大鼠心肌肌凝蛋白α重链基因逆转录病毒载体的构建

目的：克隆编码大鼠心肌肌凝蛋白α重链aa736-960的cDNA片段，构建携带huIL-2/myosin融合基因的逆转录病毒载体。方法：以RT-PCR方法从幼齿大鼠心肌组织中扩增出681bp的目的基因，与huIL-2cDNA序列拼接，构建融合基因huIL-2/myosin及其逆转录病毒载体，采用脂质体转染NIH3T3细胞，经G418筛选后，用RT-PCR和免疫组化法分析重组逆转录病毒的表达。结果：核苷酸序列测定显示，克隆基因的核苷酸及推导的氨基酸序列与报告序列一致，开放阅读框正确；逆转录病毒载体pLNC-huIL-2-myosin酶切结果与预期一致，RT-PCR检测提示转染细胞有pLNC-huIL-2-myosinmRNA转录；免疫组化分析表明转染细胞胞质内有大量肌凝蛋白表达。结论：大鼠心肌肌凝蛋白α重链基因逆转录病毒载体构建成功，并可在NIH3T3细胞中表达，为心肌肌凝蛋白基因转移诱导机体特异性免疫耐受对心肌免疫损伤的防治研究打下了基础。