| 副流感病毒核衣壳蛋白的基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 林斌,田新贵,唐启慧,王长兵,游爱萍,周荣.副流感病毒核衣壳蛋白的基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备[J].热带医学杂志,2008,8(4):340-343. |
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| 作者姓名： | 林斌 田新贵 唐启慧 王长兵 游爱萍 周荣 |
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| 作者单位： | 广州华银医药科技有限公司,广州,510663;广州市儿童医院,广州,510120;中国科学院研究生院,北京,100049;广州华银医药科技有限公司,广州,510663;广州市儿童医院,广州,510120;中国科学院研究生院,北京,100049 |
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| 摘 要： | 目的 表达Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,为制备抗体作前期工作.方法 从分离培养的Ⅱ型副流感病毒标本中RT-PCR扩增出核衣壳蛋白基因,Nde Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切PCR产物,定向连接到原核表达载体pQE2中,得到重组表达质粒pQEHpI2NP,重组表达质粒进行DNA测序鉴定,转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的 蛋白的表达.利用Ni-NTA agarose纯化带6个组氨酸标记的重组蛋白,重组蛋白免疫小鼠,制备抗Hpl2NP多抗,Hep-2细胞培养的Ⅱ型副流感病毒制备可溶性抗原.Western-blot分析.结果 构建了表达重组质粒pQE2_Hpl2NP,测序鉴定了克隆序列的准确性,在大肠杆菌中成功地表达并纯化得到重组核衣壳蛋白.经Western-blot证实,重组蛋白免疫的小鼠血清与细胞培养的Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白有特异性反应.结论 成功表达了Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,并制备了抗Hpl2NP多抗.
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| 关 键 词： | 副流感病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 基因表达 多克隆抗体 |
| 文章编号： | 1672-3619(2008)04-0340-04 |
| 修稿时间： | 2007年11月15 |
Cloning and Expression and Polyclonal Antibodies Preparation for the Nucleocapsid Protein of Human Parainfluenza Virus Type 2 |
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| LIN Bin,TIAN Xin-gui,TANG Qi-hui,WANG Chang-bing,YOU Ai-ping,ZHOU Rong.Cloning and Expression and Polyclonal Antibodies Preparation for the Nucleocapsid Protein of Human Parainfluenza Virus Type 2[J].Journal Of Tropical Medicine,2008,8(4):340-343. |
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| Authors: | LIN Bin TIAN Xin-gui TANG Qi-hui WANG Chang-bing YOU Ai-ping ZHOU Rong |
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