人近端肾小管上皮细胞上表达黏附分子CD146与细胞的增殖生长状态

目的:观察正常人近端肾小管上皮细胞(HK2)是否表达黏附分子CD146,初步探讨CD146与肾小管上皮细胞的关系及其生理意义。方法:实验于2005-05/2006-02在上海交通大学医学院临床检验系实验室完成。①实验材料:人近端肾小管上皮细胞株(HK2,由中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所惠赠)。②实验干预:体外培养的HK2连续观察72h。③实验评估:采用倒置显微镜、光学显微镜下观察肾小管上皮细胞的形态;用反转录-聚合酶链反应方法检测CD146 mRNA的表达;流式细胞仪和免疫荧光法测定CD146蛋白质的表达及其定位;进一步在培养细胞的上清液中检测CD146的可溶性形式(sCD146)。结果:①肾小管上皮细胞的形态学观察和鉴定:传代培养的HK2三四天融合后呈铺路石样铺于培养瓶底,相关抗原检测抗人keratin阳性,抗Ⅷ因子相关抗原阴性。②CD146 mRNA水平的表达:HK2在培养早期(24h)即表达CD146 mRNA(0.092±0.012),但延长细胞的培养时间似乎并没有进一步改变CD146 mRNA的表达水平(0.097±0.005,0.113±0.015,P>0.05)。③CD146蛋白质水平的表达和定位:CD146不仅位于肾小管上皮细胞膜上,而且在细胞核和胞浆中也有表达。体外培养的HK2相互融合时,位于细胞膜上的CD146表达增强,呈线性、持续性地表达于细胞-细胞间的连接部位,同时胞内的CD146标记也相应增强。④细胞上清液中sCD146的检测:HK2上清液中存在CD146的可溶性形式(sCD146)。培养细胞观察24～72h,sCD146水平在48h升高[(18.00±0.80)μg/L],到72h达到高峰[(29.33±1.22)μg/L],与24h[(13.87±0.46)μg/L]比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:人近端肾小管上皮细胞组成性地表达CD146,是肾小管上皮细胞新的生物学标志;CD146在细胞内外的表达强度有赖于细胞间联系的建立和细胞增殖的程度,CD146在促进细胞生长和维持组织完整性等方面发挥重要作用。肾小管上皮细胞上清液中存在CD146的可溶性形式,sCD146在一定程度上也反映了细胞的生长和增殖状况。

Expression of CD146 in human proximal renal tubular epithelial cells and cell proliferation and growth