三角叶黄连ISSR反应体系的建立与优化

目的 针对三角叶黄连ISSR的反应特点，建立稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系，为进一步研究三角叶黄连的种质资源遗传多样性奠定基础。方法 通过筛选引物并设定影响三角叶黄连ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度，检测其不同反应体系的扩增效果，分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化，建立三角叶黄连ISSR-PCR稳定可靠的反应体系。结果 建立了可用于三角叶黄连ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系：25 μL PCR反应体系中，内含10×PCR Buffer 2.5 μL，1.5 mmol/L Mg²⁺,200 μmol/L dNTP,0.3 μmol/L引物，40 ng模板，1.0 U Taq DNA聚合酶。扩增程序为94 ℃预变性5 min，然后进行35个循环：94 ℃变性30 s，(据不同引物的退火温度)复性60 s，72 ℃延伸90 s，循环结束后72 ℃延伸7 min，4 ℃保存。结论 所建立的三角叶黄连ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好等特点，可以较好地应用于三角叶黄连的种质资源遗传多样性及居群鉴别的研究。

Establishment and optimization of ISSR reaction system for Coptis deltoidea