| 稳定表达人BACE1启动子及荧光素酶报告基因HEK293细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 邓常青,朱炳林,龙艳,罗伟,陈国俊.稳定表达人BACE1启动子及荧光素酶报告基因HEK293细胞株的建立[J].重庆医学,2017,46(3). |
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| 作者姓名： | 邓常青 朱炳林 龙艳 罗伟 陈国俊 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学附属第一医院神经病学重点实验室,重庆400016;重钢总医院重症医学科,重庆400037;2. 重庆医科大学附属第一医院神经病学重点实验室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金国际合作重大项目，国家自然科学基金，重庆市卫生局重点基金 |
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| 摘 要： | 目的 对人β位点裂解酶-1(BACE1)基因核心启动子进行克隆,构建携带BACEI基因启动子的荧光素酶报告载体,筛选稳定表达细胞株并分析其转录活性.方法 提取人胚肾HEK293细胞基因组DNA,以其为模板,PCR扩增BACE1核心启动子(-691～+67)并克隆至荧光素酶报告载体pGL4.21中,构建BACE1基因启动子荧光素酶报告载体pGL4.21-BACE1,将其转染HEK293细胞(无启动子的pGL4.21载体作阴性对照),利用嘌呤霉素筛选稳定表达株后检测其转录活性.结果 成功扩增到758 bp的BACE1核心启动子,pGL4.21-BACE1载体经双酶切鉴定正确;HEK293细胞被该载体转染后经嘌呤霉素筛选得到6株稳定表达BACE1启动子的细胞株,其转录活性分别是对照组(HEK293/pGL4.21)的(134.7±22.3)、(634.0±13.9)、(437.6±6.1)、(805.5±5.5)、(492.8±59.1)、(1 021.1±46.6)倍(P=0.001).结论 成功构建了人BACE1基因启动子荧光素酶报告载体.
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| 关 键 词： | β位点裂解酶-1 核心启动子 荧光素酶报告载体 高通量药物筛选 |
Construction of HEK293 cell line stably expressing human BACE1 promoter and luciferase reporter gene |
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| Deng Changqing,Zhu Binglin,Long Yan,Luo Wei,Chen Guojun.Construction of HEK293 cell line stably expressing human BACE1 promoter and luciferase reporter gene[J].Chongqing Medical Journal,2017,46(3). |
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| Authors: | Deng Changqing Zhu Binglin Long Yan Luo Wei Chen Guojun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | β-site APP cleaving enzyme-1 core promoter luciferase reporter gene vector high-throughput drug screening |
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