构建体外联合培养条件下抗原诱导淋巴细胞反应的抑制模型

目的：观察在体外混合培养条件下，抗原能否诱导外周淋巴细胞反应抑制．建立体外淋巴细胞反应抑制模型。方法：实验于2003-10／2004—04在解放军第四军医大学西京医院心脏外科研究所实验室进行。取健康自愿者新鲜血液用于分离外周淋巴细胞。在体外条件下，以同种异体外周淋巴细胞分作供体和受体进行混合培养，采用四甲基偶氮唑盐比色法、电镜、姬姆萨一瑞氏染色、流式细胞仪检测对照组D组：首次混合培养淋巴细胞(PMLC)，即受体淋巴细胞(R)+用丝裂霉素处理过的供体淋巴细胞(DBm)混合培养72h所得]，A组(PMLC+DBm)、B组(PMLC+白细胞介素2中和单抗)、C组(PMLC+DBm+白细胞介素2中和单抗)等4组淋巴细胞的活性变化、活性变化的原因及其数量的变化。结果：①4组混合培养淋巴细胞在电镜、显微镜下变化：均可见细胞质染色浓集、核固缩裂解，凋亡小体形成。②四甲基偶氮唑盐比色法检测4组细胞活性即刺激指数：B组和C组比A、D组明显减弱(3．152&;#177;0．322，1．802&;#177;0．115，4．293&;#177;0．269．3．709&;#177;0．278，P&;lt;0．05)：C组细胞活性比B组也明显减弱(P&;lt;0．05)。③流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率：单向混合淋巴细胞培养后的T淋巴细胞的凋亡率Br组和Cr组高于Dr对照组和Ar组(11．25&;#177;0．78)％，(31．65&;#177;1．33)％。(5．95&;#177;0．24)％，(2．15&;#177;0．04)％，P&;lt;0．01]；Cr组细胞凋亡率明显高于Bf组(P&;lt;0．01)。结论：在体外混合培养条件下，实现抗原诱导外周淋巴细胞凋亡，从而构建体外淋巴细胞反应抑制模型是可行的。