单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP22真核表达载体的构建及其对Vero细胞活性的影响

目的构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染细胞蛋白22(ICP22)真核表达载体p EGFP-C2/ICP22并研究其对非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞活性的影响。方法经双酶切实验和测序验证,以Xfect为介导将构建的真核表达载体p EGFP-ICP22转染至Vero细胞,并通过反转录PCR(RT-PCR)和绿色荧光检验其在细胞中的表达,最后以MTT法检测细胞活性。结果 48 h后观察,发现转染重组质粒组细胞经RT-PCR验证有目的基因的转录,并通过荧光显微镜观察到融合蛋白表达。而空白质粒组只检测到荧光蛋白但未检测到目的基因转录本,且对照组未检测到荧光蛋白表达。转染重组质粒的细胞相对活性值为(82.39±6.44)%。结论成功构建了p EGFP-ICP22真核表达载体,实现了其在Vero中的表达,融合蛋白GFP-ICP22明显降低了细胞活性。为进一步探讨HSV-ⅡICP22的功能和HSV-Ⅱ潜伏复发机制奠定了实验基础。