miRNA-204靶向LC3B在Ang Ⅱ诱导的心肌肥厚中的作用

目的 探讨体外血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导原代大鼠心肌细胞肥大中miRNA-204靶向自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3 B)表达的作用.方法 以原代大鼠心肌细胞为研究对象,根据不同的处理分为对照组、Ang Ⅱ组、联合1组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感染阴性对照慢病毒载体)和联合2组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感染miRNA-204慢病毒过表达载体).各组在干预治疗后48～72 h,行激光共聚焦检测心肌细胞肥大变化,荧光定量PCR探测miRNA-204的表达,蛋白印迹测定LC3B的表达;同时,双荧光素酶活性基因报告验证miRNA-204的靶基因.结果 与对照组比较,AngⅡ组心肌细胞相对表面积明显增大,同时LC3B蛋白表达明显升高、miRNA-204表达上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).与联合1组比较,联合2组能明显减少LC3B蛋白表达,同时使心肌细胞相对表面积缩小(P＜0.05).进一步的荧光素酶活性报告基因实验结果提示,miR-NA-204能结合LC3B的非翻译区的野生型片段减少荧光素霉活性(P＜0.05);但不能结合其突变型片段灭活荧光素酶活性(P＞0.05).结论 miRNA-204能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用是通过靶向LC3B的表达实现的.