokaryotic expression |
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