RNA干扰对小鼠结肠癌细胞VEGF表达及细胞增殖的影响

目的 设计、构建小鼠血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）特异的RNA干扰(RNA interference，RNAi)表达质粒，研究该质粒对小鼠结肠癌CT-26细胞VEGF表达的影响及对CT-26细胞生物学活性的影响，探索结肠癌基因治疗的新途径。方法 ① 筛选、设计、合成3段VEGF mRNA小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）片段，构建siRNA表达质粒，双酶切鉴定及测序验证插入序列的正确性。② CT-26细胞分为转染重组质粒V1组、V2组、V3组、Lipofectamine组（Lp组）、空白细胞组（c组）、Scrambled组（Nc组），脂质体法基因转染小鼠结肠癌CT-26细胞，半定量RT-PCR、Western blot法、流式细胞VEGF荧光强度法检测siRNA沉默VEGF表达的效率，应用MTT比色分析法和流式细胞技术观察siRNA阻断VEGF基因表达对CT-26细胞增殖、细胞周期分布及细胞凋亡的影响。结果 ① 成功构建表达载体pSilencer4.1 CMV neo VEGF1/ VEGF2/ VEGF3 siRNA，并经酶切及测序鉴定完全正确。② V1、V2、V3组CT 26细胞VEGF表达较Lp组、c组、Nc组明显下降(P<0.01)，且V1、V2基因沉默效率优于V3(P<0.05)。③ V1、V2、V3组肿瘤细胞生长较Lp组、c组、Nc组被明显抑制 (P<0.01)，又以V1、V2组为明显(P<0.05 vs V3)；④ V1、V2组G0/G1期细胞比例较V3组、Lp组、c组、Nc组增高，S期和G2/M期细胞比例降低 (P<0.05)。结论 ① 应用表达载体法成功构建VEGF基因特异的siRNA干扰表达体系pSilencer4.1 CMV neo VEGF1/ VEGF2/ VEGF3 siRNA。② 重组质粒经脂质体法转染小鼠结肠癌细胞后能显著地发挥基因沉默效应。

Inhibitory effect of short interfering RNA-mediated gene silencing on expression of VEGF and cell proliferation in murine colon carcinoma cells