三株产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的研究

目的探讨3株产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)的大肠埃希菌分子生物学特征的改变及其与该突变位点的关系。方法 3株产CTX-M型ESBLs的大肠埃希菌于2005年收集自安徽省内3家医院。克隆这3株细菌的突变基因后进行序列分析,测定野生株、转移接合子与克隆子的最低抑菌浓度,提取突变基因所编码的蛋白质,进行等电聚焦电泳和酶动力学检测,并使用脉冲场凝胶电泳分析这3株细菌的同源性。结果 PCR和序列分析结果显示,与CTX-M-14相比,这3株大肠埃希菌的编码产物各有2处氨基酸突变,1株为第77位丙氨酸(Ala)突变为缬氨酸(Val)、第167位脯氨酸(Pro)突变为亮氨酸(Leu)(等电点为9.1);另2株均为第77位Ala突变为Val、第272位丝氨酸(Ser)突变为精氨酸(Arg)(等电点为9.3)。最低抑菌浓度和酶动力学检测结果表明,这两种酶均可高度水解头孢噻肟。脉冲场电泳结果提示这3株细菌无同源性。结论本研究发现了2种新的分离自大肠埃希菌的CTX-M酶,探讨突变位点与其生物学性状改变的关系,为遏制耐药基因及研究新的抗菌药物作用靶点提供依据,具体机制需进一步深入研究。