| 人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备 |
| |
| 引用本文： | 曹春雨,韩钰,任玉珊,王艳林.人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(10). |
| |
| 作者姓名： | 曹春雨 韩钰 任玉珊 王艳林 |
| |
| 作者单位： | 三峡大学医学院分子生物学研究所,湖北,宜昌,443002 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
| |
| 摘 要： | 目的:克隆、原核表达有酶活性的重组人精胺氧化酶(SMO)蛋白,并制备兔抗人SMO多克隆抗体.方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人精胺氧化酶cDNA,构建SMO原核表达质粒pET-15b/SMO.将SMO原核表达质粒转化E.coli的BL21(DE3)菌并使用IPTG诱导重组SMO表达.表达的蛋白产物经Ni-NTA亲和层析纯化、透析复性后,化学荧光法测定其酶活性.使用制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化重组人SMO蛋白,以此蛋白作为抗原皮内接种日本大耳白兔来制备抗人SMO多克隆抗体.分别以ELISA、Western blot和免疫细胞化学法检测兔血清中抗体的滴度和抗原特异性.结果:纯化并透析复性后的重组人SMO蛋白具备快速氧化精胺的酶活性.用此重组蛋白制备的抗体具有较高抗体滴度和针对人SMO的特异性.结论:建立了人SMO原核表达、纯化系统,获得了有酶活性的高纯度人SMO蛋白并成功制备了兔抗人SMO的多克隆抗体,为以SMO为靶点的抗肿瘤基础和临床研究提供了有力的研究工具.
|
| 关 键 词： | 精胺氧化酶 原核表达 抗体制备 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of human spermine oxidase |
| |
| CAO Chun-yu,HAN Yu,REN Yu-shan,WANG Yan-lin.Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of human spermine oxidase[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2009,25(10). |
| |
| Authors: | CAO Chun-yu HAN Yu REN Yu-shan WANG Yan-lin |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | spermine oxidase prokaryotic expression antibody preparation |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
