| 过表达Akt1对小鼠骨髓间充质干细胞生物学功能的影响 |
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| 引用本文： | 周卢琨,曹文彬,姚剑峰,申昱妍,杨欣,王钊,冯四洲,韩明哲.过表达Akt1对小鼠骨髓间充质干细胞生物学功能的影响[J].生物医学工程与临床,2014(4):380-385. |
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| 作者姓名： | 周卢琨 曹文彬 姚剑峰 申昱妍 杨欣 王钊 冯四洲 韩明哲 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院血液学研究所·血液病医院,天津300020 |
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| 基金项目： | 天津市应用基础与前沿技术研究计划（重点项目）（14JCZDJC33000） |
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| 摘 要： | 目的探讨Akt1过表达对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物学功能的影响。方法雄性健康C57小鼠,鼠龄7~8周,体质量18~25 g。取该小鼠胫骨和股骨,利用BMSCs的贴壁生长能力进行分离,并对获取的细胞进行流式鉴定。构建Akt1-IRES-GFP逆转录病毒载体,感染BMSCs,并筛选、扩增Akt1过表达的BMSCs。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot测定转染Akt1表达情况。用不同浓度(0、10、50、100 ng/mL)的γ干扰素(IFN-γ)处理Akt1-BMSCs及BMSCs,采用四唑氮化合物(MTS)法绘制生长曲线,通过Ca2+依赖性磷脂结合蛋白/碘化丙啶(AnnexinV/PI)复染,观察不同浓度IFN-γ对Akt1-BMSCs及GFP-BMSCs细胞凋亡的影响。结果成功培养出小鼠BMSCs,高表达CD29、CD44、Sca-1,而不表达CD45、CD34,CD11b、CD31、FLK-1、MHC-Ⅱ。成功筛选并扩增出Akt1-BMSCs;RT-PCR显示,Akt1-BMSCs的Akt1基因表达量明显高于BMSCs(P0.01);Western blot显示,Akt1-BMSCs的总Akt1蛋白及磷酸化Akt蛋白均高于BMSCs。流式细胞仪检测Akt1-BMSCs及GFP-BMSCs的绿色荧光蛋白(GFP)的表达量均高于95%。细胞增殖及凋亡实验显示,在正常培养及高浓度IFN-γ(100 ng/mL)的刺激下,Akt1-BMSCs显示出了增殖及抗凋亡优势。结论 Akt1-BMSCs比相同代数的BMSCs在正常培养及高浓度IFN-γ(100 ng/mL)的刺激下增殖及抗凋亡能力增强,可用于进行下一步的研究。
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| 关 键 词： | 间充质干细胞 生物学功能 Akt1 蛋白表达 |
Influence of overexpressing Akt1 on the biological function of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells |
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| ZHOU Lu-kun;CAO Wen-bin;YAO Jian-feng;SHEN Yu-yan;YANG Xin;WANG Zhao;FENG Si-zhou;HAN Ming-zhe.Influence of overexpressing Akt1 on the biological function of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells[J].Biomedical Engineering and Clinical Medicine,2014(4):380-385. |
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| Authors: | ZHOU Lu-kun;CAO Wen-bin;YAO Jian-feng;SHEN Yu-yan;YANG Xin;WANG Zhao;FENG Si-zhou;HAN Ming-zhe |
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| Institution: | ZHOU Lu-kun;CAO Wen-bin;YAO Jian-feng;SHEN Yu-yan;YANG Xin;WANG Zhao;FENG Si-zhou;HAN Ming-zhe;Hematopoietic Stem Cell Transplantation Center, Institute of Hematology and Blood Diseases Hospital, Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mesenchymal stem cells biological functions Akt1 protein expression |
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