重组体pcDNA3.1(+)-tyr的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达 |
| |
引用本文: | 吉琼梅,朱振宇,张海涛,李秀英,岳滔,李茜,马涧泉.重组体pcDNA3.1(+)-tyr的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达[J].中山医科大学学报,2003,24(4):358-362. |
| |
作者姓名: | 吉琼梅 朱振宇 张海涛 李秀英 岳滔 李茜 马涧泉 |
| |
作者单位: | 中山大学中山医学院生物化学教研室,广东广州5l0080 |
| |
摘 要: | 【目的】克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1( )-tyr真核表达重组体,并导人NIH3T3细胞表达。【方法】用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1( )的T7启动子下游,并用脂质体法导入NIH3T3细胞,RT-PCR,酪氨酸酶活性测定及多巴染色法检测tyr的表达。【结果】成功克隆1.74kb的全长tyr cDNA片段,经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致,tyr准确克隆人pcDNA3.1( )的多克隆位点,RT-PCR及酪氨酸酶活性测定等方法检测到转染了重组体的NIH3T3细胞中有tyr的表达。【结论】本实验成功构建了pcDNA3.1( )-tyr真核表达重组体,并成功导入NTH3T细胞中表达.
|
关 键 词: | 黑色素瘤 酪氨酸酶基因 基因表达 pcDNA3.1(+)质粒 RT-PCR法 |
本文献已被 维普 等数据库收录! |
|