| Sonic hedgehog蛋白N端基因片段毕赤酵母表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 时纪元,李兆中,高军,龚燕芳,金晶.Sonic hedgehog蛋白N端基因片段毕赤酵母表达载体的构建[J].中华胰腺病杂志,2008,8(1). |
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| 作者姓名： | 时纪元 李兆中 高军 龚燕芳 金晶 |
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| 作者单位： | 第二军医大学长海医院消化内科,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的 构建含Sonic hedgehog(SHH)蛋白N端基因片段的毕赤酵母表达载体.方法 通过BamH 1、Xho 1双酶切、T4连接酶连接,将SHH-N基因片段插入pET22b原核表达载体,构建pET22b-SHH-N质粒;经PCR扩增,产物再与pTA2载体连接,构建pTA2-SHH-N重组质粒;经EcoR 1及Not 1双酶切、T4连接酶连接,将SHH-N端基因片段插入pPIC9K质粒,构建pPIC9K-SHH-N重组质粒;通过线性化、脱磷酸化,将线性化pPIC9 K-SHH-N DNA转染毕赤酵母菌株GS115,最后经PCR扩增和测序鉴定.结果 转染的毕赤酵母经PCR扩增和测序证实含有SHH-N基因片段,与原始的基因片段序列完全一致.结论 成功地构建含SHH-N蛋白基因片段的毕赤酵母表达载体.
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| 关 键 词： | 质粒 DNA 重组 毕赤酵母 聚合酶链反应 |
Construct the pichia yeast expression vector of the artificial composite SHH-N |
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| Authors: | SHI Ji-yuan LI Zhao-shen GAO Jun GONG Yan-fang JIN Jing |
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