| SELEX技术筛选HCV非结构蛋白NS3的DNA适配子 |
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| 引用本文： | 徐国胜,骆晓枫,黄小荣,林昌盛,谢金卫,周俊宜.SELEX技术筛选HCV非结构蛋白NS3的DNA适配子[J].热带医学杂志,2015,15(5). |
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| 作者姓名： | 徐国胜 骆晓枫 黄小荣 林昌盛 谢金卫 周俊宜 |
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| 作者单位： | 1. 中山大学中山医学院,广东广州,510080;广州血液中心,广东广州510095
2. 中山大学中山医学院,广东广州,510080 |
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| 摘 要： | 目的 用配基指数富集的系统进化技术(SELEX)技术筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的DNA适配子.方法 构建随机ssDNA文库,两端为固定序列,中间为39 nt的随机序列,总长度为85 nt,将NS3蛋白包被在96孔板上,ssDNA与NS3蛋白进行亲和反应,洗去未结合的ssDNA,洗脱回收与NS3蛋白结合的DNA,PCR扩增后,磁珠法分离成单链.重复以上筛选步骤,直至筛选出高特异性和亲和力的核酸适配子.将核酸适配子连接质粒载体克隆转人大肠杆菌,挑选阳性克隆提取质粒外送到公司进行测序.结果 通过8轮筛选,成功筛选出DNA适配子,并获得其中6条克隆的DNA一级序列.6条适配子序列长度相同,均为85 nt,两端固定序列与设计相符,中间为随机序列,随机序列无共同保守系列.所有寡核苷酸适配子的二级结构以茎环和凸环为主.结论 以NS3蛋白作为药物研究的靶点,结合SELEX筛选技术研究其核酸适配子,具有巨大的潜力和研究价值.
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| 关 键 词： | 配基指数富集的系统进化技术 丙型肝炎病毒 NS3蛋白 适配子 |
Selection of High-Affinity DNA aptamer binding to HCV NS3 protein by SELEX |
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| XU Guo-sheng,LUO Xiao-feng,HUANG Xiao-rong,LIN Chang-sheng,XIE Jin-wei,ZHOU Jun-yi.Selection of High-Affinity DNA aptamer binding to HCV NS3 protein by SELEX[J].Journal Of Tropical Medicine,2015,15(5). |
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| Authors: | XU Guo-sheng LUO Xiao-feng HUANG Xiao-rong LIN Chang-sheng XIE Jin-wei ZHOU Jun-yi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SELEX HCV NS3 protein aptamer |
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