骨肉瘤Kv1.5钾离子通道表达意义的研究

目的 研究表明,Kv1.5钾离子通道参与了多种肿瘤的生物学行为,但其在骨肉瘤中的表达和作用尚未明确.本研究拟检测Kv1.5钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探讨小干扰RNA(small interfering,siRNA)沉默Kv1.5表达后对骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响及可能的调控机制.方法 实验分组,Kv1.5-siRNA转染细胞为实验组,control-siRNA转染细胞为对照组,未处理细胞为空白组.采用siRNA抑制Kv1.5的表达,并分别采用CCK-8法、克隆形成率、流式细胞仪和Tunel法检测MG-63细胞增殖、生长、周期和凋亡的变化.采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测骨肉瘤细胞中周期和凋亡相关基因的表达水平.结果 Kv1.5在骨肉瘤细胞和组织中均异常高表达.CCK-8法检测结果示,Kv1.5-siRNA组细胞增殖水平为(53.87±5.91)％,与control-siRNA组的(99.14±7.87)％相比差异有统计学意义,Z=-3.49,P＜0.001;与空白组(100.00±8.37)％相比差异有统计学意义,Z=-3.57,P＜0.001.克隆形成实验结果示,Kv1.5-siRNA组克隆形成数为164.00±7.66,与control-siRNA组(223.20±11.41)相比,Z=-2.61,P=0.008;与空白组(228.20±12.62)相比,Z=-2.40,P=0.016.流式细胞周期结果示,Kv1.5-siRNA组G0/G1期所占比例为(68.81±0.55)％,与control-siRNA组(41.22±0.61)％相比,Z=-2.15,P=0.031;与空白组(40.79±0.52)％相比,Z=-2.31,P=0.029.流式细胞凋亡结果示,Kv1.5-siRNA组(30.23±1.74)％与control-siRNA组(14.10±1.27)％相比,Z=-2.04,P=0.039;与空白组(12.85±1.02)％相比,Z=-2.09,P=0.035.Tunel法结果示,Kv1.5-siRNA组凋亡指数为(35.20±3.14)％,与control-siRNA组(8.03±1.50)％相比,Z=-2.41,P=0.015;与空白组(8.22±1.32)％相比,Z=2.25,P=0.019.沉默Kv1.5表达可明显下调骨肉瘤中Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、Bcl-2和Bik基因的表达,同时上调p21、p27、Bax、Bcl-XL和Caspase-3基因的表达,与对照组相比,P值均＜0.05.结论 Kv1.5钾离子通道参与了骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的过程,其作用机制可能与调控周期依赖激酶和Bcl-2家族的相关因子有关.

Expression and role of Kv1.5 potassium channel in osteosarcoma tissues