| 鸡胚精原干细胞转染EGFP获得转基因精子的研究 |
| |
| 作者姓名： | 陈昊 孙敏 高元丰 余飞 孙国波 田智泉 杨海燕 任丽伟 李碧春 |
| |
| 作者单位： | 1. 苏州大学医学部,江苏,苏州,215006
2. 扬州大学动物科学与技术学院,江苏,扬州,225009 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，江苏省自然科学基金，高等学校博士学科点专项科研基金 |
| |
| 摘 要： | 目的:通过精原干细胞体外转染外源基因获得转基因精子.方法:孵化16 d的鸡胚睾丸,酶消化获取精原干细胞(SSCs),纯化后体外培养和传代扩增,碱性磷酸酶(AKP)活性和胚胎阶段特异性抗原(SSEA-1)免疫荧光鉴定.电穿孔介导EGFP转染SSCs,G418筛选8 d后将阳性SSCs移植入经白消安处理的实验鸡体内.结果:移植后25 d采集实验鸡精液检测,精子密度为3.87(1010/L),表达EGFP的成熟精子比率为4.25%;移植后85 d,精子密度为3.27(1011/L),表达EGFP的成熟精子比率为16.25%.睾丸组织冰冻切片显示,曲精细管中转染后的SSCs定居在曲精细管的基底部,有表达EGFP蛋白生精细胞.收集实验鸡精液,提取DNA进行PCR扩增EGFP基因,经凝胶电泳检测,精液DNA的条带清晰,与目的片段大小一致.结论:鸡胚精原干细胞体外转染EGFP可获得转基因精子,为进一步生产转基因模型动物拓宽了途径.
|
| 关 键 词： | 鸡 胚胎精原干细胞 电转染 精子发生 |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
