基于PXR/CAR 调控通路探讨士的宁对UGT1A4 的作用

目的研究士的宁对人肝细胞HL-7702 中葡萄糖醛酸转移酶1A4（UGT1A4）表达的影响及其与孕烷X 受 体（PXR）/组成型雄烷受体（CAR）调控通路的关系，明确UGT1A4 与士的宁的关系及作用机制，为进一步研究 士的宁代谢及合成或改造相似结构药物提供一定的实验依据。方法以人肝细胞株HL-7702 为研究对象，不 同浓度的士的宁（10、20、40 pmol·L-1）干预24 h 后，RT-qPCR 和Western Blot 法检测士的宁对HL-7702 细胞 中UGT1A4、PXR 和CAR mRNA 和蛋白表达水平的影响。通过双荧光素酶报告基因法以及脂质体瞬时转染方 法，分析UGT1A4 报告基因（来自于瞬时共转染hCAR 或者是hPXR 之后的HL-7702 细胞）的活性在各浓度士 的宁（10、20、40 pmol·L-1）干预下的影响。利用siRNA 干扰技术，探究士的宁对hPXR 基因沉默后HL-7702 细胞中UGT1A4 蛋白表达水平的影响。结果与对照组比，20、40 pmol·L-1 士的宁干预后明显上调UGT1A4、 PXR 的mRNA 和蛋白的表达水平，呈浓度依赖性（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）；但对CAR mRNA 和蛋白的 表达无明显的影响，差异无统计学意义（P＞0.05）。在瞬时共转染hPXR 的HL-7702 细胞中，20、40 pmol·L-1 士的宁干预24 h 后能明显上调PXR 介导UGT1A4 的转录活性，呈浓度依赖性（P＜0.01，P＜0.001）；在瞬时共 转染hCAR 的HL-7702 细胞中，各浓度士的宁干预24 h 后对CAR 介导的UGT1A4 转录活性无明显影响，与 对照组比，差异无统计学意义（P＞0.05）。士的宁对沉默hPXR 的HL-7702 细胞中UGT1A4 蛋白的诱导作用明 显减弱，与对照组比，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论士的宁对HL-7702 中UGT1A4 和PXR 在转录和 蛋白水平有明显的上调作用，对CAR 在转录和蛋白水平没有明显影响。士的宁对HL-7702 细胞中UGT1A4 的 诱导作用主要通过PXR 调控通路实现。