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| miR-192负性调控人肝癌细胞株HepG2中RB1基因的表达 | |
| 引用本文： | 谢琼慧,王梦漪,谢卫国,何星星,常莹,蒋翔,阮琼芳,林菊生.miR-192负性调控人肝癌细胞株HepG2中RB1基因的表达[J].华中科技大学学报(医学版),2011,40(6). |
| 作者姓名： | 谢琼慧 王梦漪 谢卫国 何星星 常莹 蒋翔 阮琼芳 林菊生 |
| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉,430030;武汉市第三医院烧伤研究所,武汉,430060 2. 华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科,武汉,430030 3. 武汉市第三医院烧伤研究所,武汉,430060 4. 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉,430030 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
| 摘 要： | 目的 探讨miR-192对人肝癌细胞株HepG2中RB1基因表达的调节作用.方法 运用生物信息学方法对miR-192进行靶基因预测并分析其潜在靶基因RB1;将含有miR-192结合位点的RB1 mRNA 3′端非编码区(3′UTR)片段和在miR-192结合位点进行突变的RB1 3′UTR突变片段克隆至报告基因载体pMIR-Report luciferase vector,重组质粒分别命名为pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut;将重组质粒、Beta-gal内参质粒和microRNA共转染HepG2细胞,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达;SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测miR-192对内源性RB1表达的调节作用.结果 生物信息学分析筛选出89个miR-192的潜在靶基因,RB1基因是其中之一;测序验证重组质粒pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut构建成功;过表达miR-192时,共转染pMIR-RB1质粒的细胞相对荧光素酶活性(4.80±0.36)较相应过表达miR-NC组(7.90±0.91)明显降低(P＜0.05),而共转染pMIR-Luc或pMIR-RB1-mut质粒的细胞相对荧光素酶活性pMIR-Luc:(7.68±1.04);pMIR-RB1-mut:(7.56±0.99)]较相应过表达miR-NC组pMIR-Luc:(7.86±0.73);pMIR-RB1-mut:(7.82±1.05)]无显著差异;上调miR-192水平显著降低HepG2细胞中内源性RB1 mRNA(0.56±0.10)vs (1.05±0.13)]和蛋白(47% vs 100%)的表达.结论 RB1基因是miR-192的一个靶基因,在HepG2细胞中,miR-192通过直接结合RB1 mRNA 3′UTR而负性调控RB1基因表达. |
| 关 键 词： | miR-192 RB1基因 HepG2细胞 基因表达 |
Negative Regulation of Expression of RB1 by miR-192 in Human Hepatocellular Carcinoma Cell Line HepG2 |
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| Xie Qionghui,Wang Mengyi,Xie Weiguo et al Institute of Liver Diseases.Negative Regulation of Expression of RB1 by miR-192 in Human Hepatocellular Carcinoma Cell Line HepG2[J].Journal of Huazhong University of Science and Technology(Health Sciences),2011,40(6). | |
| Authors: | Xie Qionghui Wang Mengyi Xie Weiguo Institute of Liver Diseases |
| Institution: | Xie Qionghui1,2,Wang Mengyi3,Xie Weiguo2 et al 1Institute of Liver Diseases,3Department of Oncology,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China 2Institute of Burns,Wuhan Third Hospital,Wuhan 430060,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | miR-192 RB1 gene HepG2 cells gene expression |
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