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| pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒的构建及其在活细胞内的相互作用 | |
| 引用本文： | 郭术俊,赵保明,唐洁,胡建国,吕合作.pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒的构建及其在活细胞内的相互作用[J].华中科技大学学报(医学版),2011,40(2):137-141. |
| 作者姓名： | 郭术俊 赵保明 唐洁 胡建国 吕合作 |
| 作者单位： | 1. 蚌埠医学院,第一附属医院中心实验室,蚌埠,233000;蚌埠医学院,免疫学教研室,蚌埠,233000 2. 蚌埠医学院,组织移植安徽省重点实验室,蚌埠,233000 3. 蚌埠医学院,免疫学教研室,蚌埠,233000 4. 蚌埠医学院,第一附属医院中心实验室,蚌埠,233000;蚌埠医学院,组织移植安徽省重点实验室,蚌埠,233000 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，教育部科学技术研究重点项目，安徽省第5批(2010年度)优秀青年科技基金，安徽省教育厅自然科学基金 |
| 摘 要： | 目的构建pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察Olig2与Id4的相互作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增Olig2和Id4基因,分别定向克隆到pBiFC-VN173和pBiFC-VC155载体中,获得pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序;用脂质体方法共转染pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4质粒到人结肠癌细胞系SW-1116细胞中,在荧光显微镜下观察Olig2与Id4之间的相互作用。结果通过酶切鉴定和测序表明成功构建了pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒;该质粒能够有效地共同转染到靶细胞,Olig2和Id4在靶细胞中能够高效表达,并可以相互结合出现BiFC荧光信号,且该信号主要分布于胞质中。结论成功构建了用于BiFC技术的真核表达载体,并在活细胞内检测到Olig2和Id4分子的相互结合。 |
| 关 键 词： | Olig2 DNA结合抑制因子4 重组质粒 转染 细胞定位 双分子荧光互补技术 |
Construction of pBiFC-VN173-Olig2 and pBiFC-VC155-Id4 Eukaryotic Expression Vectors and Their Interaction in Living Cells |
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| Guo Shujun,Zhao Baoming,Tang Jie et al Central Laboratory of the First Affiliated Hospital.Construction of pBiFC-VN173-Olig2 and pBiFC-VC155-Id4 Eukaryotic Expression Vectors and Their Interaction in Living Cells[J].Journal of Huazhong University of Science and Technology(Health Sciences),2011,40(2):137-141. | |
| Authors: | Guo Shujun Zhao Baoming Tang Jie Central Laboratory of the First Affiliated Hospital |
| Institution: | Guo Shujun1,2,Zhao Baoming3,Tang Jie2 et al 1Central Laboratory of the First Affiliated Hospital,2Department of Immunology,3Anhui Key Laboratory of Tissue Transplantation,Bengbu Medical College,Bengbu 233000,China |
| Abstract: | Objective To construct pBiFC-VN173-Olig2 and pBiFC-VC155-Id4 eukaryotic expression plasmids for detecting the interaction of Olig2 and Id4 in living cells by bimolecular fluorescence complementation(BiFC)assay.Methods The RT-PCR was used to amplify rat Olig2 and Id4 genes from RNA of neonatal rat spinal cord.The Olig2 and Id4 genes were inserted into BiFC eukaryotic expression vectors pBiFC-VN173 and pBiFC-VC155 to construct recombinant expression vectors pBiFC-VN173-Olig2 and pBiFC-VC155-Id4,respectively.T... |
| Keywords: | Olig2 |
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