人血管内皮生长因子的克隆表达及活性鉴定

[目的]克隆人血管内皮生长因子165基因，并测定蛋白质的表达及鉴定其活性。[方法]用PCR法从人心脏cDNA文库中钓取目的基因VEGF165，插入质粒PCU19中并测序鉴定，构建真核表达重组质粒AdtrackCMV-VEGF165转染293细胞，用RNA斑点杂交和Western blot方法检测VEGF165基因表达，并通过Miles试验检测VEGF156蛋白活性。[结果]PCR产物为582bp，测序结果表明其序列正确，在RNA和蛋白水平检测到VEGF165基因表达，VEGF165蛋白相对分子质量为22ku，具有生物学活性。[结论]成功地克隆了有表达生物学活性的VEGF165基因。