| 人α防御素的稳定表达和活性鉴定 |
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| 引用本文： | 刘娟,翟嵩,杜德伟,王临旭,王少扬,汪定成,孙永涛. 人α防御素的稳定表达和活性鉴定[J]. 医学争鸣, 2005, 26(2): 178-181 |
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| 作者姓名： | 刘娟 翟嵩 杜德伟 王临旭 王少扬 汪定成 孙永涛 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心
2. 第四军医大学唐都医院检验科,陕西,西安710038 |
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| 摘 要： | 目的: 制备有较高生物学活性的分泌型人α防御素1与α防御素3,并初步鉴定其抗菌活性;方法: 将真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO-HNP1,3与含有dhfr基因的质粒pDCH1P11共转染入CHO-dhfr-,ELISA检测到培养上清中重组蛋白的表达,对阳性表达的细胞进行G418筛选,对其中9个表达量较高的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压扩增, ELISA法、RT-PCR法及间接免疫荧光(IFA)分析蛋白表达情况,并同步测定其体外抗菌活性.结果: α防御素1的表达量是18.85～47.46 mg/L*48 h*106个细胞; α防御素3的表达量是16.89～35.57 mg/L*48h*106 个细胞.用RT-PCR从稳定表达的细胞株中扩增出全长约303 bp的片段;IFA 显示稳定转染的细胞胞质核周质中有强的绿色荧光;K-B纸片琼脂扩散法显示α防御素1,3在大肠埃希菌MH平板上形成了明显的抑菌圈.结论: 成功高效地表达了分泌型的α防御素1,3,并具有良好的生物学活性,为进一步探讨α防御素1,3对HIV-1的抑制作用提供了物质基础.
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| 关 键 词： | 人α防御素 CHO-dhfr-细胞 甲氨喋呤 |
| 文章编号： | 1000-2790(2005)02-0178-04 |
| 修稿时间： | 2004-08-25 |
Expression and functional characterization of human α-defensins |
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| LIU Juan,ZHAI Song,DU De-Wei,WANG Lin-Xu,WANG Shao-yang,WANG Din-Cheng,SUN Yong-Tao. Expression and functional characterization of human α-defensins[J]. Negative, 2005, 26(2): 178-181 |
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| Authors: | LIU Juan ZHAI Song DU De-Wei WANG Lin-Xu WANG Shao-yang WANG Din-Cheng SUN Yong-Tao |
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