| 摘 要： | 目的 构建分泌人干扰素α-2a（IFNα-2a）的重组卡介苗（rBCG）。方法 采用聚合酶链反应（PCR）技术从卡介苗基因组中扩增出Ag85B的信号肽基因序列,从pBIFNα-2a质粒中扩增出IFNα-2acDNA全长序列。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pMV261结核杆菌HSP60启动子下游,构建一个分泌型的卡介苗穿梭表达质粒pMSIFNα-2a。利用电穿孔技术将质粒pMSIFNα-2a转入卡介苗得到rBCG,分别用PCR扩增和Western印迹检测rBCG菌体和培养上清中IFNα-2a的DNA和蛋白表达,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测rBCG培养上清中IFNα-2a的含量。结果 酶切鉴定、PCR扩增和DNA测序分析结果均表明,所克隆的信号肽DNA片段和IFNα-2a片段与文献结果完全一致,pMSIFNα-2a的连接方向正确,阅读框与预期完全一致。以rBCG质粒DNA为模板,通过PCR扩增得到IFNα-2a的基因片段,Western印迹证实rBCG分泌的蛋白能与人IFNα-2a的抗体特异性结合,ELISA法检测到rBCG培养上清中高含量的IFNα-2a（324.57pg／ml）。结论 构建的rBCG能够分泌具有功能活性的细胞因子IFNα-2a,有望成为膀胱肿瘤免疫治疗的一种有效方法。
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