| 摘 要： | 目的 应用RNA干扰（RNAi）和RNA激活（RNAa）技术,分别构建小干扰RNA（siRNA）和双链RNA（dsRNA）,建立Wilms瘤基因1（WT1）低表达和过表达的乳腺癌细胞模型.方法 以国外学者提供的3条序列（siRNA-516 、siRNA-803、siRNA-1029）构建WT1 siRNA干扰表达WT1,以研究已证实可上调WT1表达的序列（dsRNA-319）构建dsRNA过表达WT1,通过脂质体（LipofectamineTM2000）分别将siRNA和dsRNA转入MDA-MB-321和MCF-7细胞.WT1有效siRNA筛选实验分为6组：WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803、WT1 siRNA-1029、阴性对照、脂质体组和空白细胞组；观察转染效率的时间点为转染后24、48、72 h.WT1 dsRNA的筛选实验分为3组：WT1 dsRNA-319、阴性对照组和空白细胞组；观察转染效率的时间点为转染后48、72、96 h.通过实时定量PCR（qRT-PCR）和Westem Blotting筛选作用效果最明显的siRNA和dsRNA.使用单因素方差分析进行统计学分析.结果 成功构建WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803和WT1 siRNA-1029共3个siRNA,并转染到MDA-MB-231细胞中,转染效率达90％以上.上述3个WT1 siRNA均能够抑制WT1 mRNA和蛋白的表达,以转染后48 h WT1 siRNA-1029的效果最为显著[WT1 siRNA-1029组WT1 mRNA表达水平与空白细胞组相比显著降低（0.49±0.02比1.00±0.08,P=0.00）,其蛋白表达水平也明显降低].成功将WT1 dsRNA-319转染到MCF-7细胞中,转染效率达90％以上.50 μmol/L的WT1 dsRNA-319转染后96 h,MCF-7细胞的WT1过表达最为显著[WT1 dsRNA-319组的WT1 mRNA表达水平与空白细胞组相比显著升高（319.06±14.84比1.00±0.07,P=0.00）,其蛋白表达水平也明显升高].结论 成功建立低表达WT1的MDA-MB-231细胞和过表达WT1的MCF-7细胞模型,为后续进一步研究WT1在乳腺癌中的生物学行为奠定了基础.
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