| 人SOX7启动子荧光素酶报告质粒构建及HMGA2对其活性影响的研究 |
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| 引用本文： | 孔德全,查郎,蒲斌,李军,方勇木,王子卫.人SOX7启动子荧光素酶报告质粒构建及HMGA2对其活性影响的研究[J].中华肿瘤防治杂志,2016(19):1282-1286. |
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| 作者姓名： | 孔德全 查郎 蒲斌 李军 方勇木 王子卫 |
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| 作者单位： | 1. 福建中医药大学第四临床医学院普通外科,福建厦门,361100;2. 重庆医科大学附属第一医院胃肠外科,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81272753) |
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| 摘 要： | 目的 研究发现,HMGA2促进肿瘤细胞发生EMT与其下游基因SOX7有关.为进一步验证转录因子HM-GA2与其下游基因SOX7之间的调控关系,本研究通过构建人SOX7基因启动子荧光素酶报告质粒,采用荧光素酶报告实验观察HMGA2对SOX7基因启动子荧光素酶活性的影响,为研究HMGA2转录表达的调控机制提供必要的实验基础.方法 采用PCR技术扩增人SOX7基因启动子序列(-1 549～+79nt),将SOX7基因启动子插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中构建质粒pGL3-SOX7-promoter;再分别将pGL3-SOX7-promoter、pGL3-basic-SOX7-promoter和对照质粒(pLV-UbC-IRES2-EGFP)、pGL3-SOX7-promoter和HMGA2表达质粒(pLV-UbC-HMGA2-IRES2-EGFP)3组质粒共转染293T细胞,培养48 h后,检测3组荧光素酶的表达情况,观察HMGA2对SOX7基因启动子的调控作用.结果 通过菌落PCR和核酸测序证实,人SOX7基因启动子荧光素酶报告质粒pGL3-SOX7-promoter构建成功;将pGL3-SOX7-promoter和HMGA2表达质粒(pLV-UbC-HMGA2-IRES2-EGFP)共转染293T细胞48 h后,与对照组相比,SOX7基因启动子介导荧光素酶的活性降低约31％,受到明显抑制(P=0.003),提示HMGA2可能调控SOX7基因启动子的活性.结论 本研究成功构建了SOX7基因启动子荧光素酶报告质粒,初步验证了SOX7是HMGA2下游的作用靶点.
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| 关 键 词： | SOX7 HMGA2 荧光素酶报告质粒 启动子活性 |
Construction of the Human SOX7 promoter luciferase report plasmid and verification of HMGA2's regulation to SOX7 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SOX7 HMGA2 luciferase reporter plasmid promoter activity |
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