酵母双杂交技术筛选α干扰素结合蛋白的基因

目的 筛选人肝细胞cDNA文库中与α干扰素（IFNα）蛋白具有相互作用的蛋白基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）扩增IFNα基因，连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒，转染酵母细胞AH109，Western blot证明IFNα蛋白能够在AH109中表达。然后将AH109与转染了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖（X-α-gal）上进行双重筛选阳性菌落，提取质粒后转化DH5α大肠埃希菌并经氨苄西林抗性筛选，提取单克隆菌落质粒，酶切答定正确者进行测序，再行生物信息学分析。结果 成功克隆化IFNα基因并在酵母细胞中表达，应用酵母双杂交筛选出阳性菌落34个，经生物信息学分析，排除读码框架不正确者，最后得到8种已知基因：玻璃体连接蛋白、纤维蛋白原α多肽、人类免疫缺陷病毒（HIV）1Tat相互作用蛋白2、精氨酸酶、NADH脱氢酶1β亚复合物、转铁蛋白受体2α、酒精脱氢酶IBβ多肽、肝细胞癌蛋白（HCC-1）；2种染色体基因：人染色体17，克隆RP11-35083，人染色体10，克隆RP11-35101。结论 成功克隆出IFNα基因，并从肝细胞cDNA文库中筛选出8种能与IFNα具有结合作用的蛋白基因。

Screening of interferon α binding proteins by yeast-two hybrid technique