| VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达 |
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| 引用本文： | 王刚,刘成硅,张晓明,张凯伦,蒋雄刚. VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达[J]. 华中科技大学学报(医学版), 2011, 40(1): 55-59. DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2011.01.013 |
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| 作者姓名： | 王刚 刘成硅 张晓明 张凯伦 蒋雄刚 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科,武汉,430022
2. 广州军区武汉总医院心胸外科,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况。方法将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达。结果成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P<0.01)。结论成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人血管内皮细胞生长因子165 人组织型纤溶酶原激活因子 真核表达载体 体外表达 |
Construction and in vitro Expression of Human Vascular Endothelial Growth Factor 165 and Tissue-type Plasminogen Activator Gene Recombinant Eukaryotic Expression Vector |
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| Affiliation: | Wang Gang1,Liu Chenggui1,Zhang Xiaoming2 et al1Department of Cardiovascular Surgery,Union Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University ofScience and Technology,Wuhan 430022,China2Department of Cardio Thoracic Surgery,Wuhan Geueral Hospital of Guangzhou Military Region,Wuhan 430070,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human vascular endothelial growth factor 165 tissue-type plasminogen activator eukaryotic expression vector gene expression in vitro |
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