SARS-CoV 5'UTR在基因转录中的启动子活性

目的了解SARS-CoV不同毒株5′UTR RNA的构成特点和差异及其空间结构；研究该序列在真核细胞中的启动子活性。方法用软件DNAStar-MegAlign和BLAST分析SARS-CoV5′UTR序列同源性、RNADraw3．0预测二级结构；构建5′-UTR cDNA序列驱动的荧光素酶基因表达质粒pGL3-5′-UTR，转染HepG2细胞，检测萤火虫荧光素酶的表达；构建一套缺失突变质粒，使其分别3′端残留三个、两个、一个和零个（完全缺失）茎环，检测报告基因的表达；采用5′RACE，查找转录起始位点；将pGt3-5′UTR转染A549、HepG2、VeroE6、HeLa和ECV304．检测报告基因的表达差异。结果SARS-CoV5′UTR全长为264nt，18株有缺失突变均位于5′端。101个SARS-CoV 5′UTR序列中．共发现5个点突变位置：SARS-Cov5′UTRRNA可形成稳定的二级结构。Stem-loop-Ⅱ含多个茎环结构，形成复杂的假结；pGL3-5′-UTR有明显的萤火虫荧光素酶表达；当4个茎环都具备时，荧光素酶相对活性是SV40启动子的约43％；失去第一个茎环后。是SV40启动子的约45％；而失去前两个后，则不表达荧光素酶；转录起始位点在SARS-CoV5′UTR的第56位核苷酸；在五种不同细胞中，表达强度由高到低依次是：A549、HepG2、ECV304、HeLa和VeroE6。结论①SARS-CoV5′UTR序列保守，二级结构可形成4个茎环结构域；②SARS-CoV5′UTR有启动子活性；③在二级结构中，与启动子活性有关的结构域在前两个茎环；④SARS-CoV5′UTR在调控基因转录时，第56位核苷酸及其下游的TRS具有重要作用；⑤多种组织或器官都可为SARS-CoV5′UTR发挥启动子功能提供辅助因子，而以肺源性细胞最为适合。

Promoter Activity of SARS Coronavirus 5' UTR Sequence in Eukaryotic Cells