白藜芦醇对神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元移植治疗帕金森模型鼠的影响

背景：目前神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病仍面临细胞存活率低的问题，大部分细胞因氧自由基形成及脂质过氧化而发生程序性凋亡。目的：探讨白藜芦醇对神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植至帕金森模型鼠后的细胞存活及移植效果的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-10/2008-06在中山大学动物实验中心完成。材料：成年健康雄性SD大鼠32只，随机分为模型对照组、多巴胺能神经元组、白藜芦醇组、联合组，8只/组；孕十四五天的健康SD大鼠4只，取胎鼠用于神经干细胞的分离培养。白藜芦醇为深圳晶美生物工程有限公司产品。方法：取体外分离培养的胎鼠中脑神经干细胞，在含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中传代扩增后，在分化液中诱导向多巴胺能神经元方向分化。各组大鼠均应用6-羟基多巴胺制备帕金森病模型。采用两点移植法，多巴胺能神经元组向大鼠毁损同侧纹状体注入多巴胺能神经元细胞悬液3 μL (1×105个/μL)；白藜芦醇组注入40 mg/L白藜芦醇3 μL；联合组注入40 mg/L白藜芦醇3 μL+多巴胺能神经元细胞悬液3 μL (1×105个/μL)；模型对照组注入DMEM/F12细胞培养液3 μL。主要观察指标：胎鼠神经干细胞诱导分化的酪氨酸羟化酶染色阳性细胞率，细胞移植后帕金森模型鼠不对称旋转行为的变化，纹状体移植区酪氨酸羟化酶染色阳性细胞存活情况。结果：流式细胞仪检测诱导分化6 d的细胞中酪氨酸羟化酶染色阳性细胞率为(17.8±4.2)%。与模型对照组比较，联合组大鼠移植后10 d不对称旋转行为有显著性改善(P < 0.01)，移植后20 d不对称旋转圈数开始明显下降(P < 0.01)。移植后10~ 60 d，联合组大鼠的不对称旋转圈数明显低于多巴胺能神经元组(P < 0.01)。白藜芦醇组、模型对照组均未见酪氨酸羟化酶染色阳性细胞，联合组酪氨酸羟化酶染色阳性细胞数明显多于多巴胺能神经元组(P < 0.01)。结论：胎鼠神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元移植至帕金森模型鼠后，白藜芦醇可提高纹状体移植区植入细胞的存活率，改善大鼠不对称旋转行为。