人端粒酶逆转录酶启动子调控下活性半胱氨酸蛋白酶-3治疗人卵巢癌

目的构建人端粒酶逆转录酶启动子（hTERTp）调控下的活性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）重组腺病毒载体并检测其对人卵巢癌的治疗作用。方法构建表达hTERTp调控下活性caspase-3的重组腺病毒载体AdHT-rev-casp3;以CMV启动子调控下活性caspase-3的重组腺病毒载体Ad-rev-casp3为对照,分别应用Western印迹、细胞计数试剂盒（CCK-8）法、流式细胞术和TUNEL检测AdHT-rev-casp3作用后卵巢癌细胞系AO及正常人脐静脉内皮细胞HUVEC中活性caspae-3蛋白p17和聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶（PARP）裂解片段p85的表达水平、细胞存活率和凋亡率;建立裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型,Western印迹检测AdHT-rev-casp3作用后裸鼠肿瘤及肝脏组织中活性caspase-3的表达情况,观测作用前后裸鼠生存率及肿瘤体积的变化以及裸鼠体内肝酶ALT和AST水平。结果AO细胞在AdHT-rev-casp3（MOI=70）感染后明显表达活性caspase-3蛋白p17和PARP的裂解片段p85蛋白,细胞存活率为55％,凋亡率为26％,而HUVEC在AdHT-rev-casp3感染后无明显p17和pS5表达,细胞存活率和凋亡率与阴性对照组差异无统计学意义;AdHT-rev—casp3作用后的裸鼠肿瘤组织中明显表达活性caspase-3,而肝脏组织中则无表达;AdHT—rev-casp3能明显延长荷瘤裸鼠的生存期[（177±12）dvs（106±11）d],抑瘤率为60％,其作用后裸鼠体内的肝酶水平无明显增高。结论hTERTp系统调控下rev-caspase-3的重组腺病毒AdHT-rev—casp3同时具有较强的致细胞凋亡能力和肿瘤靶向性,能明显抑制卵巢癌移植瘤的生长,延长荷瘤裸鼠的生存期,并明显降低revcaspase-3对肝脏的毒性作用。

The efficacy of autocatalytic casapse-3 driven by human telomerase reverse transcriptase promoter on human ovarian carcinoma