抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的表达及其对肿瘤细胞侵袭的抑制作用

目的：制备抑制肿瘤细胞侵袭转移的单链抗体片段，用于构建小型化的免疫偶联物。方法：应用噬菌体呈现技术，以产生抗Ⅳ型胶原酶单抗的杂交瘤细胞为基础克隆构建单链抗体（scFv)基因。以表达质粒pET-30a（＋）为载体在大肠杆菌中进行诱导表达。ELISA法测定表达产物的免疫反应性，明胶酶谱法测定表达产物对靶酶活性的影响。Boyden Chamber测定表达产物对肿瘤细胞侵袭的影响。结果：表达的单链抗体以包涵体形式存在，经变性和复性后，检测表明表达产物保留了对抗原的免疫反应性，对高转移性人肺癌PG细胞分泌的Ⅳ型胶原酶有抑制作用。同时在体外能抑制肿瘤细胞的侵袭，抑制率与表达产物的剂量浓度相关，1mg/ml浓度的片段具有68％的抑制率。结论：运用基因工程手段获得的单链抗体片段保留了亲本抗体的若干特性，对Ⅳ型胶原酶有抑制作用，并能抑制肿瘤细胞的侵袭。